菘藍(isatisindigoticafort.)離體培養(yǎng)系統(tǒng)的建立及其次生代謝產(chǎn)物的分析

1、西南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文菘藍（IsatisindigoticaFort.）離體培養(yǎng)系統(tǒng)的建立及其次生代謝產(chǎn)物的分析姓名：陳敏申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：孫敏2001.6.1墮壹塑薹叁堂堡：! ：堂垡鯊塞 墮些查堡墮鲞墨竺墮壟皇絲基墊竺垡墮蘭絲豎坐! 盟菌菌株A 4 在菌液光吸收值為0 ．7 石并耐，致根能力最強。利用不同外植體愈傷組織、真葉、葉柄、子葉和胚軸等進行遺傳轉(zhuǎn)化，f 葉的轉(zhuǎn)化根誘導(dǎo)率最高。萌發(fā)4 - - 5 天的幼

2、苗所處的生理狀態(tài)最適。白：轉(zhuǎn)化。預(yù)培養(yǎng)2 ~ 3 天、共培養(yǎng)2 ~ 3 天轉(zhuǎn)化根誘導(dǎo)率最f 苛。5 0 m g ．L - 。乙酰J + 香酮( A S )同時加入轉(zhuǎn)化菌液和培養(yǎng)繁中轉(zhuǎn)化根誘導(dǎo)率最高，5 0n a g ．L - 1 A S 加入培養(yǎng)基中與前者誘導(dǎo)率相近，后者更為經(jīng)濟。通過對轉(zhuǎn)化毛狀根中冠癭堿的檢測，證明R i 質(zhì)粒T —D N A 轉(zhuǎn)移并整合到菘藍基剛組【f 1 。對轉(zhuǎn)化的毛狀根進行J ’離體培養(yǎng)。選取4 個毛狀根優(yōu)良厄性

3、系進俐者養(yǎng)，H R 4 毛狀根系的生l 之速度和靛藍、靛1 i 紅產(chǎn)量最高，分別為1 6 ．6 8g ．1 2 1 D W 、1 3 8 ．2 8m g ．L - ’和1 0 3 ．5 8m g ．L - 。：對苯本培養(yǎng)基進行了選擇，毛狀根猙二I P 2M S 培養(yǎng)基q l ／t - ：長最決，靛藍、靛玉紅產(chǎn){ 蔗也最高；對毛狀根生長速率進行了測定，在2 0d 生物量和靛藍、靛{ 理1 ．J ”敬達劍最大，分別為1 5 ．3 6g ．U

4、 1 D W 、1 2 4 ．4 2 m g ．L - l 和9 1 ．8 5 m g ．L - 1 。應(yīng)用商效液十¨色譜法對毛狀根、原植物、愈傷組織和懸浮細胞∽} 要次' i ：4 弋N i ”物靛藍、靛玉紅產(chǎn)量進行了檢測。結(jié)果表明，毛狀根中靛藍、靛玉紅的產(chǎn)醚最商：原植物1 1 I 其；次，根的產(chǎn)量比較低；懸浮細胞和愈傷組織中產(chǎn)量最低。毛狀楸中靛藍產(chǎn)疑為8 ．3 6 m g g ‘D W ，足原植物的葉5 ．2 9m

5、 g ．g - 。D W 的1 ．5 8 倍，比原植物根3 ．2 1 m g ．g 。D W 提高了3 ．6 0 倍；。剖犬根·1 ，靛1 疆L的產(chǎn)爵比原植物的根、n P T 々l l 商，為6 ．2 6 m g ．g - ’D W ，赴塢I 植物¨t30 7m 9 9 1 D W 的2 ．0 4 f 卉，J 樂植物卡【{ 1 ．9 6 m g ．g “D W 的3 ．1 9 儕。毛狀根- 1 ·靛蕊產(chǎn)鞋是

6、愈傷g I - } Y1 ．5 8m g ．g 。D W 的5 ．2 9 倩，足懸浮細胞2 ．1 6m g ．g “D W 的3 ．8 7 俏：靛K } I 是愈傷R [ I R J t 1 0 6n l g ．g ‘。D W 的5 ．9 1 倍．是慫浮細胞( 1 ．2 4m g ．g l D W ) I 。門5 ．0 5 俏。建●．的離體培養(yǎng)系統(tǒng)- h 愈傷, ( ' t l f J t 和l 細胞懸浮培養(yǎng)能撿測劍；久生代謝產(chǎn)

7、物靛藍、靛{ 渤，f f l 足J “‘冪比較低：遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)獲得的毛狀根其- f - r ' f t ：i , , q , ．i 完整的表迭通路，次生代崩產(chǎn)’物靛磕和靛l 渤的J 。毓都大人地提高。雖然= i 者培養(yǎng)條件都可以人I | } 矧，0 ，H ／t < K 快，I 】J ‘以進行離體培養(yǎng)，但毛狀根巾j i - ．要薌W { j 成分高，特別適合_ f 大艦?zāi)Ｅ囵B(yǎng)。 ，．一J關(guān)鍵詞：菘藍 愈傷組織 懸浮細胞 發(fā)根