基于新型分子信標(biāo)信號(hào)放大技術(shù)檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因的研究.pdf

1、癌癥是嚴(yán)重危害人類健康和生命的重要疾病。其生長(zhǎng)迅速、耗能大、易轉(zhuǎn)移，難以徹底治愈。治療癌癥的關(guān)鍵因素是在其早期階段對(duì)其進(jìn)行精確的診斷并及時(shí)采取有效干預(yù)措施。癌癥是基因變異疾病，在早期階段準(zhǔn)確捕獲這些變異信息對(duì)癌癥的早期診斷具有重要的臨床價(jià)值，伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使利用分子生物學(xué)方法早期檢測(cè)腫瘤變異基因成為可能。傳統(tǒng)的腫瘤核酸標(biāo)志物檢測(cè)方法存在靈敏性差、成本高、操作復(fù)雜、對(duì)病人造成創(chuàng)傷等缺陷，因此亟待開發(fā)出易于操作、成本低、高靈敏、

2、無創(chuàng)的早期腫瘤診斷技術(shù)。因核酸探針具有易于合成、易于修飾、生物兼容性好、具有高效的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制等優(yōu)點(diǎn)，在腫瘤檢測(cè)及藥物靶向運(yùn)輸領(lǐng)域引起了廣泛關(guān)注?；谝陨险撌?，本研究構(gòu)建了基于核酸探針的信號(hào)放大傳感系統(tǒng)用于檢測(cè)p53基因和miR-21等腫瘤相關(guān)基因。
　　第一章構(gòu)建了基于回文的多功能分子信標(biāo)信號(hào)放大系統(tǒng)用于檢測(cè)p53基因。由于傳統(tǒng)的基于酶的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)中，除了識(shí)別元件和目標(biāo)分子外，引物、模板、熒光報(bào)告基團(tuán)也是必不可少，這樣既使檢測(cè)

3、繁瑣也增加了檢測(cè)成本。為了解決這個(gè)問題，并受到回文結(jié)構(gòu)啟發(fā)，我們首次將回文序列引入分子信標(biāo)3’端構(gòu)建了一種基于回文的熒光修飾的多功能分子信標(biāo)（簡(jiǎn)稱 P-MB），使得一個(gè)核酸探針同時(shí)具有識(shí)別元件、引物、模板、報(bào)告基團(tuán)等多種功能。我們的檢測(cè)體系在即使只有微量目標(biāo)存在時(shí)只需要一個(gè)核酸探針就可以實(shí)現(xiàn)熒光信號(hào)累積放大，從而檢測(cè)出低濃度的目標(biāo)分子。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明我們的檢測(cè)系統(tǒng)具有較高的靈敏性和特異性，并能檢測(cè)實(shí)際樣本中 p53基因；此外，研究證明我們

4、的檢測(cè)系統(tǒng)可以同時(shí)、較好地檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)分子。因此，該技術(shù)在核酸或其他分子檢測(cè)方面具有很好的應(yīng)用前景。
　　第二章構(gòu)建了基于環(huán)輔助的的新型分子信標(biāo)檢測(cè)miR-21的傳感系統(tǒng)。本研究中，我們?cè)O(shè)計(jì)的新型分子信標(biāo)在人工合成的環(huán)狀DNA探針輔助下具備識(shí)別目標(biāo)、引物、模板及熒光報(bào)告多種功能。該系統(tǒng)中每個(gè)環(huán)（簡(jiǎn)稱Cir）可以與三個(gè)分子信標(biāo)（MB）結(jié)合形成Cir/3MB。無目標(biāo)存在時(shí)，分子信標(biāo)發(fā)夾牢牢鎖住，一方面使熒光基團(tuán)Cy3熒光猝滅，另一方面