防己等中藥活性成分與DNA相互作用的研究.pdf

1、中藥有效成分的識(shí)別及藥理研究是從中藥產(chǎn)業(yè)中分化出來的新興領(lǐng)域,本文以微超濾-HPLC的分析手段,針對(duì)中藥防己、茵陳、丹參滴丸中有效成分的高效液相色譜分析方法,利用反相色譜對(duì)中藥有效成分進(jìn)行了定性分析,根據(jù)保留時(shí)間和相應(yīng)的紫外可見光譜圖確定了防己、茵陳、丹參滴丸的各活性成分色譜峰。并對(duì)其進(jìn)行了定量分析,工作曲線線性關(guān)系良好,由高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定得到的結(jié)果精密度很高,重現(xiàn)性較好。
　　采用HPLC方法,結(jié)合紫外可見光譜,對(duì)上述三種中

2、藥中的多種活性成分的檢測(cè)波長(zhǎng)和流動(dòng)相進(jìn)行了考察,建立了防己、茵陳、丹參滴丸的各活性成分的定性定量方法,分別對(duì)防己乙醇提取物中的粉防己堿、防己諾林堿兩種主要有效成分、茵陳乙醇提取物中的綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基苯乙酮三種成分、市售丹參滴丸的乙醇提取物中的丹參素鈉、原兒茶醛兩種成分進(jìn)行了定性定量分析。
　　采用微超濾-HPLC分析方法考察了不同ct-DNA、mtDNA、大鼠肝臟DNA對(duì)防己、茵陳、丹參滴丸中活性成分的結(jié)合活性,建立ct-D

3、NA、mtDNA、大鼠肝臟DNA的體外相互作用指紋分析方法。防己中防己諾林堿、粉防己堿與DNA結(jié)合活性較高,丹參滴丸中丹參素鈉、原兒茶醛與ct-DNA結(jié)合活性較低。以紫外-可見光譜法測(cè)定相互作用的方式,以生物堿類物質(zhì)粉防己堿、防己諾林堿分別與ct-DNA、mtDNA相互作用,并判斷出粉防己堿與ct-DNA、mtDNA相互作用為嵌入作用;防己諾林堿與ct-DNA、mtDNA相互作用為溝槽作用。
　　為進(jìn)一步考察藥物活性成分與DNA結(jié)

4、合特性,對(duì)活性成分與mtDNA間競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合進(jìn)行了研究。防己諾林堿(被競(jìng)爭(zhēng)試劑)濃度為125μg/mL,粉防己堿(競(jìng)爭(zhēng)試劑)濃度遞增,它們?cè)?25μg/mL以內(nèi)是協(xié)同關(guān)系,能促進(jìn)彼此與DNA結(jié)合;當(dāng)粉防己堿(競(jìng)爭(zhēng)試劑)的濃度繼續(xù)增加,二者與mtDNA的結(jié)合率均呈下降趨勢(shì),說明此時(shí)二者是競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。當(dāng)粉防己堿(被競(jìng)爭(zhēng)試劑)濃度為125μg/mL,防己諾林堿(競(jìng)爭(zhēng)試劑)濃度由50μg/mL逐漸增加時(shí),粉防己堿(被競(jìng)爭(zhēng)試劑)防己諾林堿(競(jìng)爭(zhēng)試劑)

5、與mtDNA相互作用的結(jié)合率均波動(dòng),無明顯的競(jìng)爭(zhēng)和協(xié)同關(guān)系,但基本保持一致趨勢(shì)。同理,被競(jìng)爭(zhēng)試劑(香豆素)的濃度100μg/mL,競(jìng)爭(zhēng)試劑(對(duì)羥基苯乙酮)濃度當(dāng)競(jìng)爭(zhēng)試劑的濃度由50μg/mL增加至100μg/mL時(shí),競(jìng)爭(zhēng)試劑(對(duì)羥基苯乙酮)和被競(jìng)爭(zhēng)試劑(香豆素)與mtDNA相互作用的結(jié)合率都顯著增加,說明它們?cè)?00μg/mL以內(nèi)是協(xié)同關(guān)系,能促進(jìn)彼此與DNA結(jié)合;當(dāng)競(jìng)爭(zhēng)試劑的濃度繼續(xù)增加,二者與mtDNA的結(jié)合率均呈下降趨勢(shì),說明此時(shí)