gnrha對體外培養(yǎng)的卵巢黃素化顆粒細胞分泌功能的影響

1、天津醫(yī)藥 2 0 0 5 年 l 0 月第 3 3 卷第 l 0期 G n R H a 對體外培養(yǎng) 的卵巢黃素化 顆粒細胞分泌功 能 的影 響 白曉紅 糜若然 6 2i摘要 目的 ： 研 究促性 腺激素釋放激素激動劑( G n R H a ) 對體外培養(yǎng) 的卵巢黃素化顆粒細胞 分泌功能的影響 。方 法 ： 對 l 6 例接受體外受精 患者 卵泡液 中分離 的卵巢黃素 化顆粒細胞進行體外培養(yǎng) ， 利用免疫組化法檢測顆粒細胞的 卵泡刺激 素

2、受體 ( F S H R ) 蛋 白表 達鑒定 顆粒細胞 的純 度 ， 檢測加 入 G n R H a ( 實驗組 ) 體 外培養(yǎng)顆 粒細胞 分泌 雌二醇 ( E) 、 孕酮( P ) 、 睪酮 ( T ) 、 表皮生長 因子( E G F ) 和胰島素樣生長 因子 1 ( I G F 一 1 ) 的水平并與未加 G n R H a ( 對照組 ) 比較 。結(jié)果 ： 從卵泡液中分離培養(yǎng)的卵巢黃素化顆粒細胞 ， 7 5 ％以上呈 F S

3、HR蛋 白陽性 表達 ； 1 0 0n s ／ L的 G n R H a 對體外培養(yǎng) 顆粒細胞作用 2 4h 后 L清液 中每 10 0 0個細胞中 E含量為 ( 0 ． 8 3±0 ． 4 6 ) n g ／ L ， 明顯低 于對照組的 ( 2 ． 6 0±1 ． 5 3) n g ， L( P<0 ． 0 5 ) ； P ， T ， I G F 一 1 和 E G F的含量與對照組差別無統(tǒng)計學(xué) 意義。結(jié)論

4、： G n R H a減弱了顆粒細胞分泌 E的功能 ． 推 測 G n R H a 對卵泡發(fā)育和卵母 細胞 可能有負面影響 。關(guān)鍵詞 促性腺素釋放激素 胰島素樣生長因子 I表皮生長因子 細胞 ， 培養(yǎng)的 卵泡刺激素 受體 ， 促性腺激素 St u d yo nt h eE f e c t so fGn RHao nt h eSe c r e t eFu n c t i o no ft h eL u t e i n i z e dGr a

5、n u l o s eCe l I i nVi t r oB AIXi a o h o n g ， MIRu o r a nD e p a r t m e n to fO b s t e t r i c sa n dG y n e c o l o g y , T i a n j i nMe d i c a lU n i v e r s i t 3 “ G e n e r a lH o s p i t a l ， T i a n j i

6、n3 0 0 0 5 2 ， C h i n aA b s t r a c tO b j e c t i v e ： T os t u d yt h ee f f e c t so fG o n a d o t r o p h i n - r e l e a s i n gh o r m o n ea g o n i s t ( G n R H a ) o nt h es e c r e t ef u n c t i o no ft h

7、 el u t e i n i z e dg r a n u l o s ec e l li nv i t r o ． Me t h o d s ： Hu ma ng r a n u l o s ac e l l si s o l a t e df r o mf o l l i c u l a rf l u i do f16p a t i e n t sr e c e i v e dI VFo rI C S 1w e r ec u l

8、t u r e di nv i t r o ． F S HRe x p r e s s i o no fg r a n u l o s ac e l l sw e r ee x a mi n e db yi mmu n o b i o c h e mi s t r ya s s a y ． T h el e v e l so fE 2 ，P ， T ， E GF ， a n dI GF 一 1i ng r a n u l o s a(

9、： e l l si nGn RHag r o u pw e r ee x a mi n e da n dc o mp a r e dw i t hc o n t r o lg ro u p ． Re s u l t s ：Ov e r7 5 ％ g r a n u l o s ac e l l si s o l a t e df ro mf o l l i c u l a rf l u i de x p r e s s e dF S

10、HR． Af t e rc o - c u l t u r e dwi t h10 0n s ／ L ． G n RHaf o r2 4h ， t h ev a l u eo fE 2d r o p p e dt o ( 0 ． 8 3- 4 - 0 ． 4 6 )n C L ， w h i c hw a ss i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h ec o n t r o l ( 2 ．

