IVF周期血清總睪酮與卵巢反應性參數(shù)及顆粒細胞FSHRmRNA表達的相關性研究及睪酮對體外培養(yǎng)人黃素化顆粒細胞.pdf

1、研究背景：
　　 在顆粒細胞內(nèi)，雄激素在FSH誘導的芳香化酶作用下轉化為雌激素。同時，雄激素又能增加顆粒細胞對FSH的敏感性，促進卵泡發(fā)育，如：增加顆粒細胞FSH受體的表達，增加FSH對早期卵泡的募集，促進胰島素樣生長因子-Ⅰ的分泌，IGF-Ⅰ與FSH產(chǎn)生協(xié)同作用，促進卵泡生長發(fā)育。近年來，國外有些臨床研究在IVF周期前或周期過程中使用雄激素處理方案（雄激素啟動，androgen priming），包括使用睪酮，脫氫表雄酮，黃體

2、生成素，人絨毛膜促性腺激素和芳香化酶抑制劑等，以提高體循環(huán)或卵巢局部的雄激素水平，希望增高的雄激素水平能增加卵巢對外源性促性腺激素的敏感性，增加卵巢反應性，改善IVF結局。然而臨床研究結果并不完全一致。因此，我們設計了這項實驗，觀察IVF過程中血清總睪酮的動態(tài)變化、測定顆粒細胞FSHRmRNA的表達及不同濃度睪酮作用下顆粒細胞FSHRmRNA、IGF-ⅠmRNA、IGF-ⅡmRNA的表達，初探IVF周期雄激素處理方案改善卵巢反應性的可行

3、性。
　　 研究目的：
　　 1了解IVF周期血清總睪酮與卵巢反應性參數(shù)及IVF結局的關系；
　　 2分析IVF周期顆粒細胞FSHRmRNA表達與卵巢反應性及血清總睪酮的關系；
　　 3睪酮對體外培養(yǎng)人黃素化顆粒細胞FSHRmRNA，IGF-ⅠmRNA，IGF-ⅠTmRNA基因表達的影響。
　　 研究方法：
　　 研究過程分為三部分進行：
　　 第一部分：IVF常規(guī)長方案患者進入周

4、期后，監(jiān)測卵巢刺激過程中血清總睪酮濃度變化，記錄患者每次檢查時的卵泡數(shù)量及大小、血清性激素、取卵數(shù)、成熟卵數(shù)、優(yōu)質胚胎數(shù)、囊胚數(shù)及奸娠情況及使用rFSH劑量、卵巢刺激天數(shù)。觀察卵巢刺激后血清總睪酮的濃度變化；分別以是否妊娠和血清基礎總睪酮分組，分析基礎總睪酮與卵巢反應性及IVF結局的關系；探討血清總睪酮與卵巢反應性參數(shù)的相關性。
　　 第二部分：IVF短方案患者進入周期，臨床資料的獲取方法同第一部分。取卵同時，留取卵泡液，分離顆

5、粒細胞，提取細胞總RNA，反轉錄cDNA，進行real-time PCR。按照獲得的成熟卵數(shù)將患者分為卵巢過度反應組、正常反應組和低反應組。比較三組患者的一般情況、卵巢反應性參數(shù)及妊娠率、囊胚冷凍率；比較三組血清總睪酮水平及顆粒細胞FSHRmRNA相對表達量，并對血清總睪酮、卵巢反應性參數(shù)和FSHRmRNA相對表達量進行相關分析，進一步探討血清總睪酮、FSHRmRNA表達與卵巢反應性間的關系。
　　 第三部分：取卵時獲得人黃素化

6、顆粒細胞，以10-8mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L濃度睪酮進行刺激。各組分別在睪酮刺激6小時和24小時時終止培養(yǎng)，提取顆粒細胞總RNA，反轉錄cDNA，進行real-time PCR。以10-8mol/L作為對照組，比較不同濃度睪酮、刺激不同時間對顆粒細胞FSHRmRNA、IGF-ⅠmRNA、IGF-ⅡmRNA表達的影響。
　　 結果：
　　 1第一部分
　　 ①卵巢刺激過程中，血清總睪酮濃度

7、隨著卵泡的發(fā)育逐漸上升；
　　 ②分別以血清基礎總睪酮（bTT）≤0.2 ng/ml和>0.2ng/ml將患者分組，兩組間卵巢反應性參數(shù)及IVF結局比較均無顯著性差異；同樣方法再以bTT≤0.3ng/ml和>0.3ng/ml、bTT≤0.4ng/ml和>0.4ng/ml將患者分組，兩組間卵巢反應性參數(shù)及IVF結局比較仍然均無顯著性差異；
　　 ③藥物刺激卵巢過程中的總睪酮濃度變化與基礎總睪酮濃度有平行關系；
　　

8、 ④血清基礎總睪酮與卵巢反應性參數(shù)無線性相關關系；藥物刺激卵巢過程中，隨著卵泡發(fā)育，總睪酮水平與基礎竇卵泡數(shù)、取卵數(shù)、成熟卵泡數(shù)有正相關關系，與基礎FSH值和rFSH劑量有負相關關系；
　　 ⑤妊娠組OPU14日總睪酮值顯著高于未妊娠組。
　　 2第二部分
　　 ①按照卵巢反應性分組研究發(fā)現(xiàn)：卵巢刺激過程中，卵巢對促件腺激素的反應性與顆粒細胞FSHRmRNA的表達量有關，卵巢過度反應組顆粒細胞FSHRmRNA表達

9、量顯著高于卵巢低反應組顆粒細胞FSHRmRNA表達量；
　　 ②顆粒細胞FSHRmRNA表達量與rFSH用藥劑量呈負相關關系，與E2峰、取卵數(shù)呈正相關關系；
　　 ③血清基礎總睪酮與卵巢反應性參數(shù)如rFSH劑量、卵巢刺激天數(shù)及E2無線性相關關系，與顆粒細胞FSHRmRNA的表達也無線性相關關系；藥物刺激卵巢過程中，隨著卵泡發(fā)育，動態(tài)變化的總睪酮水平與rFSH劑量、卵巢刺激天數(shù)呈現(xiàn)負相關關系，與E2峰值、取卵數(shù)呈現(xiàn)正相關關

10、系，與FSHRmRNA的表達呈現(xiàn)正相關關系。
　　 3第三部分
　　 ①不同濃度睪酮刺激顆粒細胞6小時，顯著增加顆粒細胞FSHRmRNA的表達，并呈現(xiàn)濃度依賴關系：睪酮濃度越高，基因表達量越高；刺激時間延長至24小時，各組間顆粒細胞FSHRmRNA的表達無統(tǒng)計學差異；
　　 ②不同濃度睪酮刺激顆粒細胞6小時，各組間顆粒細胞IGF-ImRNA的表達無統(tǒng)計學差異；刺激時間延長至24小時，顆粒細胞IGF-ImRNA的表

11、達顯著降低，并呈現(xiàn)濃度依賴關系：睪酮濃度越高，基因表達量越低；
　　 ③不同濃度睪酮刺激顆粒細胞6小時，各組間顆粒細胞IGF-IImRNA的表達無統(tǒng)計學差異；刺激時間延長至24小時，10-7mol/L處理組IGF-IImRNA基因表達量顯著高于10-8mol/L處理組和10-5mol/L處理組。
　　 結論：
　　 1基礎總睪酮水平在正常范圍內(nèi)的患者，其基礎總睪酮水平不能作為預測卵巢反應性及IVF結局的指標；