鴨致病性e.coli外膜蛋白及相關(guān)毒力基因和新血清型發(fā)現(xiàn)及病原特性研究

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文鴨致病性E.coli外膜蛋白及相關(guān)毒力基因和新血清型發(fā)現(xiàn)及病原特性研究姓名：于學(xué)輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：程安春20080501I V 中 文 摘 要分離株耐藥性非常嚴(yán)重，平均耐藥率2 8 ．8 3 ％，以多重耐藥為主，耐1 0 ~ 1 8 種藥物的菌株占5 9 ．4 ％。選取8 2 個(gè)分離株( 3 7 個(gè)血清型，其中優(yōu)勢(shì)血清型各選8 株共3 2 株，其他血清型5 0 株) 進(jìn)行致病性試驗(yàn)，以

2、每株0 ．2 m l ( 1 0 9 C U F ／m 1 ) 腿部肌肉接種7 日齡鴨，確定出高致病株、中等致病株和低致病株分別占受試菌株的8 0 ．5 ％( 6 6 ／8 2 ) 、1 7 ．1 ％( 1 4 ／8 2 ) 和2 ．4 ％( 2 ／8 2 ) ，四個(gè)優(yōu)勢(shì)血清型均為高、中致病株分別占受試菌株的8 4 ．4 ％( 2 7 ／3 2 ) 、1 5 ．6 ％( 5 ／3 2 ) 。根據(jù)1 6 S r R N A 基因的序列同源

3、性，對(duì)1 4 個(gè)鴨致病性E ．c o l i 代表株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果顯示：1 4 個(gè)代表株形成2 個(gè)主要分枝，3 株鴨致病性E ．c o l i 單獨(dú)形成一個(gè)較遠(yuǎn)的分支：1 1 株鴨致病性E ．c o l i 與人及其他動(dòng)物源E ．c o l i 形成一個(gè)大的分支， 6株與人的0 1 5 7 親緣關(guān)系近，其中有2 株與0 1 5 7 s a k a i 聚為一支；另外5 株與豬、牛、禽和人源E ．c o I i I ( 1 2 親

4、緣關(guān)系近，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)O 血清型與菌株的親緣關(guān)系無(wú)直接聯(lián)系。2 ．鴨源致病性大腸桿菌外膜蛋白型測(cè)定了1 3 0 株( 3 4 個(gè)血清型) 鴨E ．c o l i l 臨床分離株外膜蛋型( O M P 型) ，其中0 9 3等優(yōu)勢(shì)血清型5 3 株，0 4 6 等3 0 個(gè)其他血清型7 7 株，這些分離株共產(chǎn)生了4 個(gè)O M P 型，其中O M P ．1 型8 1 株，占6 2 ．3 ％( 8 1 ／1 3 0 ) ，覆蓋0 9 3 、0 9

5、 2 、0 7 8 和0 7 6 等2 9 個(gè)血清型，為主要O M P 型；根據(jù)G e n B a n k 中大腸桿菌K ．1 2 外膜蛋白A 基因( o m p A ) 的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)9 株優(yōu)勢(shì)血清型和1 株0 4 6 血清型分離株的o m p A 進(jìn)行克隆、序列測(cè)定和分析，發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)血清型9 個(gè)菌株的o m p A 開(kāi)放性閱讀框( O R F ) 長(zhǎng)1 0 5 3 b p ，編碼h h 3 5 0 個(gè)氨基酸組成的前外膜蛋白A

6、 ( p r o ．O m p A ) ， 前2 1 個(gè)氨基酸殘基組成信號(hào)肽，成熟的O m p A 由3 2 9 個(gè)氨基酸殘基組成；0 4 6 分離株的開(kāi)放性閱讀框全長(zhǎng)1 0 4 1 b p ，在4 0 0 b p - - 4 1 l b p 的地方缺失了1 2 個(gè)堿基，成熟的O m p A 由3 2 5 個(gè)氨基酸殘基組成；1 0 個(gè)分離株的o m p A 序列其核苷酸序列高度同源，達(dá)9 5 ．8 ％- 1 0 0 ％。對(duì)1 0 個(gè)分離

7、株o m p A 進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，0 4 6 分離株單獨(dú)聚為一支，其他9 個(gè)分離株聚為一支；菌株血清型、外膜蛋白型與o m p A f f ' J 親緣關(guān)系無(wú)直接聯(lián)系。3 ．鴨源致病性大腸桿菌相關(guān)毒力基因分析應(yīng)用P C R 結(jié)合核酸序列測(cè)定對(duì)2 1 0 株臨床分離株和2 8 株泄殖腔分離株進(jìn)行包括強(qiáng)毒力島( H P I ) 中的鼠疫菌素受體基因< f y u A ) 和鐵調(diào)節(jié)蛋基因( i r p 2 ) 、I 型菌毛必須