滋勒調(diào)經(jīng)湯對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖和分泌的影響.pdf

1、目的:觀察不同濃度的滋勒調(diào)經(jīng)湯（Zi Le Tiao Jing Sou p-Z LTJS）含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞（GC）增殖與分泌雌二醇（E2）及孕酮（P）、激活素A（ActA）的影響，探討滋勒調(diào)經(jīng)湯治療腎虛血少型的月經(jīng)量少、閉經(jīng)，卵巢早衰等卵巢儲(chǔ)備功能下降內(nèi)分泌疾病的作用機(jī)制，為滋勒調(diào)經(jīng)湯在臨床上的進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.以一定濃度的滋勒調(diào)經(jīng)湯和生理鹽水灌胃6周齡健康近成熟SD大鼠，

2、制備大鼠含藥血清和無藥血清，并配置成體積分?jǐn)?shù)為10％的小、中、大三組不同劑量濃度的含藥血清和無藥血清，且設(shè)空白對(duì)照組；
　　2.采用簡單機(jī)械分離加胰酶消化的方法，用3周齡的健康未成年SD大鼠制備大鼠卵巢顆粒細(xì)胞（GC），并建立其體外培養(yǎng)體系，光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的生長情況，通過FSHR免疫組化法以及細(xì)胞爬片HE染色法進(jìn)行細(xì)胞鑒定，用MTT法繪制細(xì)胞的生長曲線；
　　3.依據(jù)血清藥理學(xué)原理方法，在GC體外培養(yǎng)24h

3、待其貼壁后，用小、中、大等不同濃度的滋勒調(diào)經(jīng)湯的大鼠含藥血清和大鼠無藥血清對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，用MTT法測定OD值，觀察顆粒細(xì)胞增殖情況；
　　4.通過放射免疫分析法測培養(yǎng)液中E2、P的含量；
　　5.用ELISA法檢測培養(yǎng)液中ActA的含量。
　　結(jié)果：
　　1.體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞生長狀態(tài)良好，24小時(shí)細(xì)胞核為藍(lán)紫色，細(xì)胞漿為棕黃色，陽性率>90%;基本貼壁，3-4天進(jìn)入增生期，15天細(xì)胞明顯凋

4、亡，F(xiàn)HSR免疫組化陽性染色：核為藍(lán)紫色，漿為棕黃色，陽性率>90%;HE染色：核被染成深藍(lán)色，胞漿被染成淡紅色;
　　2.滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞(GC)的增殖的影響：小、中、大三組滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清OD值均明顯高于無藥血清組和空白對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)，滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清各組OD與藥物濃度存在一定的依賴性，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　3.滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)

5、胞分泌的影響:空白對(duì)照組和無藥血清組的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的E2、P、ActA的分泌量均低于小、中、大三組滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)，滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清小、中、大組E2、P、ActA分泌量與濃度存在一定的依賴性，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　結(jié)論：滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清能夠促進(jìn)體外培養(yǎng)的大鼠顆粒細(xì)胞的增殖和促進(jìn)E2、P、ActA的分泌，推測在機(jī)體內(nèi),滋勒調(diào)經(jīng)湯可能通過改善卵巢局部自分泌、旁分泌的