11、 6 0- 4 - 1 ． 5 3 ) n gL ( P<0 ． 0 5 ) ． T h e r ew e r en od i f e r e n c ei nP ，T ，I GF一 1 ，a n dE GFb e t w e e nt h e s et w og r o u p s ． Con c l u s i o n：T h es e c r e t i o no fE 2f r o m g r a n u l o s a

12、c e l l si sd i mi n i s h e db yGn RHa ． Gn RHama y b eh a san e g a t i v ee f f e c to nf o l l i c l e sa n do o c y t e s ．K e yw o r d sg o n a d o r e l i ni n s u l i n — l i k eg r o w t hf a c t o rIe p i d e r

13、 m a lg ro w thf a c t o rc e l l s ， c u l t u r e df o l l i c l es t i mu l a t i n gh o r m o n er e c e p t o r s ， g o n a d o t r o p i n促性腺激素釋放激素激動劑 ( G o n a d o t r o p h i n —r e l e a s i n gh o r m o n ea g

14、o n i s t ， G n R H a )在體外受精技術(shù) 的卵巢促排卵方案 中被廣泛使用 ． G n R H a 可防止內(nèi)源性 的黃體生成素( L H ) 峰 ， 使卵泡發(fā)育同步化 ， 但 有研 究發(fā)現(xiàn)G n R H a 增加體外培養(yǎng) 的原代顆粒細胞 的凋亡I “ ， 本研究在卵巢黃素化顆粒細胞原代培養(yǎng)的 基 礎(chǔ)上研 究 G n R H a 對 顆粒 細胞 分泌 功能 的影 響 1 資料與方法 1 ． 1一般資料 卵巢黃素化顆粒細胞

15、來 自 我 院生殖 中心接 受體外受精 ( I V F ) 一胚胎 移植和卵漿 內(nèi)精 子注射 ( I C S I ) 技術(shù) 治 療 的 1 6例 患 者 的卵 泡 液 。 患 者 年 齡 2 5 ～ 3 5歲 ．平 均 ( 3 0 ． 4 ±3 ． 1 ) 歲。 其 中輸卵管性不孕 9 例 ， 男性因素 3 例 ， 輸卵 管性 因素合并男性因素 1 例 ． 原發(fā)性 不孕 3 例。超排卵方案 均為長方案 ， 即在前次月經(jīng)黃體期使

16、用 G n R H a 降調(diào)節(jié) ． 月經(jīng) 來 潮后 3 ～ 5d加用 促性腺激 素。人卵巢 癌細胞 系 H O一 8 9 1 0購 自上海細胞研究所 1 ． 2 方法 1 ． 2 ． 1 黃 素化顆 粒細胞的培養(yǎng) 用淋 巴細胞分離 液去除 卵 泡液 中的紅細胞 ，經(jīng)透 明質(zhì) 酸酶 和胰酶消化形 成單細胞懸 液。培養(yǎng)液為含 1 0 ％胎牛血清 的組織培養(yǎng)基 1 9 9 ( T C M1 9 9 ) ．黃素化顆粒細胞 以 1 0 8 ／ L

17、 接種在 2 4 孑 L 板中 ．每孑 L 加 lm L 細 胞懸液 。2 4h后更換培養(yǎng)液 ， 檢查細 胞貼壁情況 ， 每 2 4h 半 量更換 培養(yǎng)液 。1 ． 2 ． 2 黃 素化顆粒細 胞鑒定 每例均采用 蓋玻 片培養(yǎng)法 獲 得 l ～ 2 片細胞爬 片， 經(jīng) 3 ． 7 ％多聚甲醛 固定 。 采用鏈 霉素抗 生 物 素蛋 白一 過氧化物 酶連接法 ( s P法 ) 檢測 卵泡刺 激素受體 ( F S H R) 的表達 ， 細胞

18、 系 H O 一 8 9 1 0作為 陽性 對照 ， 以磷 酸鹽 緩 沖液 ( P B S ) 代替一抗作為陰性對照 。 細胞膜出現(xiàn)黃 色染色為 + 天津市 自 然科學(xué)基金資助項 目( 項 目編號 ： 0 1 3 6 1 3 2 1 1 )作者單 位： 3 0 0 0 5 2天津醫(yī)科 大學(xué)總 醫(yī)院婦產(chǎn)科 維普資訊 http://www.cqvip.com 天津醫(yī)藥 2 0 0 5 年 l 0 月第 3 3 卷第 l 0 期 的影響 ．

19、進而可能對卵母細胞及其進一步發(fā)育有不 良的影響 ．在體外受精超促排卵方案中應(yīng)用的 G n —R H a 是否對體外受精 的結(jié)局有不利影響有待于進 一 步研究 。參考文獻 lS i f e r C B l a n c - L a y r a cG ． B r i n g u i e r A F , e ta 1 ． E f f e c t s o f a g o n a d o t r op i n —r e l e a s i n gh

