逆體積排阻層析法分析層析介質(zhì)的孔徑分布.pdf

1、層析是生物大分子分離純化的有效方法，層析分離的效率直接受介質(zhì)孔結構的影響，其中孔徑分布尤為重要。逆體積排阻層析法是一種測定多孔材料孔徑分布的新方法，比傳統(tǒng)方法（如氣體吸附法、壓汞法等）擁有更多優(yōu)勢，特別適合于親水軟性凝膠層析介質(zhì)。本文綜述了逆體積排阻層析法表征孔結構的原理和特點，建立并采用該方法測定了一系列層析介質(zhì)的孔徑分布。
　　 首先，分析了逆體積排阻層析法中常用的數(shù)學模型，采用兩種孔徑分布模型和單孔分配系數(shù)模型，得到由孔徑

2、分布函數(shù)計算分配系數(shù)的模型表征，并進行了模型分析。結果表明，利用對數(shù)正態(tài)孔徑分布模型能夠有效克服高斯正態(tài)分布出現(xiàn)孔徑為負數(shù)的情況；孔徑分布參數(shù)中，rp值變化對Kd-Rm曲線的影響非常明顯，而Sp變化對Kd-Rm曲線的影響則較小，因此用該方法算得的rp值相較Sp值更準確。
　　 然后，建立了逆體積排阻層析法測定層析介質(zhì)孔徑分布的實驗方法，并驗證了該方法的可行性和可靠性。結果表明，逆體積排阻層析法是分析層析介質(zhì)孔徑分布的有效方法，可

3、靠性高，且可以進一步計算得到可進入孔表面積等重要信息。
　　 接著，應用逆體積排阻層析法測定了多種常用瓊脂糖層析介質(zhì)的孔徑分布，并進行了詳細比較和深入分析。結果表明，F(xiàn)F系列瓊脂糖凝膠基質(zhì)平均孔徑隨瓊脂糖濃度降低而增大；偶聯(lián)不同配基的FF系列離子交換介質(zhì)孔徑分布非常接近，且與基質(zhì)凝膠的孔徑分布差異不大；XL系列離子交換介質(zhì)的孔徑比FF系列明顯小且分布窄，HP系列離子交換介質(zhì)孔徑比FF系列略大且分布寬。
　　 最后，對天然

4、多糖類和有機合成樹脂類層析介質(zhì)的孔徑分布進行了比較分析，并測定了本實驗室自制的幾種纖維素層析介質(zhì)的孔徑分布，結果表明，不同公司生產(chǎn)的以6％交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)的FF系列離子交換介質(zhì)，其孔徑分布差異不大；所測定的纖維素介質(zhì)的平均孔徑較小，但是否為普遍規(guī)律還有待進一步驗證；有機合成樹脂類離子交換介質(zhì)的平均孔徑整體上明顯大于多糖類離子交換介質(zhì)，分布也更寬；實驗室自制的六種纖維素層析介質(zhì)的孔徑分布較窄，兩種擴孔劑均有擴孔效果，淀粉的擴孔效果較環(huán)己烷