鼠內(nèi)臟利什曼病治療和l.d.lack基因克隆表達(dá)及e.coli粘附因子研究

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文鼠內(nèi)臟利什曼病治療和L.d.LACK基因克隆表達(dá)及E.coli粘附因子研究姓名：馬瑩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：胡孝素20040423窮的 發(fā) 展中國(guó) 家的內(nèi) 臟 利 什曼 病的 治療而言， 具有十分重要的 現(xiàn)實(shí) 意義。此結(jié)果為進(jìn)一步研究雙氫青篙素對(duì)人類內(nèi) 臟利什曼病以及犬內(nèi) 臟利什曼病的 療效莫定了 體內(nèi) 實(shí) 驗(yàn)基礎(chǔ)， 為內(nèi) 臟利什曼病的治療和預(yù)防提供了 一條新的途徑。我國(guó)的內(nèi) 臟利什曼 病根據(jù)地理

2、分布和傳染源不同可分為 平原型( 人源型) 、 山 丘型 ( 犬源型) 和荒漠型 ( 野生動(dòng)物源型) 。 不同 類型的內(nèi) 臟利什曼病在發(fā)病年齡、 治療效果、 是否易復(fù)發(fā)和有無(wú)保蟲宿主等方面均有差異。近年我國(guó)山 丘 疫區(qū)的內(nèi) 臟利 什曼 病的 年發(fā)病數(shù)出 現(xiàn)回升， 防治 任務(wù) 仍十分艱巨。 近年發(fā)現(xiàn)的 利什曼原蟲活性蛋白 激酶 C受體同 源物( l e i s h m a n i ah o m o l o g u e o f r e

3、c e p t o r s f o r a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e C , L A C K ) 是 利什 曼 原 蟲的高度保守性蛋白， 是一個(gè)很有希望用于疫苗研究的侯選抗原。 本研究應(yīng)用R T P C R 獲得我國(guó) 平原 疫區(qū)和荒漠疫區(qū)杜氏 利什曼原蟲分離株L A C K 基因 ， 測(cè) 序表 明 片 段 大 小 均 為9 4 2 b p ， 與G e n e B

4、 a n k 中 多 種 利 什 曼 原 蟲L A C K基因的 核昔酸序列一致性達(dá)9 7 %以 上; 與本課題組已 經(jīng)獲得的我國(guó)山 丘疫區(qū)分離株的 L A C K基因 核昔酸序列相比 較， 三者的一致性達(dá) 9 5 %以 上。根據(jù)核酸序列推導(dǎo)的 3 1 2個(gè)氨基酸序列，與 G e n e B a n k中利什曼原蟲L A C K蛋白 一致性達(dá) 9 7 %以 上， 我國(guó) 三個(gè)不同疫區(qū)分離株 L A C K蛋白的一致性達(dá)9 5 % 以 上

5、， 具 有高 度同 源性。 根據(jù)我國(guó)當(dāng) 前內(nèi) 臟利什曼 病主 要 在山 丘疫區(qū)流行的 特點(diǎn)， 將山 丘疫區(qū)分離株的 L A C K基因與真核表達(dá)載體p c D N A 3 . 1 ( + ) 定向 重組后 轉(zhuǎn)染C O S - 7 細(xì) 胞， 通過(guò)R T P C R 及免疫 熒光 檢 測(cè)L A C K基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了 重組質(zhì)粒的 C O S - 7 細(xì)胞，其 R T - P C R 及免疫熒光檢測(cè)均呈陽(yáng)性反應(yīng)，證實(shí)重組

6、質(zhì)粒p e D N A 3 - L A C K 能 在C O S - 7 細(xì) 胞中 有 效 表 達(dá)L A C K蛋白 ， 這 是 國(guó) 內(nèi) 首 次報(bào)道 L A C K基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)，為我國(guó)內(nèi) 臟利什曼病核酸疫苗的研究提供了 重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本 文的 最后 一部分 對(duì) 產(chǎn)志 賀毒素型大腸埃希菌( s h i g a t o x i g e n i c E . c o l i ,S T E C )的粘附 相關(guān)因子 作了 初步研究。