運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷后，tnfα引起背根神經(jīng)節(jié)中nav1.6和nav1.8上調(diào)的研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷后，TNF-α引起背根神經(jīng)節(jié)中Nav1.6和Nav1.8上調(diào)的研究姓名：何昕華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：劉先國20090526中山大學(xué)博士學(xué)位論文 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷后，T N F —a 引起背根神經(jīng)節(jié)中N a v l ．6 和N a v l ．8 上調(diào)的研究和N a y I ．8 的表達(dá)情況和細(xì)胞定位。我們發(fā)現(xiàn)( 1 ) L 5 ．V R T 后l d 就可引起N a y I ．6和N a v

2、l ．8 在大鼠雙側(cè)L 4 及L 5D R G 內(nèi)m R N A 和蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)，7 d 達(dá)到高峰，至術(shù)后5 周時(shí)仍有一定水平表達(dá)；( 2 ) L 5 ．V I 玎l(xiāng) d 可以引起N a v l ．8 ．I R ( N a v l ．8i m m u n o r e a c t i v i t y , N a v l ．8 ．I R ) 在大鼠雙側(cè)近端坐骨神經(jīng)內(nèi)顯著增強(qiáng)，7 d 達(dá)到高峰，至術(shù)后5 周時(shí)仍有顯著性差異：L 5 一Ⅵ玎3

3、 d 可以引起N a v I ．8 ．I R 在大鼠雙側(cè)遠(yuǎn)端坐骨神經(jīng)內(nèi)顯著增強(qiáng)，1 4 d 達(dá)到高峰，顯著性差異可以維持到術(shù)后5 周。( 3 ) 在損傷側(cè)L 4 和L 5D R G 內(nèi)，N a y I ．6 的免疫活性在L 4 、L 5D R G 內(nèi)的傷害性感受C類神經(jīng)元中增強(qiáng)，而N a v I ．8 的免疫活性在A 類神經(jīng)元和C 類神經(jīng)元均有增強(qiáng)，但以C 類神經(jīng)元為主；( 4 ) 在損傷側(cè)L 4 、L 5D R G 內(nèi)，大部分T N

4、F - o ．陽性神經(jīng)元同時(shí)表達(dá)N a v I ．6 和N a v l ．8 ；( 5 ) 在坐骨神經(jīng)周圍給予低劑量的r r T N F ( P S T ) ，觀察到損傷側(cè)L 4 、L 5D R G 內(nèi)N a v l ．6 一I R 和N a v l ．8 ．I R 增強(qiáng)。( 6 ) 在體外培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞中，分別添加不同劑量的r r T N F 處理5 小時(shí)，和溶劑對(duì)照組相比，l p g ／m l —r N F 對(duì)N a v

5、 I ．6 表達(dá)無影響，1 0 p g ／m l ，l O O p g ／m l 和1 0 0 0 p g ／m l柵可引起N a v l ．6 一I R 顯著性增強(qiáng)( p < 0 ．0 0 1 ) 。I p g ／m l 和l O p g ／m l 的椰對(duì)N a y I ．8 表達(dá)無變化，添加l O O p g ／m l 和1 0 0 0 p g ／m l r r T N F 后，N a v I ．8 一I R 顯著性增強(qiáng)( p

6、 < o ．0 0 1 ) 。上述結(jié)果表明，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷( L 5 ．V R T ) 后，N a v I ．6 和N a v I ．8在大鼠雙側(cè)L 4 和L 5 D R G 內(nèi)的表達(dá)均增強(qiáng)，D R G 內(nèi)N a v I ．6 和N a y I ．8 的表達(dá)增加與T N F ．a(chǎn) 增加密切相關(guān)。第二部分T N F ．a(chǎn) 在L 5 ．V R T 引起背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)N a v l ．6 和N a v l ．8 上調(diào)中的作用本實(shí)驗(yàn)以行為學(xué)測(cè)

7、試為指標(biāo)結(jié)合免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)，觀察了T N F - o ．對(duì)D R G 神經(jīng)元內(nèi)N a y I ．6 和N a v I ．8 表達(dá)的影響，我們發(fā)現(xiàn)( 1 ) 術(shù)前2 h 腹腔注射t h a l i d o m i d e ，而后每天1 次，持續(xù)7 d ，能有效緩解L 5 ．V R T 引起的神經(jīng)病理性疼痛，并顯著降低N a v l ．6 和N a y I ．8 在D R G 內(nèi)的表達(dá)；( 2 ) 術(shù)后7 d 給予t h a l i