sarscov棘突蛋白、核衣殼蛋白在e.coli中的表達及免疫活性分析

1、⑨ ．高蕊炙法 N a n k a i U n i v e r s i t y可新月 募論文題目： - ^ 階{ c ，v 棘突蛋白核衣殼蛋白九。一 ／L ’锨t c ，_ l 中的表達及免疫活性分析培養(yǎng)院系：圭僉玨主醫(yī)一級學(xué)科：』控盟生————一 二級學(xué)科：微生蜘堂論文作者：j 蔓且婭————一 指導(dǎo)教師：墮屆屋熬撞南開大學(xué)研究生院2 0 0 5 年5 月+ ：0 蟊瑟”A b s t r a c tS A R S ( S e v e

2、 r eA c u t eR e s p i r a t o r yS y n d r o m e ) ，w h i c h i s e p i d e m i c i n G u a n g d o n gP r o v i n c e i n N o v e m b e r2 0 0 2 ，i sa na c u t e i n f e c t i o nj e o p a r d i z i n g h u m a n l i f

3、 e a n dh e a l t hs e r i o u s l y ．A f t e rt h ef i r s tc a s ew a s r e p o s e d ，i t h a d b e e nf o u n d e d i n2 9c o u n t i e s a l lo v e rt h ew o r l d o n l y i nh a l f y e a r a n d p r o d u c e d s

4、e r i o u se f f e c t ．o nt h e d e v e l o p m e n t o f g l o b a le c o n o m y ．T h e c a u s a t i v ea g e n to f S A R S i s a n e w l y i d e n t i f i e dc o r o n a v i r u s ，n a m e dS A R S - C o y b yt h e

5、W o r l dH e a l t hO r g a n i z a t i o n o n1 6 t h A p r i l ，2 0 0 3 ．S A R S - C o V i s ap o s i t i v e —s t r a n d R N A v i r u s t h a te n c o d i n gf o u rm a i ns t r u c t u r a lp r o t e i n s ，M ，N ，E

6、 ，a n dS ，c o n t a i nR N A p o l y m e r a s e ( p o l y m e r I a ，p o l y m e rI b ) ，N u c l e o c a p s i d ，S p i k ep r o t e i n ，M e m b r a n ep r o t e i n ，s m a l lm e m b r a n e p r o t e i n ，T h ev i r

7、e sh a s1 4O R F sa t l e a s t ．Sp r o t e i ni st h em a i ns t r u c t u r e p r o t e i no f S A R S —C o y , a n dt h em a x i m a l p r o t e i n ，c o m p o s i n gt h ei m p o r t a n tv i r u sa n t i g e n ．Np r

8、 o t e i ni n t e g r a t ew i t ht h ev i r u sR N A t i g h t l y , e n l a c i n gt h ev i r u sg e n o m es u r f a c et o f o r mt h et w i s tn u c l e o c a p s i d ，p l a ya ni m p o r t a n tr o l ei nt h eR N A

9、t r a n s c r i p t i o na n d v i r u sc o n f o r m a t i o n ．T h r o u g ht r a c k i n g i n v e s t i g a t e o ft h e m e d i c i n e sa n d S A R Sp a t i e n t s ，w e h o l d t h eg e n e r a l c a s eo f S A R

10、S e p i d e m i ci nT i a n j i n ．F o re x a m p l e ，t h ed i s e a s eb r o k e o u ti nh o s p i t a l sa t f i r s ta n dm o s to f t h ei n f e c t i o na r em e d i c i n e s ．T h ed e a t hd a t eh a s r e v e r

11、s e r e l a t i o nw i t ht h ea g e ．A t t h e s a m et i m e ，w ec o n f o r m t h ee p i t o p e o f S p r o t e i na n d N p r o t e i n ，a c c o r d i n gt ot h er e s u l t so f b i o i n f o r m a t i c s a n a l

12、y s i s ．S p i k ea n dN u c l e o e a p s i d p r o t e i ng e n ew e r e o b t a i n e db yp o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n ，s u b s e q u e n t l yc l o n e di n t op E T - H v e c t o r ．T h er e c o m b

13、i n a n tp l a s n t i dp E T - H S 1 ，p E T - HS 3 ，p E T - H S 4 ，p E T - H S 5 ，p E T - H N 1 ，p E T - H N 3a n d p E T - H N 4w e r et r a n s f o r m e di n t oh o s t c e l lB L 2 1 ∞E 3 ) ．A f t e r i n d u c i n

14、gb y I P T G , t h ee x p r e s s i o nl e v e lw a s a b o u t2 0 —3 0 ％．W e s t e r n - b l o ta n a l y s i s d e m o n s t r a t e d t h a t t h er e c o m b i n a n tp r o t e i n sr e a c t e d w i t hS A R Sp o s

15、i t i v e s e r a o f r e c o v e r e dp a t i e n t sb u tn o tw i t hn o r m a ls e r a t e s t e dM e a n w h i l e ，B A L B ／cm i c e w e r ei m m u n i z e dw i t hr e c o m b i n a n tS p r o t e i n e x p r e s s

16、e di nE ．．c o l i ．a(chǎn) n dt h en e u t r a l i z i n gt i t e ro fa n t i ·s e r u m ．w a s1 ：3X 1 0 ’．P r o t e i nd e t e c t i o n e x h i b i t e d ap o s i t i v e r a t e w i t hd i a g n o s i sa g e ．s ．T h e

17、s er e s u l t sm a y b eo f h e l pf o rf u r t h e re x p e r i m e n ts t u d yt h ee p i d e m i cr u l e ，t h eo r i e n t a t i o na n d f u n c t i o no f Sa n d N p r o t e i no nS A R S ．A l s oh e l p f u lf o

18、r t h eS A R S p r e v e n t i o na n d d i a g n o s i s ．K e yw o r d ：S A R S - C o V R e c o m b i n a n tS 、N p r o t e i n s P o l y c l o n a l A n t i b o d yT i a n j i n S A R S E p i d e m i c G e n e r a l C