微囊藻毒素測定方法優(yōu)化與實例分析——以貴州省阿哈水庫為例.pdf

1、水體富營養(yǎng)化是一個全球性環(huán)境問題，隨著水體富營養(yǎng)化程度日漸嚴重，水體發(fā)生藍藻水華屢見不鮮，由藍藻水華引起的水體受藍藻毒素污染而引起生物中毒問題備受關注，因此對水體中藍藻毒素的監(jiān)控尤其對飲用水源地水體及其重要。微囊藻毒素（microcystins，MCs）是一類由藍藻門微囊藻屬下微囊藻代謝產(chǎn)生的毒素，主要對肝臟、腎臟造成功能性損害。研究發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生微囊藻毒素的藍藻有銅綠微囊藻、可疑微囊藻、少數(shù)魚腥藻、顫藻等，尤其以銅綠微囊藻最為常見。

2、>　　本文以實驗室培養(yǎng)的FACHB-905型銅綠微囊藻為對象，建立新鮮FACHB-905型銅綠微囊藻胞內(nèi)毒素 RP-HPLC測定方法；針對含低濃度MCs水體，設計實驗裝置并利用單因素響應面法進行優(yōu)化，完善水體中MCs測定的前處理環(huán)節(jié)；以貴州省阿哈水庫為例，進行為期5個月（165次）的周期性微囊藻毒素監(jiān)測，結(jié)合生態(tài)學和環(huán)境科學數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析得到阿哈水庫微囊藻毒素周期性分布變化特征與環(huán)境因子之間的相關性，明確貴州省高原水庫阿哈水庫微囊藻毒素

3、的時空分布特征與影響因素，為水庫管理提供數(shù)據(jù)支持。
　　研究結(jié)果表明：
　　（1）在探討RP-HPLC法測定FACHB-905型銅綠微囊藻胞內(nèi)微囊藻毒素時，通過單因素試驗結(jié)合正交試驗 L9（34）設計，確定出甲醇濃度60％，超聲功率200 W，提取時間50 min，固液比1:15 g/mL，提取溫度50℃為供試液制備的最佳條件；通過方法學考察，流動相組成為：乙腈-0.02%TFA溶液梯度洗脫分離效果最佳，此時兩者分離度為9.

4、21，最佳吸收波長為238 nm，精密度良好（MC-RR，RSD%=0.79%；MC-LR， RSD%=1.08%；n=6）；供試液室溫放置48 h內(nèi)穩(wěn)定（AreaMC-LR：RSD%=1.92%）；制備供試液方法重復性良好（濃度MC-LR：RSD%=3.3%）；在0.019~0.154μg/mL線性范圍內(nèi)含量與峰面積線性關系良好（YMC-RR=38094 X+421.21，R2=0.9997，YMC-LR=23223 X+2921.1

5、，R2=0.9999），采用無限稀釋方法，確定出MC-RR和MC-LR絕對檢出限達到9.5 ng（ppt），定量限達到0.019μg（100 ppm）；回收率試驗結(jié)果顯示：MC-RR加樣平均回收率為98.86%，（RSD%=0.86%），所得MC-LR加樣平均回收率為98.78%，（RSD%=0.97%），驗證實驗顯示MC-LR含量平均值0.5190μg/mL（RSD%=0.80%）， MC-RR未檢出；建立RP-HPLC法測定FACH

6、B-905型銅綠微囊藻胞內(nèi)微囊藻毒素方法操作簡便、結(jié)果準確。
　?。?）針對水體中MCs的測定，采用SPE-C18固相萃取小柱，自主設計樣品前處理裝置，采用響應面One Factor法優(yōu)化實驗，進行方差分析(P＜0.01)，得到前處理條件：依次用純水25 mL淋洗除去極性較大雜質(zhì)；30%甲醇25 mL淋洗除雜，棄去；80%酸化甲醇（0.02%TFA）25 mL洗脫，收集洗脫液，40℃旋干，100%甲醇定容至1 mL得供試液；選擇培

7、養(yǎng)基溶液和野外水樣進行分析，結(jié)果顯示培養(yǎng)基MC-LR平均值為0.7048μg/L；野外水樣MC-RR平均值為0.4177μg/L，MC-LR平均值為0.5547μg/L。
　?。?）基于RP-HPLC測定方法與SPE前處理方法，對阿哈水庫水體中 MC-RR、MC-LR周期跟蹤性監(jiān)測結(jié)果顯示，微囊藻毒素含量與藍藻豐度的時空變化呈現(xiàn)滯后性，微囊藻毒素含量的峰值出現(xiàn)晚于藍藻豐度；經(jīng)過主成分分析和相關性分析，氮磷含量對MC-LR的分布有較