n39;注入選育高產(chǎn)復合酶益生菌及其機理的研究

1、安徽農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文N注入選育高產(chǎn)復合酶益生菌及其機理的研究姓名：陳麗娟申請學位級別：碩士專業(yè)：動物營養(yǎng)與飼料科學指導教師：程茂基20050601A b s t r a c tA m u t a t e ds t r a i n —A N 0 2w i t hh i g hy i e l do f c o m p o u n d e n z y m e s w a s o b t a i n e df r o mt h e s t

2、r a i nA N O lo f A s p e r g i l l u sn i g e rb yN + i m p l a n t a t i o na s w e l l a s U V i r r a d i a t e d ，a n ds c r e e n e db y u s i n g t r a n s p a r e n t z o n e s o f a g a r p l a t es c r e e n i

3、n g t e c h n i q u e s ．T h e r e s u l t ss h o w e dt h a ta c t i v i t i e so f a c i d —p r o t e a s e ，C e l l u l a s ea n dP e c t i n a s ei nA s p e r g i t l u sn i g e , + w e r er a i s e df r o m7 1 ．6 I

4、U ．g - t ，1 4 1 7 I U ．g1 a n d2 6 4 ．8 I U ．glt O9 9 6 5 I U ．gJ , 9 4 04 I U ，g ～a n d9 0 6 5IU ．g1r e s p e c t i v e l y C h a r a c t e r i s t i c so fe n z y m e sp r o d u c t i o n i nm u t a t e ds t r a i nA s

5、 p e r g i l l u sn i g e rA N 0 2w e r es t a b i l eb y5t i m e ss u b c u l t u r e T h eo p t i m u mc o m p o n e n t sm e d i u m so fm u t a t e ds t r a i n A s p e r g i l l u sn i g e rA N 0 2w a sg o t t e n b

6、 yu s i n g s i n g l e —f a c t o rr e s e a r c h a n do r t h o g o n a it e s t ．T h e o p t i m a lm e d i u mc o n t a i n e df r e s hb r a n4 2 6 ．8 9 ，b e a nc a k e3 4 14 5 9 ，c o r n c o b 3 4 1 ．4 5 9 ，N I -

7、h C L17 ．0 7 9 ，w a t e r l0 0 0 m L ，i n o c u l u m sc o n c e n t r a t i o n 1 ．5 m LT h ei n i t i a lp H w a ss e ta t5 ．5 ，a n dt h ec u l t u r et e m p e r a t u r ew a sc o n t r o l l e da t3 0 ℃i n9 6 h ．T h

8、er e s u l t s s u g g e s t e d t h a t i t i s a a v a i l a b i l i t y w a y t O b r e e d b a c i l l u s o f e n z y m e b y N +i m p l a n t a t i o n ．T h e r e s u l t so f b i o l o g i c a le f f e c t st h a

9、tt h es p o r e so f A s p e r g i l l u s n i g e r w e r ei m p l a n t a t e db y N + w e r e a Sf o l l o w i n g ：t h et r e a t m e n to fv a c u u m h u r t e dt h ev i v i dc e l l ，T h es u r v i v a lr a t eo f

10、 s p o r e si nv a c u u mw a sd e c r e a s e d 、^ ，i t ht h et i m ed e l a y ．w h i l et h ev e l o c i t yo f d e a t hW a Ss l o w ．a(chǎn) n d t h es u r v i v a lr a t eo f s p o r e sw a s d e c r e a s e d a l s ow i

11、t hi n c r e a s i n go f i m p l a n t a t i o n i o nd o s e ，執(zhí)ti n c r e a s e dg r a d u a l l yw h e nt h ed o s eo fi m p l a n t a t i o nw a s2 0 X 2 ．6X l0 1 4N + ／c m 2 ；w h i l e t h es u r v i v a lr a t eo f

12、 s p o r e sd e c r e a s e dw h e n t h ei m p l a n t a t i o ni o nd o s ew a s 5 0 ×2 ．6 ×t 0 1 4 N + ／c m 2 ；T h e r e w a sh i g h p o s i t i v e m u t a t i o n r a t e i n t h e i m p l a n t a t i o n

13、 i o nd o s e o f( 2 0 ．6 0 ) X 2 ．6 X 1 0 1 4N + ／c m 2 ．A n dt h e l a g e rt h ei m p l a n t a t i o nd o s ew a s ，t h eh i g h e rt h es p o r em u t a t i o nr a t e w a s ．T h eE S R r e s u l t ss h o w e dt h a

14、 ts i g n a lp e a k so f f r e er a d i c a l s h a de x i s t e di nt h es p o r e sa n d t h ec o n t r 0 1 ．M o r e o v e r ，t h a t t h ei n t e n s i t yo f f r e er a d i c a l si n c r e a s e dw i t ht h ed o s

15、ei n c r e a s i n g ．T h eS E M i n d i c a t e dt h a tt h ec o n t r o lw e r ei n t e g r i t y ．W h i l et h es u r f a c eo f s p o r e sW a S c o a r s e n e s s ．M o r e o v e r ，t h ed a m a g e o f i o n i ce t

16、 c h i n ga n d p h e n o m e n o no fd i l a p i d a t i n gc e l lw a l lc o u l db es e e n ．W h e ni m p l a n t e dd o s ei n c r e a s e dc o n t i n u a l l y ，t h ed a m a g e t oc e l l sb e c a m e m o r e a n

17、d m o r e s e r i o u s ，B i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s o ft h eo r i g i n a l s t r a i nA N 0 1a n dt h em u t a n ts t r a i n A N 0 2w e r er e s e a r c h e d ．C o l o n i e sa p p e a r e d a f t

18、 e rA N 0 2 h a d b e e n c u l t u r e do n s t a n d a r dm e d i m n t b r3 5 ha n dA N 0 1f o r2 5 h ．B u tt h es p o r e so ft h em u t a t e ds t r a i nA N 0 2 a p p e a r e de a r l ya n da r o u n dt h ec l o n

19、et h e r ew e r et r a n s p a r e n tz o n e s ．T h el a m e l l a so fA N 0 2a p p e a r e de a r l y e rt h a n t h e o r i g i n a l s t r a i n A N O l ，T h ee n z y m e a c t i v i t y o ft h e o r i g i n a l s t