棉籽蛋白的制備及其酶解物抗氧化與ACE抑制活性的研究.pdf

1、棉籽粕是棉籽榨油后的副產(chǎn)物，蛋白質(zhì)含量豐富、價(jià)格低廉，但利用率很低。本課題以棉籽粕為原料，對(duì)棉籽蛋白的制備方法（脫毒方法）、酶法水解、酶解物的精制純化及其抗氧化活性、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）抑制活性進(jìn)行了研究，旨在獲得優(yōu)質(zhì)的棉籽分離蛋白（CPI），探討棉籽蛋白酶解物的抗氧化活性和ACE抑制活性，為棉籽蛋白和ACE抑制肽的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)和技術(shù)基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1．棉籽粕提取蛋白及脫毒工藝的研究。以棉籽

2、粕為原料，比較研究了不同棉籽蛋白提取及脫毒方法，利用正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)優(yōu)化棉籽蛋白的提取工藝。結(jié)果表明，熱堿法既能保證較高的蛋白得率和含量，還具有很好的脫酚效果；通過(guò)四元二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)，得到最佳工藝條件為pH10.7，溫度60.2℃，時(shí)間1.07h，液固比16.7：1，其蛋白得率為67.48％，蛋白質(zhì)含量為90.78％，游離棉酚含量為16.8mg/kg。
　　 2．多酶組合連續(xù)水解制備棉籽低苦味活性肽的研究。以水解度為指

3、標(biāo)，采用酶法水解制備棉籽生物活性肽，在單酶水解的基礎(chǔ)上探討雙酶水解工藝。確定堿性蛋白酶和胰蛋白酶為最佳的雙酶組合，其最佳酶解條件為：溫度50℃，pH8.2，底物濃度5％，水解時(shí)間3.5h，總酶活添加量6000u/g（蛋白），堿性蛋白酶和胰蛋白酶的酶活比3：1，進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)水解度能達(dá)到26.67％，肽得率為87.35％。采用風(fēng)味酶繼續(xù)水解，有效降低了苦味，肽得率為85.26％。
　　 3．棉籽蛋白酶解ACE抑制肽脫鹽方法的研究。綜

4、合比較了001×7、201×7離子交換樹(shù)脂、MWCO100透析袋和DA201-C大孔吸附樹(shù)脂對(duì)棉籽蛋白水解液的脫鹽效果，結(jié)果表明：DA201-C大孔吸附樹(shù)脂的脫鹽效果最好，控制流速為3mL/min時(shí)，脫鹽率可達(dá)到94.78％，氮回收率為86.32％，脫鹽后疏水性氨基酸得到了有效富集，ACE抑制率顯著提高。
　　 4．棉籽蛋白酶解物氨基酸組成分析、相對(duì)分子量大小分布的研究。對(duì)棉籽蛋白及其酶解物的氨基酸組成進(jìn)行了分析比較，采用Sep

5、hadex G-25對(duì)棉籽蛋白酶解物進(jìn)行了初步分離，結(jié)合質(zhì)譜分析探討其分子量分布范圍，比較了凝膠層析分離的各組分的ACE抑制活性。結(jié)果表明：棉籽蛋白中谷氨酸、精氨酸含量較高，蛋氨酸含量較低，酶法水解后氨基酸組成無(wú)明顯變化；凝膠層析圖證明棉籽蛋白酶解物的分子量是連續(xù)分布的，且大部分棉籽肽分子量在13000Da以下，組分Ⅲ（分子量<1000Da）的ACE抑制活性最高，質(zhì)譜分析進(jìn)一步證明ACE抑制活性肽是分子量主要分布在400-1000Da之

6、間的短肽。
　　 5．棉籽蛋白各組分的抗氧化能力比較。研究了棉籽分離蛋白（CPI）、棉籽蛋白酶解物（CH）、3-8kD的酶解物（CH（3-8kD））、<3kD酶解物（CH（<3kD））的抗氧化能力，比較了一定濃度范圍內(nèi)的總抗氧化能力、清除DPPH自由基能力以及清除羥自由基的能力，并比較了凝膠層析分離得到的各組分的抗氧化能力。結(jié)果表明，棉籽蛋白各組分具有抗氧化活性，但抗氧化能力都比較差，其抗氧化活性與濃度之間呈量效關(guān)系。CPI的抗

7、氧化活性最弱，酶解后其抗氧化活性有所提高；超濾分級(jí)得到的各組分中，CH（3-8KD）抗氧化活性最高，而CH（<3KD）的抗氧化效果最低，凝膠層析分離的各組分中組分Ⅱ的抗氧化活性最高。
　　 6．棉籽蛋白酶解物對(duì)SHR大鼠血壓影響的研究。研究了棉籽蛋白酶解后不同組分的ACE抑制活性，對(duì)大鼠單次灌胃和連續(xù)灌胃后，測(cè)定其尾部收縮壓（SBP）和體內(nèi)血清的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）活性。結(jié)果表明：棉籽蛋白酶解后ACE抑制活性明顯提高，脫鹽