富硒古尼蟲草菌發(fā)酵條件優(yōu)化及活性成分研究.pdf

1、硒(Se)是人體必需微量元素之一，是含硒酶的重要組分，具有多種生理功能。而我國處于低硒區(qū)，硒的營養(yǎng)補充顯得尤為重要。由于蟲草菌具有硒元素的有機轉換能力，富硒后，其提取物硒多糖兼有多糖和硒的雙重活性，然而有關古尼蟲草菌絲體富硒及其硒多糖的研究鮮有報道。本論文研究了古尼蟲草菌的耐硒和富硒特征，以富硒率和生物量為指標進行液體發(fā)酵條件優(yōu)化，從富硒古尼蟲草菌絲體中提取多糖并進行結構和抗氧化活性分析。
　　固體平板培養(yǎng)觀察富硒古尼蟲草菌的菌落

2、特征和形態(tài)。實驗結果顯示，固體平板培養(yǎng)耐亞硒酸鈉濃度為5μg/mL，且富硒能夠加快古尼蟲草菌絲體的生長，減慢菌種老化速度。菌落整體為白色，菌落四周長滿較短的白色絨狀致密菌絲;分生孢子無隔膜，呈擬卵圓形、橢圓形，平滑、均勻的粘附在產孢結構上。
　　采用原子熒光法測定富硒菌絲體中的硒含量，通過單因素及正交試驗優(yōu)化液體發(fā)酵條件。結果表明:液體發(fā)酵耐亞硒酸鈉濃度為7μg/mL;最優(yōu)發(fā)酵條件為:蔗糖濃度6％，蛋白胨濃度0.6％，KH2PO4

3、0.25％，MgSO40.20％，培養(yǎng)基初始pH6.0，培養(yǎng)溫度25℃，接種量8％。在此條件下，富硒古尼蟲草生物量可達11.657g/L，富硒率可達78.33％。為探究生物富硒對古尼蟲草功效成分和營養(yǎng)成分的影響，測定了基礎組和富硒組中化學成分的含量，結果顯示富硒古尼蟲草菌四種營養(yǎng)和三種功效成分含量高于基礎古尼蟲草，且多糖含量達到了10.39％。
　　分別從基礎組和富硒組菌絲體中提取、分離和純化得分子量均一的大分子多糖，分別命名為C

4、CPS-Ⅱ（基礎組）和SeCPS-Ⅱ（富硒組）。結果為:SeCPS-Ⅱ和CCPS-Ⅱ中硒含量分別為17.89μg/g和2.01μg/g。采用氣相色譜、高碘酸氧化、Smith降解和核磁共振等分析表明，兩種多糖的單糖組成種類一樣，主要由葡萄糖組成，但單糖含量不同;CCPS-Ⅱ糖殘基呈α異頭構型，且由α(1→4)葡萄糖構成多糖骨架，SeCPS-Ⅱ糖殘基主要呈α異頭構型，還含有部分β異頭構型，且主要由α(1→4)葡萄糖構成多糖骨架，部分β-型糖

5、苷鍵構成多糖支鏈。通過紅外光譜對結構進行表征，初步推斷SeCPS-Ⅱ含有亞硒酸酯的特征吸收峰。使用旋光儀、剛果紅試驗和X-射線衍射儀對CCPS-Ⅱ和SeCPS-Ⅱ進行結構分析，結果顯示富硒對其多糖結構有一定影響。
　　通過體外抗氧化試驗評價CCPS-Ⅱ和SeCPS-Ⅱ對自由基的清除能力。當多糖濃度為3.0mg/mL時，與CCPS-Ⅱ相比，SeCPS-Ⅱ對羥自由基、DPPH自由基、ABTS自由基和超氧陰離子自由基清除率分別提高了21