芹菜葉黃酮類化合物分離純化及其結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、芹菜是一種兩年生的傘形科草本植物，在我國(guó)有著悠久的栽培歷史,且種植面積廣泛。芹菜中黃酮類化合物具有多種生物活性，主要包括抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、降血脂、降血壓等。其中芹菜葉是芹菜黃酮類化合物含量最多的一個(gè)部位。然而，針對(duì)芹菜葉中主要黃酮苷及其苷元的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定研究報(bào)道較少，無(wú)法全面闡述芹菜葉中黃酮類化合物具體化學(xué)結(jié)構(gòu)。因此，以芹菜葉為原料，優(yōu)化了芹菜葉黃酮苷最佳提取工藝;將一部分芹菜葉黃酮苷以酸水解法水解，獲得其水解產(chǎn)物，然后對(duì)芹菜葉

2、黃酮苷及其水解產(chǎn)物分別進(jìn)行制備型高效液相色譜進(jìn)一步分離純化，研究了芹菜葉黃酮苷及其水解產(chǎn)物制備型高效液相色譜分離的最佳分離條件;最后將這兩組分制備分離出的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定了芹菜葉黃酮類化合物單體結(jié)構(gòu)，獲得如下結(jié)果:
　　(1)通過(guò)研究聚酰胺樹(shù)脂靜態(tài)吸附與解吸特性和動(dòng)態(tài)吸附與解吸特性，獲得聚酰胺樹(shù)脂分離純化芹菜葉粗提取最佳工藝條件:上樣液黃酮濃度為0.3125 mg/mL，最大上樣液體積8倍柱體積(BV)，上樣pH值為5

3、.0，上樣流速及洗脫流速為2 BV/h，水洗體積為4BV，洗脫液乙醇體積分?jǐn)?shù)為40％，洗脫液體積為6 BV，在此工藝條件下，芹菜葉黃酮苷含量由純化前的6.15％提高到78.5％，總黃酮回收率為82.3％。
　　(2)將部分芹菜葉黃酮苷水解獲得其水解產(chǎn)物，再將芹菜葉黃酮苷及其水解產(chǎn)物這兩部分通過(guò)分析型高效液相色譜初步優(yōu)化到制備型高效液相色譜條件調(diào)整，確定芹菜葉黃酮苷及其水解產(chǎn)物最佳分離條件。其中制備型高效液相色譜分離芹菜葉黃酮苷最佳

4、色譜條件為:以SinoChrom ODS-BP(10μm，30 mm×250 mm)為色譜柱，柱溫控制為25℃，流動(dòng)相A為100％甲醇，流動(dòng)相B為0.1％甲酸，50∶50比例等度洗脫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)267和333 nm，上樣體積為100mL，洗脫流速為20min/min，可一次獲取7種較純單體化合物;制備型高效液相色譜分離芹菜葉黃酮苷水解產(chǎn)物最佳色譜條件為:以SinoChromODS-BP(10μm，30mm×250mm)為色譜柱，柱溫為

5、25℃，流動(dòng)相A為100％甲醇，流動(dòng)相B為0.1％甲酸，60∶40比例等度洗脫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)267和333nm，上樣量為100mL，洗脫流速為20min/min，可一次獲取5種較純單體化合物。
　　(3)經(jīng)過(guò)紫外光譜(UV)，高效液相色譜(HPLC)，超高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)和核磁共振技術(shù)(NMR)對(duì)制備分離出的組分進(jìn)行物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定，總共鑒定出11種化合物，其中包括1種酚酸類化合物和10種黃酮類化