山藥黏液酶解物的制備及免疫活性研究.pdf

1、作為傳統(tǒng)保健性食品，山藥供需量大，具有較多生理活性，在國(guó)內(nèi)外受到普遍歡迎，大量研究發(fā)現(xiàn)，山藥中的主要特點(diǎn)是含有大量多糖-蛋白復(fù)合物，即黏液，但黏液黏度極大，不利于生產(chǎn)相應(yīng)的食品及保健品，因此本文以鐵棍山藥(Dioscorea opposite Thunb.cv.Tiegun)為研究對(duì)象，選用胰蛋白酶、纖維素蛋白酶、復(fù)合蛋白酶對(duì)山藥黏液進(jìn)行酶解，運(yùn)用正交試驗(yàn)優(yōu)化三種酶的酶解工藝，對(duì)山藥黏液及其酶解物的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了測(cè)定，并探索了不同酶解物

2、對(duì)免疫抑制小鼠的免疫器官、細(xì)胞、分子的調(diào)節(jié)能力，以期獲得山藥黏液及其酶解物對(duì)機(jī)體的免疫活性影響差異及結(jié)構(gòu)與免疫活性間的關(guān)系，為山藥黏液在保健品研發(fā)、新型食品開(kāi)發(fā)及免疫藥品研制提供理論依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴鹽提醇沉方法提取山藥黏液，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化山藥黏液的提取工藝，研究了 NaCl濃度、浸提時(shí)間、料液比對(duì)黏液中多糖和蛋白含量的影響，確定了山藥黏液提取最佳工藝為：NaCl濃度為0.6mol/L，浸提時(shí)間24h，料液比1:

3、10；在此提取條件下，總蛋白含量為56.93％，總糖含量為40.87%，黏液的得率為0.313%。通過(guò)正交試驗(yàn)分別優(yōu)化胰蛋白酶、纖維素酶、復(fù)合蛋白酶酶解山藥黏液的工藝，研究了加酶量、酶解 pH、酶解時(shí)間、酶解溫度對(duì)胰蛋白酶和復(fù)合蛋白酶酶解過(guò)程中水解度的影響，以及在纖維素酶酶解過(guò)程中還原糖含量的影響，得到胰蛋白酶酶解山藥黏液的最佳工藝條件為：加酶量為5000U/g，酶解 pH值為8，酶解溫度為40℃，酶解時(shí)間4h，在此條件下，胰蛋白酶酶解

4、山藥黏液的水解度為46.78%；纖維素酶酶解山藥黏液的最佳工藝條件為加酶量為6000U/g，酶解溫度為50℃，酶解pH值為5.5，酶解時(shí)間3h，在此條件下，纖維素酶酶解山藥黏液的還原糖含量為30.49%；復(fù)合蛋白酶酶解山藥黏液的最佳工藝條件為加酶量為7000U/g，酶解 pH值為7，酶解溫度為40℃，酶解時(shí)間為2h，在此條件下，復(fù)合蛋白酶酶解山藥黏液的水解度為30.36%。⑵山藥黏液及其酶解物的結(jié)構(gòu)特征：SDS-PAGE測(cè)定結(jié)果顯示纖維

5、素酶酶解物除外，酶解后分子量變?。唤?jīng)紅外掃描，山藥黏液及其酶解物中存在二級(jí)結(jié)構(gòu)為α-螺旋結(jié)構(gòu)，糖苷鍵為吡喃型的分子，酶解切斷了山藥黏液分子間的氫鍵，其中纖維素酶作用于β-(1-4)糖苷鍵；紫外全波長(zhǎng)掃描中，利用β-消除反應(yīng)，證明山藥及其酶解物中存在 O-糖苷鍵，3種酶酶解并沒(méi)有破壞此糖苷鍵；電鏡掃描后發(fā)現(xiàn)四種物質(zhì)分子在分子間距、分子形態(tài)上有差異。⑶山藥黏液及其酶解物的免疫活性：通過(guò)免疫抑制小鼠體內(nèi)免疫器官指數(shù)，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力，遲發(fā)

6、型變態(tài)反應(yīng)，血清溶血素含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)比較了山藥黏液及其酶解物的免疫活性，得出不同濃度的山藥黏液及酶解物均可提高小鼠免疫調(diào)節(jié)能力，具有劑效關(guān)系，且酶解物的免疫調(diào)節(jié)能力高于黏液；小鼠脾臟和小腸石蠟切片實(shí)驗(yàn)，得出山藥黏液及酶解物可以通過(guò)提高脾臟的白髓面積和小腸絨腺比(V/C)，提高小鼠的免疫防御能力，且胰酶酶解物的免疫調(diào)節(jié)能力較強(qiáng)；小鼠脾臟細(xì)胞因子 mRNA表達(dá)量的測(cè)定結(jié)果說(shuō)明，山藥黏液及其酶解物可以通過(guò)恢復(fù) Th2偏移狀態(tài)來(lái)調(diào)整免疫機(jī)能，且纖