果蔬籽中還原型谷胱甘肽(GSH)和蛋白巰基(P-SH)含量的測(cè)定.pdf

1、生物體內(nèi)含有多種抗氧化劑，其中含半胱氨酸殘基的巰基化合物在維持生物體內(nèi)氧化還原氛圍中起到了不可替代的作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道;生物體內(nèi)的巰基化合物含量水平于與眾多疾病緊密相連，其含量高低也成為了許多病理?xiàng)l件的一個(gè)判斷標(biāo)志。由于生活節(jié)奏的日益加速，大多數(shù)人時(shí)常處在高壓力的狀態(tài)，這也刺激人體內(nèi)活性氧自由基的過量增加，從而加速機(jī)體的衰老，與此同時(shí)過量的活性氧自由基也易于誘發(fā)基因突變導(dǎo)致癌癥等惡性疾病的產(chǎn)生。另據(jù)研究表明;人體通過攝入外源性抗氧化劑，像

2、還原型谷胱甘肽(GSH)，N-乙?；?半胱氨酸等含巰基化合物，可明顯提高人體血液內(nèi)的GSH含量水平，這對(duì)提高機(jī)體抗病能力、保健均具有重要的作用[1]。因此，開發(fā)一種準(zhǔn)確、靈敏、經(jīng)濟(jì)又快速的測(cè)定含半胱氨酸殘基的巰基化合物含量的分析方法，并以此來篩選富含巰基化合物的各類食材作為外源性抗氧化補(bǔ)充劑，這對(duì)防病、治病等方面具有實(shí)際意義。
　　本研究利用對(duì)巰基具有選擇性的、并與其定量衍生化的衍生化試劑5，5'-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB

3、)，用含過量衍生化試劑的提取液，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的前處理方法，分別用HPLC法和光譜法實(shí)時(shí)測(cè)定了果蔬籽中GSH和P-SH含量，并從中篩選出了四種富含GSH和蛋白巰基的果蔬籽。HPLC測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柚子籽、南瓜籽、黃瓜子、冬瓜子中含較豐富的GSH和蛋白巰基(P-SH)，其中柚子籽中GSH和P-SH巰基含量分別為1.7304μmol/g(GSH)，1.2028μmol/g(P-SH)，南瓜籽含量分別為1.0445μmol/g(GS

4、H)和1.8878μmol/g(P-SH)。黃瓜籽和冬瓜籽中未檢測(cè)到GSH等小分子巰基化合物，但含相對(duì)豐富的蛋白巰基(P-SH)，其含量分別為4.0325μmol/g和4.1623μmol/g。對(duì)所選定的果蔬樣品也分別采用文獻(xiàn)已報(bào)道的熒光分光光度法和紫外-可見分光光度法進(jìn)行了比較測(cè)定，發(fā)現(xiàn)熒光光度法測(cè)定GSH含量和紫外-可見分光光度法測(cè)定結(jié)果略微偏離色譜測(cè)定結(jié)果，這可能是由于樣品中的共存組分對(duì)GSH的測(cè)定有一定的光譜干擾。本研究中采用的

5、HPLC測(cè)定方法的回收率在99.92％-101.32％之間，GSH和P-SH測(cè)定檢測(cè)限分別為0.1384μmol/g和0.2184μmol/g，基本滿足準(zhǔn)確測(cè)定的要求。
　　由于生物樣品成分復(fù)雜，在果蔬籽中含有大量的不飽和脂肪酸、黃酮類物質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)等。為了探討果蔬籽中其他化學(xué)成分對(duì)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果的影響，在本研究中將柚子籽和南瓜籽作為樣品，采用高效液相色譜法和光譜法分別對(duì)黃酮類化合物和不飽和脂肪酸對(duì)色譜和光譜測(cè)定干擾進(jìn)行了探究