具抑菌、抗炎及抗氧化功能的復(fù)合植物水提物制備及實驗動物應(yīng)用研究.pdf

1、針對目前植物提取物對復(fù)方的研究較少且作用機(jī)制不明等問題，本課題在此基礎(chǔ)上，通過體外抑菌、抗氧化和抗炎試驗，在小鼠上的安全應(yīng)用劑量、促生長效果研究及腸黏膜損傷試驗，研制出多功能且性價比較高的新型提取物復(fù)方，為最終應(yīng)用到畜禽養(yǎng)殖中提供科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.單種植物水提物的體外試驗結(jié)果
　　試驗選取女貞子、桂枝等24種植物原料，制備0.5mg/μL生藥的水提液。抑菌試驗結(jié)果:石榴皮、青蒿、桂枝和肉桂對大腸桿菌抑制效

2、果較強(qiáng)，抑菌率均高于50％，其他抑菌率較低或未檢出抑菌效果。抗炎試驗結(jié)果:除青蒿、補(bǔ)骨脂、魚腥草和竹葉外，其余植物均可抑制LOX活力，石榴皮、雞血藤、厚樸、檸檬和迷迭香的抑制率均高于90％?？寡趸囼灲Y(jié)果:石榴皮、迷迭香和秦皮具有較強(qiáng)DPPH自由基清除能力，其IC50分別為0.08、0.31和0.71mg/mL，其余均在1.04～199.27mg/mL之間。
　　2.植物水提物的組合及優(yōu)勢復(fù)方研究
　　根據(jù)上述結(jié)果結(jié)合其性價

3、比，選取石榴皮等5種原料為復(fù)方成分，采用正交設(shè)計進(jìn)行不同配比研究，最終得出3個優(yōu)勢復(fù)方，分別以抑菌(C1)、抗炎(C2)和抗氧化(C3)功能為主。體外試驗驗證結(jié)果:C1、C2和C3的最小抑菌濃度(MIC)均為125mg/mL，抗炎IC50分別為0.434、0.138和0.166mg/mL，抗氧化IC50分別為0.31、0.40和0.22mg/mL。
　　3.復(fù)方安全應(yīng)用劑量研究
　　選取78只Balb/c雌性小鼠，按體重隨機(jī)

4、分為4個處理:對照組（灌胃生理鹽水），C1、C2和C3組，其中C1、C2和C3均設(shè)125、250、500、1000mg/kg BW4個水平（灌胃相應(yīng)水提液），試驗期21天。試驗結(jié)果:整個飼養(yǎng)試驗期間，所有實驗小鼠精神狀態(tài)良好，毛色光亮、未見異常死亡現(xiàn)象;低劑量C1和C2對小鼠生長性能無不良影響，高劑量C3組小鼠的生長性能較差;在正常范圍內(nèi)，C1、C2有提高小鼠免疫器官指數(shù)的趨勢，低劑量C1和C2組血液白細(xì)胞計數(shù)(WBC)極顯著提高(P＜

5、0.01)，各水平C3組小鼠免疫器官指數(shù)和血液白細(xì)胞計數(shù)(WBC)均無顯著變化(P＞0.05)。由此發(fā)現(xiàn)添加量過高可能會對小鼠的生長性能、臟器指數(shù)和血常規(guī)參數(shù)有負(fù)面影響，故復(fù)方的添加劑量應(yīng)當(dāng)?shù)陀?50mg/kg BW。
　　4.復(fù)方促生長效果研究
　　根據(jù)安全應(yīng)用劑量研究結(jié)果，選取C1和C2兩個復(fù)方開展對小鼠促生長效果的研究。選取90只15g左右的Balb/c雌性小鼠，分為3組:對照組（正常飲水），C1組（飲水中添加0.6m

6、g/ml C1）、C2組（飲水中添0.3mg/ml C2），每組設(shè)3個重復(fù)，試驗期21天。試驗結(jié)果表明:與對照組相比，C1、C2均可使小鼠日增重提高13.3％(P＜0.01)。
　　5.復(fù)方對小鼠腸道健康的保護(hù)作用
　　選取60只Balb/c雌性小鼠，分為4個處理:對照組（正常飲水）、LPS組（正常飲水）、LPS+C1組（飲水中添加C1）、LPS+C2組（飲水中添加C2），飼養(yǎng)試驗至第21天，對照組注射生理鹽水，其他3組注射

7、LPS，分別于LPS注射后4h（8只）和24h（7只）屠宰、取樣。LPS注射后4h試驗結(jié)果表明:與對照組相比，LPS組空腸隱窩深度CD極顯著升高(P＜0.01)，VH/CD極顯著降低(P＜0.01);與LPS組相比，LPS+C1和LPS+C2組VH/CD均極顯著升高(P＜0.01);LPS+C1組IL-6基因表達(dá)極顯著降低(P＜0.01);LPS+C2組IL-1β和IL-6表達(dá)分別降低40.1％和60.5％(P＜0.01)。LPS注射后

8、24h試驗結(jié)果表明，與LPS組相比，LPS+C1組空腸VH極顯著升高(P＜0.01)，VH/CD顯著升高(P＜0.05);LPS+C2組空腸VH極顯著升高(P＜0.01);LPS+C1組TLR4基因的表達(dá)量極顯著降低(P＜0.01);LPS+C2組IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4基因的相對表達(dá)量分別降低52.3％、59.5％、46.3％、57.9％(P＜0.01)。
　　綜上，本課題研制出2個安全、有效的植物水提物復(fù)方（