中藥葛根有效成分提制分析及抗氧化活性成分篩選以及與DNA相互作用研究.pdf

1、中藥葛根是多年生豆科葛屬植物的干燥根塊,為我國(guó)常用的傳統(tǒng)藥食兩用植物。葛根中富含異黃酮類化合物、優(yōu)質(zhì)淀粉,還含有人體必需氨基酸和硒、鋅、錳、鍺等多種微量元素,其中最主要的有效成分是葛根異黃酮。葛根具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和腦血管,降低心肌耗氧量,改善心腦血液循環(huán),增強(qiáng)機(jī)體免疫力,降低血糖含量等多種藥用功能。目前主要用于高血壓、糖尿病及心腦血管疾病的治療,異黃酮葛根素是治療心腦血管疾病的代表藥物之一?；诟鸶卺t(yī)藥、食品和化妝品當(dāng)中的藥用價(jià)值,對(duì)

2、葛根活性成分進(jìn)行提制分析及對(duì)抗氧化活性成分進(jìn)行篩選,并對(duì)其與生物大分子DNA的作用方式進(jìn)行研究具有重要意義。本研究主要從以下三個(gè)方面開(kāi)展工作:
　　 (1)葛根中葛根素的提制分析
　　 以野葛根為研究對(duì)象,研究微波酸水解法提取葛根中的葛根素(puerarin),并將所擬提取方法同超聲酸水解、微波輔助萃取、冷凝回流提取及室溫冷浸4種方法進(jìn)行對(duì)比。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)對(duì)微波酸水解提取條件進(jìn)行優(yōu)化,以葛根素得率為指標(biāo),考察

3、鹽酸濃度、乙醇濃度、萃取溫度和萃取時(shí)間等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。采用HPLC-UV分析方法檢測(cè)葛根素的含量。實(shí)驗(yàn)采用C18(日本島津15 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱,甲醇:0.4％冰乙酸=40:60(v/v)為流動(dòng)相,流速為0.8 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm,進(jìn)樣體積為10μL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,各因素對(duì)葛根素提取率影響的主次順序?yàn)?鹽酸濃度>萃取溫度>乙醇濃度>萃取時(shí)間。最佳提取工藝條件為:鹽酸濃度0.4 mol/L,乙醇

4、濃度80％,萃取溫度60℃,萃取時(shí)間3 min。葛根素測(cè)定線性回歸方程為Y=2.22×107X-456131.5(r=0.9994),加標(biāo)回收率在96.3％～103.6％之間,RSD為3.2％。所擬方法具有良好的精密度和重現(xiàn)性。用所擬方法進(jìn)行實(shí)際樣品分析,結(jié)果滿意。
　　 (2)葛根中抗氧化活性成分的篩選和鑒定
　　 從天然產(chǎn)物,尤其是從具有臨床應(yīng)用基礎(chǔ)的傳統(tǒng)植物藥中尋找安全、低毒、高效的天然抗氧化劑具有重要意義。本研究

5、以葛根總異黃酮為原料,通過(guò)其對(duì)DPPH自由基的清除作用,結(jié)合HPLC和MS分析檢測(cè)技術(shù)來(lái)篩選并鑒定其內(nèi)在的抗氧化活性成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:葛根異黃酮中活性成分葛根素、大豆苷和大豆苷元這三種異黃酮具有自由基清除活性。進(jìn)一步研究采用不同反應(yīng)體系結(jié)合可見(jiàn)分光光度法測(cè)定葛根素、大豆苷和大豆苷元這三個(gè)物質(zhì)清除DPPH自由基和HO自由基的能力以及螯合Fe2+金屬離子的能力。結(jié)果表明,葛根素、大豆苷和大豆苷元均具有不同程度的自由基清除能力及螯合金屬離子

6、的能力,從而表現(xiàn)為抗氧化活性。其抗氧化活性的強(qiáng)弱與其分子結(jié)構(gòu)中酚羥基的數(shù)目有關(guān)。本研究為葛根提取物特別是葛根素對(duì)心腦血管疾病治療提供了有力的佐證。
　　 (3)葛根素與鮭魚(yú)精子DNA相互作用方式的研究
　　 藥物分子與DNA相互作用的研究對(duì)闡述藥物的治病機(jī)理及藥物設(shè)計(jì)方面具有重要意義。本研究采用紫外-可見(jiàn)分光光度法、熒光光譜法和同步熒光光譜法并借助中性紅光譜探針(NR)研究了葛根素與鮭魚(yú)精子DNA的相互作用方式。實(shí)驗(yàn)結(jié)果