20、 o r mo n ea g o n i s ta n df o l l i c l es t i mu l a t i n gh o r m o n eo nt h ei n c i d e n c eo fa p o p t o s i si nh u m a nl u t e i n i z e dg r a n u l o s ac e l l s ．E u rJOb s t e tG y n e c o lR e p r o

21、dB i o l ， 2 0 0 3 ， l1 0 ( 1 ) ： 4 3 — 4 82Z h e n gW ， L uJ J ， L u oF ， e ta 1 ． O v a r i a ne p i t h e l i a lt u m o rg r o w t hp r o m o —t i o nb yf 0 l l i c l e— s t i mu l a t i n gh o r mo n ea n di n h i b

22、 i t i o no ft h ee f f e c tb yl u t e i n i z i n gh o r mo n e ． G yn e c o lOn c o l ， 2 0 0 0 ， 7 6( 1 ) ： 8 0 — 8 83 朱珠 ， 孫 國棟， 劉嘉茵． 丙戊酸鈉對人卵巢黃素化顆粒細胞激 素分 泌及相關(guān)甾體合成酶 m R N A影 響．中國藥理 學(xué)通報 ， 2 0 0 4 ， 2 0 ( 6 】 ：6 2 8 —

23、6 3 24 黃荷鳳， 陳丹青， 朱依敏， 等． 瘦 素對人 卵巢黃素化顆粒細胞功能 的體外研究． 中華婦產(chǎn)科雜志， 2 0 0 2 ， 3 7 ( 3 ) ： 1 5 2 — 1 5 45S i m o n iM， G r om o l lJ ． N i e s c h l a gE ． T h ef o l l i c l e — s t i m u l a t i n gh o r m o n er e c e p t o r ：

24、b i o c h e mi s t r y ，mo l e c u l a rb i o l o g y ，p h y s i o l o g y ，a n dp a t h o 一6 2 3p h y s i l o l g y． E n d o cR e v ， 1 9 9 7 ， l8 ( 6 ) ： 7 3 9 — 7 7 36 徐素欣， 趙志明， 沈鴻敏， 等． 顆粒細胞上促卵泡素受體與體外受精一胚胎移植的相關(guān)研究． 中國優(yōu)

25、生與遺傳雜志， 2 0 0 4 ， 1 2 ( 1 ) ： 7 o _ 7 l7Ca t a l d oN ， F u j i m o t oV ， J a f f eR ． I n t e r f e r o n - g a mmaa n da c t i v i nAp r o—mo t ei n s u l i n — — l i k eg r o wt hf a c t o r - b i n d i n gpr o t e i

26、 n— - 2a n d- 4a c c u mu l a ·t i o nb yh u ma nl ut e i n i z i n gg r a n u l o s ac e l l s ， a n di n t e r f e r o n — g a mmap r o·m o t e st h e i ra p o p t o s i s ． JC l i nE n d o e r i n o lMe t a

27、b ， 1 9 9 8 ， 8 3 ( 1 ) ： 1 7 9 — 1 8 68D e m e e s t e r e1 ． G e r v yC， C e n t n e rJ ． e ta 1 ． E f f e c to fi n s u l i n — l i k eg r o w t hf a e t o r - Id u r in gp r e a n t r a lf o l l i c u l a rc u l t u

28、r eo ns t e r oi d o g e n e s i s ，i nv i t —r oo o e y t ema t u r a t i o n ， a n de mb r yod e v e l o p me n ti nmi c e ． Bi o lRe p r od ，2 0 0 4 ， 7 0 ( 6 ) ： l 6 6 4 — 1 6 6 99 李媛， 陳子江， 趙力新， 等， 表皮生長 因子 和促性腺激 素對人類

29、 卵母 細胞體 外成熟 的影響． 中華男科學(xué)， 2 0 0 4 ， 1 0 ( 4 ) ： 2 5 7 — 2 5 91 0Na t h w a n iP，Ka n gS ，Ch e n gK，e ta 1 ．Re g u l a t i o no fg o n a d o t r o p i n—r e l e a s i n gh o r m o n ea n di t sr e c e p t o rg e n ee x p r

30、e s s i o nb y1 7 一 Be s t r a d i o lo nc u l t u r e dh u ma ng r a n u l o s a — l u t e a lc e l l s ． En d o c r i n o l o g y ， 2 0 0 0， 1 41 ：1 7 5 4-l 7 6 3llKa n e k oT． S a i t oH． Ta k a h a sh iT． e ta 1 ．E H

