綠色工藝構(gòu)建負(fù)載脂質(zhì)體的絲素蛋白超細(xì)纖維支架及其評價研究.pdf

1、長期以來,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染一直是基因轉(zhuǎn)染技術(shù)中主要的非病毒轉(zhuǎn)染手段,它具有操作簡單、無致瘤風(fēng)險以及無免疫原性等優(yōu)點。近年來的研究表明,通過包埋嵌入、表面吸附、共價接枝等方式納入組織工程支架體系中的載藥脂質(zhì)體由于受到支架材料的保護(hù)和牽制,其轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效果比單純用沒有支架的脂質(zhì)體更好,藥物分子的釋放更平穩(wěn)持久,對細(xì)胞的誘導(dǎo)效果更佳。顯然,脂質(zhì)體技術(shù)的介入將使功能性支架的制備更為方便,支架的功能化設(shè)計也將朝著更精細(xì)的方向發(fā)展。受此啟發(fā),本研究采用靜

2、電紡絲技術(shù)成功的將載藥脂質(zhì)體納入絲素蛋白納米纖維支架,制備得到一種新型的負(fù)載脂質(zhì)體的絲素蛋白超細(xì)纖維支架,以期應(yīng)用于各類組織再生。主要研究內(nèi)容如下:
　　 (1)采用綠色環(huán)保的水溶液靜電紡絲技術(shù)制備了絲素蛋白-脂質(zhì)體超細(xì)纖維膜,整個制備過程中不涉及任何有毒有害的物質(zhì)。通過掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡、紅外光譜、核磁共振分析在脂質(zhì)體加入前后絲素蛋白超細(xì)纖維的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)的改變。掃描電子顯微鏡顯示3個濃度的脂質(zhì)體加入,形成的超細(xì)

3、纖維都為表面光滑,粗細(xì)均勻,呈扁平狀結(jié)構(gòu)。透射電鏡揭示脂質(zhì)體分布在絲素蛋白納米纖維內(nèi)部。在經(jīng)過75％(v/v)的乙醇蒸汽處理18h以后,納米纖維由親水的silkⅠ結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)槭杷膕ilkⅡ結(jié)構(gòu),為后續(xù)的實驗奠定了基礎(chǔ)。
　　 (2)以牛血清白蛋白作為模式藥物,研究絲素蛋白-脂質(zhì)體超細(xì)纖維膜的體外藥物釋放行為。由于有脂質(zhì)體和絲素蛋白纖維的保護(hù)-藥物活性不容易遭到破壞,并能起到延緩釋放的作用,釋放時間達(dá)到156h,之后趨于平衡。在緩

4、釋的整個過程中,纖維膜的形貌保持完整。根據(jù)藥物釋放結(jié)果,確定脂質(zhì)體含量為7.4％較為合適。
　　 (3) MTT和SEM檢測表明脂質(zhì)體的含量并不直接影響到細(xì)胞在絲素蛋白-脂質(zhì)體超細(xì)纖維膜上的生長和粘附。以pEGFP-N1為模型藥物的研究表明,這種絲素蛋白-載藥脂質(zhì)體超細(xì)纖維支架所攜帶的基因藥物能夠高效的轉(zhuǎn)染進(jìn)入生長在支架上的細(xì)胞中并正常表達(dá)。
　　 綜上所述,本課題制備的絲素蛋白-脂質(zhì)體超細(xì)纖維膜作為一種新型的藥物控釋載