基于醇質(zhì)體-絲素復(fù)合納米纖維膜的透皮免疫系統(tǒng)的構(gòu)建及其評(píng)價(jià)研究.pdf

1、疫苗的主要接種方式為皮下或者肌肉注射，大多數(shù)人取得了良好的接種效果。但是這些傳統(tǒng)方法存在針頭污染、引起疼痛并且需要專業(yè)醫(yī)護(hù)人員操作以及存儲(chǔ)和運(yùn)輸條件苛刻等缺陷。因此研究一種可以更加方便、高效的無(wú)針疫苗傳遞系統(tǒng)成為藥劑學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。透皮免疫(Transcutaneous immunization, TCI)是將抗原和抗原佐劑應(yīng)用于局部皮膚而誘導(dǎo)產(chǎn)生全身免疫反應(yīng)的新方法，它是一種免疫新策略，可克服傳統(tǒng)的注射接種方式存在的多種缺陷

2、。對(duì)于大分子的抗原蛋白來(lái)說(shuō)皮膚的角質(zhì)層是很難逾越的障礙，如何使大分子抗原突破角質(zhì)層的障礙進(jìn)入富含抗原提呈細(xì)胞（Antigen-presenting cells, APCs）的活性表皮層和真皮層就成為TCI系統(tǒng)研發(fā)的關(guān)鍵。
　　脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)與細(xì)胞膜相似，可以攜帶大量的藥物并且可以與細(xì)胞膜融合，具有較好的透皮性能。醇質(zhì)體（Ethosomes, Eth）是一種特殊的脂質(zhì)體，相比脂質(zhì)體，醇質(zhì)體由于含有一定量的醇而表現(xiàn)出更好的柔性，從而具有

3、更優(yōu)異的透皮性能。絲素（Silk fibroin, SF）納米纖維具有優(yōu)越的生物相容性和皮膚親和力。本課題組之前的研究證實(shí)基于 Eth/SF復(fù)合納米纖維膜的透皮給藥系統(tǒng)可有效促進(jìn)牛血清白蛋白和質(zhì)粒DNA等大分子模型藥物的透皮遞送。本研究在此基礎(chǔ)上，以大分子抗原蛋白OVA為模型藥構(gòu)建主動(dòng)靶向樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic cells, DCs）的 Eth/SF納米纖維膜透皮免疫系統(tǒng)，并對(duì)該系統(tǒng)進(jìn)行了較為全面的評(píng)價(jià)研究，主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如

4、下：
　?。?）構(gòu)建主動(dòng)靶向DCs細(xì)胞的醇質(zhì)體。采用薄膜分散法制備得到陽(yáng)離子醇質(zhì)體，在其表面修飾一層透明質(zhì)酸（HA）得到Eth-HA，在此基礎(chǔ)上再修飾一層半乳糖化殼聚糖（GC）得到Eth-GC。未經(jīng)修飾的醇質(zhì)體平均粒徑為135.4nm，帶正電，Eth-HA粒徑有所增加且?guī)ж?fù)電，而Eth-GC則帶正電，其粒徑介于前兩者之間。體外透皮實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)過(guò)修飾的醇質(zhì)體仍可有效攜載蛋白大分子透皮進(jìn)入到真皮層；
　?。?）Eth-GC透皮免疫

5、性能評(píng)價(jià)。從C57BL/6的小鼠體內(nèi)提取DCs前體細(xì)胞進(jìn)行抗原攝取實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí) Eth-GC可以特異性靶向 DCs細(xì)胞，使細(xì)胞表面CD11c、CD80和CD86等表面分子的表達(dá)水平提高，還能促進(jìn)細(xì)胞分泌更多的TNF-α、IL-2和IL-6，表明其可以促進(jìn)DCs的成熟。進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，負(fù)載OVA的Eth-GC（OVA@Eth-GC）可以透皮激發(fā)小鼠產(chǎn)生更多的抗OVA特異性抗體，說(shuō)明該醇質(zhì)體有效的激發(fā)了小鼠抗原特異性體液免疫反應(yīng)。<

6、br>　?。?）Eth-GC/SF復(fù)合納米纖維膜的構(gòu)建及其透皮免疫性能評(píng)價(jià)研究。利用綠色靜電紡技術(shù)制備OVA@Eth-GC/SF復(fù)合納米纖維膜TCI系統(tǒng)，掃描電鏡、顯微熒光術(shù)及MTT等實(shí)驗(yàn)證實(shí)該膜表面光滑，纖維分布均勻，細(xì)胞相容性良好，體外透皮實(shí)驗(yàn)顯示其具有良好的透皮釋藥性能；體外免疫誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)表明，該系統(tǒng)的細(xì)胞攝取率較高，細(xì)胞表面CD11c、CD80和CD86等表面分子的表達(dá)水平也明顯提升，表明負(fù)載于納米纖維中的醇質(zhì)體結(jié)構(gòu)不會(huì)受到破壞，

7、Eth-GC從納米纖維中釋放出來(lái)仍可靶向DCs細(xì)胞。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該系統(tǒng)可激發(fā)小鼠產(chǎn)生更多的抗OVA特異性抗體，分泌更多的細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6，并且能有效的抑制腫瘤的生長(zhǎng)速度，說(shuō)明該系統(tǒng)激發(fā)了有效的體液及細(xì)胞免疫。
　　綜上所述，本研究制備的Eth-GC及Eth-GC/SF復(fù)合納米纖維膜TCI系統(tǒng)可以有效的將抗原蛋白傳遞至皮膚的活性表皮層和真皮層，并激發(fā)有效的免疫反應(yīng)，在TCI等生物醫(yī)藥相關(guān)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景