六溴環(huán)十二烷(HBCDs)對RXR、PXR、PPARγ影響及其神經(jīng)毒性效應(yīng)機(jī)制初步探討.pdf

1、六溴環(huán)十二烷（1,2,5,6,9,10-Hexabromocyclododecanes,HBCDs）是一種新型環(huán)境持久性有機(jī)污染物，廣泛存在于大氣，土壤，沉積物，水和各種有機(jī)質(zhì)中。因其具有用量少，阻燃效果好，對材料物理性能影響小，熱穩(wěn)定性好等特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于聚苯乙烯泡沫、室內(nèi)裝潢紡織品和電子產(chǎn)品等領(lǐng)域。HBCDs主要靶器官是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)和生殖發(fā)育系統(tǒng)，商品化HBCDs由3種非對映異構(gòu)體（α、β、γ-HBCD）組成，國內(nèi)外目前對HBC

2、Ds三種異構(gòu)體的毒性研究很少，尤其是HBCDs三種異構(gòu)體對神經(jīng)細(xì)胞的毒性研究尚未見報道。
　　目的：
　　本研究擬通過體外實(shí)驗(yàn)，探討六溴環(huán)十二烷（1,2,5,6,9,10-Hexabro mocyclododecanes,HBCDs）對小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞N2a（mouse neuroblastoma N2a cells,N2a）增殖和氧化損傷的影響，進(jìn)一步研究三個重要細(xì)胞核受體視黃醛類X受體α（Retinoid X Rec

3、eptor，RXRα）、過氧化物酶體增殖物活化受體（Pero xisome Proliferator Activated Receptor,PPARγ）、孕烷X受體（Pregnane X Recept or,PXR）的表達(dá)、定位及其相互作用以探討HBCDs毒作用的分子機(jī)制，揭示HBC Ds的神經(jīng)毒性效應(yīng)機(jī)制，也為HBCDs的一系列其它毒性作用的機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　用不同濃度HBCDs的3種非對映異構(gòu)體(±)α

4、-Hexabromocyclododecane（α-HBCD）,(±)β-Hexabromocyclododecane（β-HBCD）,(±)γ-Hexabromocyclodo decane（γ-HBCD）處理N2a細(xì)胞，CCK-8法檢測HBCDs的3種非對映異構(gòu)體對N2a細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測HBCDs的3種異構(gòu)體對N2a細(xì)胞的細(xì)胞周期影響；實(shí)時熒光定量（Real-time polymerase chain reacti

5、on,RT-PCR）和免疫蛋白印跡（Western Blot,WB）法測定小鼠8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶（mouse8-oxog uanine DNA glycosylase,mOGG1）的mRNA和蛋白表達(dá)，微量酶標(biāo)法測定N2a細(xì)胞中乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）漏出率，TBA法測定丙二醛（Mal ondialdehyde,MDA）含量，比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione Perox

6、ida se，GSH-PX）活性，DCFH-DA（2,7-dichlorofuorescin diacetate）探針化學(xué)熒光法測定ROS水平；采用RT-PCR法和Western Blot法檢測3個細(xì)胞核受體RXRα、PPARγ、PXR及其下游靶基因細(xì)胞色素P450（cytochrome P450）亞型CYP3A11的mRNA及蛋白表達(dá)的變化；采用免疫共沉淀技術(shù)分析RXRα、PPARγ、PXR之間的相互作用關(guān)系。
　　結(jié)果：

7、>　　HBCDs的三種異構(gòu)體中，α-HBCD，β-HBCD對小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞N2a具有明顯的細(xì)胞毒性作用，其對N2a細(xì)胞的毒性大小分別為β-HBCD>α-HBCD>γ-HBCD，24h為毒作用興奮點(diǎn)，且α-HBCD，β-HBCD作用于N2a細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50分別為60.07μmol/L，10.52μmol/L，而γ-HBCD沒有明顯的細(xì)胞毒性。α-HBCD，β-HBCD可誘導(dǎo)N2a細(xì)胞發(fā)生氧化損傷，使細(xì)胞的LDH漏出率、MD

8、A含量、mOGG1及ROS水平升高，GSH含量下降。α-HBCD，β-HBCD均能使細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。染毒24 h后，RXRα、PPARγ、PXR及CYP3A11的mRNA及蛋白表達(dá)均呈現(xiàn)上升趨勢(P＜0.05)。免疫共沉淀結(jié)果顯示：α-HBCD，β-HBCD染毒前后，RXRα與PPARγ、PXR之間始終存在交互作用。
　　結(jié)論：
　　α-HBCD、β-HBCD對 N2a細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，可誘導(dǎo) N2a細(xì)胞

9、氧化損傷，并對正常細(xì)胞周期產(chǎn)生影響，將細(xì)胞阻滯在G2/M期而抑制細(xì)胞增殖。α-HBCD、β-HBCD均可誘導(dǎo)細(xì)胞核受體RXRα、PPARγ和PXR的表達(dá)升高，PXR受體下游基因CYP3A11的表達(dá)也明顯升高。α-HBCD、β-HBCD作用前后，RXRα、PPARγ和PXR三個細(xì)胞核受體之間始終存在交互作用。說明RXRα、PPARγ和PX R三種細(xì)胞核受體可能介導(dǎo)了HBCD化合物的神經(jīng)毒性效應(yīng)，但是受體間相互作用的分子機(jī)制有待于未來進(jìn)一步