SARS冠狀病毒核殼蛋白、棘突糖蛋白單克隆抗體的制備及鑒定.pdf

1、　　本研究主要包括以下三個方面的內(nèi)容：　　一、SARS-CoVN蛋白單克隆抗體的制備及其性質(zhì)分析。我們用基因重組SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠，采用雜交瘤技術(shù)，用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細胞，制備單克隆抗體。通過免疫雙向擴散、間接ELISA、間接免疫熒光、和WesternBlot等方法鑒定抗體的特性。融合后共挑出576個克隆，得到抗基因重組SARS-CoVN蛋白單克隆抗體19個，陽性克隆率為3.3％。19株單抗中有

2、15株能穩(wěn)定分泌抗體，其中10株與滅活的SARS-CoV(北京GBI生物技術(shù)有限公司試劑盒)呈陽性反應(yīng)。該10株單抗的相對親和力在1.1×108～8.9×109M-1之間。10株中有1株為IgG2b、1株為IgG3，其余均為IgG1。10株單抗中有8株與12種肺炎相關(guān)的病原體無交叉反應(yīng)，1株與甲型、乙型流感病毒，副流感病毒有交叉反應(yīng)，1株與甲型、乙型流感病毒有交叉反應(yīng)。最終得到8株特異性好、親和性高且與其它相關(guān)病原體無交叉反應(yīng)的單克隆抗

3、體?！　《?、SARS-CoVS蛋白單克隆抗體的制備?！　∪⒂每筍ARS-CoVN蛋白單克隆抗體初步建立檢測SARS-CoV的雙抗體夾心ELISA方法?！　”疚牟捎眉谆w維素半固體培養(yǎng)基制備抗SARS-CoVN、S蛋白的單克隆抗體，成功獲得了抗SARS-CoVN蛋白的單抗，并建立了檢測SARS-CoV的雙抗體夾心ELISA方法。本研究所制備的單克隆抗體可以為SARS-CoV的基礎(chǔ)與臨床研究提供有力的工具，建立的雙抗體夾心ELISA