31、． e c t so fc o n t r ol l e do v a r i a nh y p e r s t i mul a t i 0 no no o e y t eq u a l i t yi nt e r m so ft h ei n c i d e n c eo fa p o p —t o t i cg r a n u l o s ac e l l s ． JAs s i s tR e p r odG e n e t ， 2

32、 0 0 0 ， 1 7 ( 1 0 ) ： 5 8 0 - 5 8 5( 2 0 0 5 — 0 3 — 0 3 收稿 2 0 0 5 — 0 4 一 l 8 修回)豬鏈球菌 的細菌學(xué)診斷 最近 在我 國四川省發(fā) 生的與病 豬密切 接觸者感 染豬鏈 球菌 的事 件 ， 已引起 我國政府 、 國內(nèi)外醫(yī)學(xué) 界和獸醫(yī)學(xué)界 的廣泛關(guān)注 。 現(xiàn)介紹豬鏈球菌的細菌學(xué)診 斷， 供有關(guān)方面參考 。1 豬鏈球菌 的分類 1 9 8 6年 B e r g

33、 e y ’ s細菌 系統(tǒng) 分類 學(xué)將 原 鏈球 菌屬 分 為 3個 屬 ． 即腸球菌屬 、 乳球菌屬和鏈球菌屬 。2 0 0 2 年 F a c k l a m提 出為方便鏈球菌屬的臨床細菌學(xué)鑒定 ， 仍 沿用分為 1 3 溶 血 鏈球菌 、 非 B溶血鏈球菌 、 綠色 (溶血 ) 鏈球菌 、 營養(yǎng)變異鏈 球 菌和少見鏈球菌。豬鏈球菌分類在非 B溶血鏈球菌內(nèi)。按 L a n c e f i e l d 的菌體抗原分類法 ( 血 清型分

34、類 ) 分在 R ， S ， T 群 。2 豬鏈球菌的致病性 它 主要存 于豬 的扁桃體周圍 ， 通過豬之 間的鼻與鼻接觸 或近距 離的氣溶膠而傳播 。被感染 的豬可 出現(xiàn)支氣管肺 炎 、關(guān)節(jié)炎 、 腦膜炎和膿毒血癥 ， 后者的死亡率很高 。 只有豬鏈球 菌的血清 型 2型 ( L a n c e f i e l d的 R型 ) 和 1 4型可感染病豬 的 密切接觸者 。 嚴重感染者可出現(xiàn)耳聾 、 心 內(nèi)膜炎 、 腦膜炎和膿 毒血癥 ，

35、 可致感 染者死亡。以前發(fā)生的對密切接觸者的感染 多為散 發(fā)。L u t t i c k e n 等收集文獻報道 的 4 4 例 ， 其 中 3 9 例 為腦膜炎 ， 5 例為膿毒血癥 。這 些患者均 與豬或 生豬肉有密切 接 觸。加拿大有 引起心 內(nèi)膜炎 的報道 ， 從感染者血液分離 的豬鏈球 菌與密切接觸 的病豬的 R AP D分型完全 一致 。 我 國此 次 為少見的局部爆發(fā)性流行。醫(yī) 學(xué) 快 訊3 豬鏈球 菌的重要 生物學(xué)特征

36、在病 變處取標 本涂 片或在 固體 培養(yǎng) 基上生 長為革 蘭 陽性槍尖樣雙球菌 ， 形 態(tài)與肺 炎鏈球菌相似 。在液體培養(yǎng)基 內(nèi)生長為鏈狀 。此菌的培養(yǎng)并不 困難 ， 在常規(guī)血平板上和液體 培養(yǎng)基 中易于生長。菌落特征為圓形 ， 平滑 ， 濕潤 的小 菌落 。周 圍有狹窄的 B溶血 環(huán)或 溶血環(huán) 。 血清 型屬 R ， s ， T群 ， 但 此類抗原與抗 D組血清有交叉反應(yīng) ， 故過去 曾認 為屬 D群 。如 只依據(jù) 它與 D抗 體發(fā)生

37、凝集 則易誤 認為腸球 菌 ，應(yīng)予注 意。 豬鏈球菌又可分 為 3 4個血 清型。 生化反應(yīng)方面可 分解乳 糖 、 鼠李糖和水 楊苷 ， 不能分解甘露醇和山梨醇 。 R群的豬鏈 球菌可分解棉子糖 ． s 群不分解 。4 細菌學(xué)鑒定 豬鏈球菌易與生物學(xué)性狀相似的鏈球 菌等混淆 。 以下 鑒 別點是重要 的， 見表 1 。表 1 豬鏈球菌與其他生物性狀相似的鏈球 菌鑒別要點 ? ．在麥康培 在 4 5o C 在 4 O ％ 膽汁 耐受 6