牛源s.aureus的分離、鑒定及其粘附因子fnbp和clfa的克隆與表達(dá)

1、石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文牛源S.Aureus的分離、鑒定及其粘附因子FnBP和clfA的克隆與表達(dá)姓名：劉君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：陳創(chuàng)夫20080501A b s t r a c tB o v i n em a s t i t i s ，a l li n f l a m m a t i o no f t h em a m m a r y # a n d , i s t h em o s ti m p o r t a

2、n t f a c t o rc o n t r i b u t i n g t oe c o n o m i cl o s s e si nt h ed a i r y i n d u s t r y ．A l t h o u g hr e s e a r c h e r s w o r k h a r da l lo v e rt h ew o r l d ，t h e r ei sn o g o o dm e t h o d t

3、oc o n t r o l i t ．T h e m o s tc o n t r o l m e t h o d i su s i n g a n t i b i o t i c s ．I ti sn e c e s s a r y t oc r e a t en e w m e t h o d i no r d e r t oc o n t r o lm a s t i t i s , b e c a u s e a n t i

4、b i o t i c sn o t o n l yh a v es i d ee f f e c ．t ，a l s oi t C a n d e c r e a s em i l k q u a l i t y ．C e r t a i n l y ，v a c c i n ep r e v e n t i o n i st h eb e s tw a y f o rc o n t r o l l i n g ．P a t h o

5、g e n i cs u r v e ys h o w e dt h a t S t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ( S ．A ) i sc a u s e dC O W m a s t i f f st h em a i np a t h o g e n i cf a c t o r ， B u tt i l l t o d a y ，o n l yE ．c o l if o r mJ 5 v

6、 a c c i n ei ss u c c e s s f u l l y d e v e l o p m e n t ， i t s p r o t e c t i o n r a t i o i s m o r e t h a n 8 5 ％．H o w e v e r ，t h eG r a m - p o s i t i v ev a c c i n e r a r e ， e s p e c i a l l yS t a p

7、 h y l o c o c c u s ，t h e r e f o r e ，’f o rS t a p h y l o c o c c u sa u r e u sv a c c i n er e s e a r c hi s a ni m p o r t a n t ‘v a l u e ．T h e t r a d i t i o n a li n a c t i v a t e dv a c c i n ea n d l o

8、 wv i r u l e n c ev a c c i n e a r e n o te f f e c t i v e ，t h i ss t u d y u s e dm e t h o d s o f g e n e t i ce n g i n e e r i n g ，c l o n i n ga n d e x p r e s s i o no ft h eo r i g i n a lC O W m a s t i f

9、f sm a j o r p a t h o g e n i cS t a p h > ’l o c o c c u sa u r e u sa n t i g e ng e n e - t h ea d h e s i o nf a c t o r c l f A ，F(xiàn) n B P ， f o rf u r t h e rs t u d yC O W SM a s t i t i sS t a p h y l o c o c c

10、 u sa u r e u si nt h eb r e a s tt i s s u e ( m i l kd u c t ) o f t h ea d h e s i o n ， g r o w t ha n d c o l o n i z a t i o nF n B P a n dc l f At w o g e n e s t o g e t h e r s y n e r g i e s o f l i v e s t o

11、c ki n f e c t e d w i t h t h e m o l e c u l a rm e c h a n i s mp r o v i d e s a ‘t h e o r e t i c a l b a s i s ， b u ta l s o f o r t h ed e v e l o p m e n to fg e n e t i ce n g i n e e r i n gC O W Sm a s t i f

12、 f s v a c c i n e ．A n dt h ed e v e l o p m e n to fa d j u v a n tt o p r o v i d ean e w w a y o ft h i n k i n ga n dd i r e c t i o n ．S o u r c e s f r o mt h ea n i m a l s ( c o w s ) w a s i s o l a t e dM R S

13、A a n d h i g h l i g h t sf r o mt h eg r a s s r o o t sv e t e r i n a r yt r e a t m e n t o f a v a r i e t y o f d i s e a s e s c a u s e db y b a c t e r i aa d m i n i s t r a t i o n f o c u s ，e x p r e s st h

14、 e g e n e e n c o d i n gF n B P 、c l f Ao fS t a p h y l o c o c c u sa u r e u sa n dp r o v i d et a r g e tp r o t e i nf o rf u r t h e ri m m u n o l o g i c a ls t u d y ， a tt h es a n l e t i m et os t u d y t

15、r e a t m e n t o f m a s t i t i si nd a i r eC O W Sp r o v i d e s t h e t h e o r e t i c a lb a s i s f o r v a c c i n ea n dd r u g r e s e a r c ha n dd e v e l o p m e n t ， s u c h a sp r o v i d i n g d i r e

16、c t i o z ．R e c o v e r y s t r a i n b y c o n v e n t i o n a l m e t h o d s ， w i t h c o a g u l a s e t e s tr e v e r i f i c a t i o nS A ，K B ，a g a r 。s c r e e n i n g m e t h o d ，a p p a r a t u s I d e n t

17、 i f i c a t i o nA c t ( v r r E r J 2 ) ，t h ep o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n m e t h o d ．T h ec o n v e n t i o n ．a(chǎn) l i d e n t i f i c a t i o no fS t a p h y l o c o c c u s1 0 5 s t r a i n s ， S t a

18、p h y l o c o c c u sa u r e u s ( S t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ， S A ) 6 2s t r a i n s ， M R S A 1 3s t r a i n s d e t e c t i o nr a t eo f 2 0 ．1 0 ％，B l u r r e d2s t r a i n s ．A m p l i f y F n B P ／c l

19、 f Ag e n ef r o m t h eg e n o m i c ( C 2 6 9 4 ) D N A o fs t a n d a r d S t a p h y l o c o c c u sa u r e u ss t r a i n C 2 6 9 4 b yP C R a n di n s e r ti n t o p G M —Tv e c t o r b yT | A c l o n i n g ．D i g

20、e s t t h e r e c o m b i n a n tp l a s m i d w i t h r e s t r i c t i o ne n d o n u c l e a s e B a m H ! ／N c o la n d X h o Ia n d c l o n e t h eo b t a i n e d g e n ef r a g m e n t s i n t op E T - 2 8 a ( + )v

21、 e c t o r ．T r a n s f o I T S t h e c o n s t r u c t e d r e c o m b i n a n t p l a s m i d p E T - 2 8 a ( + ) 一F n B P ／c l f A i n t oB L 2 1 ( D E 3 ) fp E T s y s t e m f o re x p r e s s i o n o fT r i x —F n B