超高壓處理下芽孢皮層肽聚糖支架非酶水解的研究.pdf

1、本文研究了HPTS（High Pressure Thermal Sterilization，HPTS，熱輔助超高壓殺菌技術(shù)）條件下芽孢皮層肽聚糖支架(peptidoglycan，PG)的水解變化趨勢，并初步探討了其水解機(jī)制。以PG結(jié)構(gòu)化學(xué)鍵斷裂為研究主線，先用酶水解PG，使用超高壓、熱和化學(xué)物質(zhì)不同組合手段，運(yùn)用紫外吸收光譜、反相高效液相色譜、基質(zhì)輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜、電噴霧-離子阱，四極桿液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜等分析其結(jié)構(gòu)的變化，運(yùn)用質(zhì)譜技

2、術(shù)研究PG結(jié)構(gòu)和各種處理下的水解規(guī)律。揭示和完善超高壓條件下PG水解的相關(guān)機(jī)制，闡明超高壓殺菌機(jī)理。研究得主要結(jié)論如下:
　　1、首先研究了提取PG的方法，然后通過試驗(yàn)確定RP-HPLC法分析PG水解物的最佳條件。在Welch Ultimate AQ-C18色譜柱上，柱溫為30℃，流速為1 mL/min，紫外檢測波長為206 nm，梯度洗脫時間為120 min，流動相為甲醇溶液和0.05 M磷酸鹽緩沖溶液(pH=4.31)，在0～

3、5 min時使用100％磷酸鹽緩沖溶液，在5～120 min時流動相中的甲醇濃度從0梯度增加到30％。結(jié)果表明，用RP-HPLC法分析PG水解物是可行的，為研究高壓熱處理下PG支架水解機(jī)理，并進(jìn)一步闡明高壓熱處理殺滅細(xì)菌芽孢的機(jī)理提供了研究方法支撐。
　　2、研究了常溫下超高壓和超高壓結(jié)合乙醇對PG作用。設(shè)置不同梯度壓力對PG進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):常溫下150 MPa、300 MPa、450 MPa處理PG，并未發(fā)現(xiàn)其水解。450

4、MPa壓力結(jié)合15％、75％乙醇對PG進(jìn)行處理時，并未發(fā)現(xiàn)其發(fā)生水解。研究了HPTS處理對PG和枯草桿菌芽孢的滅活效果和機(jī)制。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):60℃、530 MPa處理15min時，PG發(fā)生了水解，此條件協(xié)同pH=4緩沖液、75％乙醇并未發(fā)現(xiàn)PG發(fā)生水解，其對PG可能有保護(hù)作用。60℃、530 MPa處理15 min時，枯草桿菌芽孢上清液析出物明顯高于沒有壓力條件處理的。
　　3、研究了PG水解物機(jī)制輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜(MALDI