鼠內(nèi)皮抑素基因的克隆及表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文進行小鼠內(nèi)皮抑素基因的克隆及表達,基因工程方法構建了鼠內(nèi)皮抑素的溫敏型表達載體pBV220-endostatin,為此作了以下工作:1.從小鼠肝臟細胞中提取總RNA.設計合成一對特異引物,分別帶有EcoRI和BamHI的限制性內(nèi)切酶的識別位點.用RT-PCR法擴增endostatin的基因片段,在endostatin基因的兩側引入EcoRI和BamHI酶切位點.2.用EcoRI和BamHI酶切endostatin cDNA的PCR產(chǎn)

2、物,將其插入到質(zhì)粒載體pBV220中相應的限制性酶切位點,構建非融合質(zhì)粒表達載體pBV220-endostatin.3.將重組質(zhì)粒轉化到克隆菌DH5a中,經(jīng)PCR篩選和限制性內(nèi)切酶鑒定,得到陽性克隆菌株.4.以雙脫氧末端終止法對重組質(zhì)粒pBV220-endostatin進行測序,結果表明與已知小鼠endostatin基因序列一致.5.溫度誘導重組質(zhì)粒pBV220-endostatin在宿主菌中表達外源蛋白.6.用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測表

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