甘草渣中黃酮類化合物的提取純化、分離鑒定及其抑菌活性研究.pdf

1、我國(guó)從20世紀(jì)50年代就開(kāi)始系統(tǒng)地研究了甘草不同種的化學(xué)成分,主要為三萜類、黃酮類和多糖類化合物,其中已鑒定的黃酮類化合物有300多個(gè)。近年來(lái),隨著甘草黃酮在藥理學(xué)上的深入研究,人們發(fā)現(xiàn)甘草中黃酮類化合物具有抑菌、抗炎、抗癌等藥理作用,因此日趨成為研究的熱點(diǎn)。據(jù)報(bào)道,在提取過(guò)甘草酸的甘草渣中含有大量的黃酮類化合物。以往,大量的甘草渣被隨意丟棄,致使甘草部分價(jià)值被遺失,同時(shí)甘草資源未能得到充分合理的開(kāi)發(fā)利用。隨著甘草利用度的擴(kuò)大,需求量迅

2、速增加,且人們無(wú)節(jié)制不合理的亂采濫挖甘草,使得有限的野生甘草資源受到威脅。在自然資源日趨緊張的今天,我們應(yīng)尋求一條綜合利用有限資源的道路。因此本文選取在種植甘草生產(chǎn)甘草酸后排出的甘草殘?jiān)鳛閷?shí)驗(yàn)原料,探索了甘草黃酮類化合物提取的最佳工藝,借助現(xiàn)代儀器檢測(cè)和分析手段分離鑒定了甘草渣中的化學(xué)成分,并對(duì)甘草渣化學(xué)成分的抑菌作用進(jìn)行了跟蹤和篩選。為甘草渣黃酮類化合物開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：第一,采用紫外分光光度法測(cè)

3、定甘草渣中甘草黃酮含量測(cè)定方法:選用蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品,NaNO2、Al(NO3)3、NaOH為顯色劑,測(cè)定波長(zhǎng)為510nm,獲得吸光度與濃度的線性回歸方程。該法簡(jiǎn)單易行,能夠快速測(cè)定出甘草渣中總黃酮含量；第二,通過(guò)單因素和正交實(shí)驗(yàn)分析,獲得了以甘草渣為原料提取甘草黃酮的最佳生產(chǎn)工藝及參數(shù):采用微波熱回流提取技術(shù),以體積比為1:4的乙酸乙酯與乙醇為溶劑體系、功率為500W、料液比1:10、溫度70℃、90min、提取2次,可實(shí)現(xiàn)甘草渣中總黃酮

4、含量為18.65％,收率為1.39％；第三,獲得D101大孔吸附樹(shù)脂法對(duì)甘草黃酮分離純化的工藝路線。工藝條件為:選用pH=7的40％乙醇水溶液作為甘草黃酮的上樣溶液,上樣濃度為0.9mg/mL,上樣速度為2BV/h;先用40％乙醇水溶液洗去部分雜質(zhì),再用5BV的80％乙醇水溶液進(jìn)行洗脫,洗脫速度為4BV/h,甘草黃酮含量為40.3％。；第四,對(duì)甘草殘?jiān)械幕瘜W(xué)成分進(jìn)行分離分析,從甘草渣浸膏中共分離出6種化合物,運(yùn)用波譜學(xué)方法,鑒定了3種

5、化合物的結(jié)構(gòu)。它們是甘草苷(Liquiritin)、芒柄花素(Formononetin)、β-谷甾醇(β-Sitosterol)；第五,通過(guò)對(duì)甘草渣乙醇提取物、甘草渣乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物、甘草乙醇提取物與甘草酸粗粉抑菌作用相比較,甘草渣乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物僅次于甘草乙醇提取物的抑制作用;并且甘草渣乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物對(duì)細(xì)菌的抑菌能力較真菌的抑菌能力強(qiáng):對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌的最低抑菌濃度分別為

6、1.77mg/mL、1.77mg/mL、3.53mg/mL、7.06mg/mL第六,對(duì)甘草渣乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分離出的甘草苷、芒柄花素進(jìn)行抑菌的研究、跟蹤和篩選,最終發(fā)現(xiàn)芒柄花素較甘草酸、甘草次酸的抑菌活性都強(qiáng),甘草苷則無(wú)抑菌效果。進(jìn)一步研究表明,芒柄花素對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有較好的抑菌作用,對(duì)大腸桿菌和白色念珠菌抑菌作用較弱,其中對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最低抑菌濃度為78.2μg/mL,對(duì)綠膿桿菌的和白色念珠菌最低