樹莓葉中黃酮類化合物的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定的研究.pdf

1、樹莓在我國北方山區(qū)分布廣泛，具有絕對的資源優(yōu)勢，而且栽培面積還在不斷的擴(kuò)大。樹莓不僅是一種美味水果，而且在化妝品、保健食品加工方面有著廣泛的用途，其根、莖、葉皆能入藥。有研究表明：樹莓果實和葉中黃酮化合物具有抗氧化和清除自由基功能。本試驗以東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝站提供的樹莓葉為原料，探索樹莓葉中的黃酮類物質(zhì)提取、分離工藝，并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析研究，為樹莓進(jìn)一步廣泛開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，以促進(jìn)樹莓葉的利用價值。 本試驗建立了樹莓葉中黃酮類

2、化合物的雙波長分光光度法和高效液相色譜法兩種分析檢測方法。通過波譜掃描確定雙波長分光光度法的測定波長為506nm、參比波長為572nm，此法能夠克服底液強(qiáng)吸收帶來的干擾。高效液相色譜分析法色譜條件為：采用柱(Agilent-l100C<,18>柱)；流動相為甲醇：0.4％磷酸(55：45)；流速為1.0mL/min；檢測器：Agilent-G1314A紫外檢測器；柱溫：室溫。 本試驗以樹莓葉作為研究對象，對其黃酮化合物進(jìn)行了提取

3、工藝研究。采用纖維素酶酶解與乙醇溶液浸提相結(jié)合的方法對提取各因素進(jìn)行了單因素和正交試驗，確定了試驗最優(yōu)提取條件為：纖維素酶濃度0.35mg/mL，酶解時間1.5h，酶解溫度50℃，介質(zhì)pH為4.0；液料比為20mL/g，浸提時間為2h，浸提溫度75℃，乙醇濃度為65％，總黃酮含量達(dá)3.46％。 在提取物分離工藝中，引入了大孔吸附樹脂、硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜新技術(shù)。通過對樹脂種類的篩選、影響吸附和解吸因

4、素的研究，建立了樹脂純化樹莓葉提取物的工藝：選用AB-8大孔吸附樹脂為吸附劑，分離樹莓葉黃酮較適宜的吸附條件為：流速2mL/min、濃度1.5834mg/mL、pH為6；較適宜的解吸條件為：洗脫劑為70％乙醇溶液，流速為1.5mL/min。以此工藝?yán)L制的洗脫曲線結(jié)果表明，采用此純化工藝取得較理想效果，洗脫峰集中，對稱性好，無明顯拖尾現(xiàn)象，洗脫率為45.62％。 樹脂純化后的浸膏用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用柱層析硅膠拌勻，真空干燥

5、，干法裝柱，用氯仿：甲醇梯度洗脫(100：0-80：20)，用正丁醇：水：乙酸(4：5：1)作展開劑，紙層析檢驗洗脫液，合并流份。用高效液相檢測硅膠純化后水解部分的成分，并測其含量，檢測出水解成分主要為甙元槲皮素和山奈酚，計算出原料中槲皮素和山奈酚的含量分別為186.4μg/g、52.9μg/g。 用Sephadex LH-20凝膠柱色譜對水解物進(jìn)行分離，用50％～90％甲醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫流速為1mL/min，通過TLC