水稻黃單胞xanthomonasoryzaepv.oryzicolars105lps合成基因簇的功能分析

1、⑧9 《1 0 3 6* 類日——塾韭二L 一學{ —三業(yè)絲避蝗一南京愛鼉戈蓬博士學位論文水稻黃單胞X a n t h o m o n o s o r y z a e p v o r 慣把。脅R S l 0 5L P S 合成基因簇的功能分析龍菊英猜導教師 王壘生熬援專業(yè)名稱 擅塑癩堡堂研籠萬向 垃士i 自塑痘堡堂答辯u 明 ．旦Q 亙生△旦全文摘要水稻黃單J 孢X a n t h o m o n a s o r y z a e p v

2、 ．o r y z i c o l aR S 10 5l p s 合成基因簇的功能分析摘要水稻白葉枯病菌X a n t h i m o n a so r y z a e p v ．o r y z a e ( X o o ) 和水稻細菌性條斑病菌X a n t h i m o n a so r y z a ep v ．o r y z i c o l a ( X o o c ) 是水稻上的兩個致病變種。X o o 在亞熱帶國家成為一個重要的

3、病害，在一定的栽培和生長季節(jié)發(fā)生X o o 可以導致5 0 ％以上的損失。X o o c 只分布在熱帶地區(qū)，亞洲包括孟加拉，柬埔寨，中國的福建、廣東和海南，發(fā)生嚴重的水稻也會造成葉片枯死和產(chǎn)量損失。同時兩個模式種菌株也是研究植物病害的重要模式菌株，對兩個病原細菌致病機理的了解有利于提高病害防治水平或改進防止策略。由于X o o 和X o o c 限制修飾系統(tǒng)阻止細菌接受外源D N A ，對X o o 和X o o c 進行的反向遺傳學研

4、究在很大程度上受到了限制，在一定程度上限制了我們對兩病原細菌的致病分子機制的理解。本文通過反向遺傳學研究初步論證了X o o c 菌株R S l 0 5 L P S與致病性的關(guān)系，從研究手法和致病機理兩個方面為理解X o o c 和X o o 做了一點鋪墊。1 突變體的獲得和陽性克隆的篩選通過化學誘變獲得來自于X o o c 菌株R S l 0 5 和X o o 菌株P(guān) X 0 9 9 喪失胞外多糖( E x o p o l y s a

5、 c c h a r i d e ) 和在水稻上致病力( P a t h o g e n i c i t y ) 西5 突變體，表示為E P S ‘P a t h 。。從R S l 0 5 中得到6 個突變體，分別是M 1 2 、M 1 3 、M 1 7 、M 1 9 、M 2 1 、M 2 3 ：從P X 0 9 9 中得到三個突變體K 7 、K 2 1 、K 2 3 。以M 1 2 為誘餌從2 2 0 0 個R S l 0 5 的基

6、因組文庫中釣取一個陽性克隆P 3 5 ，同時以K 7 為誘餌從2 0 0 0 個P X 0 9 9 基因組文庫中得到一個陽性克隆A 2 8 6 。P 3 5 陽性克隆以K p n I 和艮。對完全消化產(chǎn)生的亞克隆不能夠恢復M 1 2 的功能，K p n I 不完全消化得到一個包含兩個勛n I 片段的克隆P K 2 3 恢復了突變體的表型，進一步B a m H I 亞克隆P K 2 3 ( 1 2 ．7 k b ) 也不能夠產(chǎn)生有功能的片

7、段，而艮D(zhuǎn) R j 不完全消化產(chǎn)生的6 ．7 8 k b 的亞克隆P 8 0 恢復了M 1 2 的功能。序列測定表明6 ．7 8 k b 片段中可能包含7 個基因，分別有一個K p n I 、E c o R I 切割在O R F l 內(nèi)，但是包含O R F l 的B a m H I亞克隆片段也不能夠恢復M 1 2 的功能，說明恢復M 1 2 的功能需要O R F l 和包含B a m H I位點的另外一個基因O R F 2 同時參與。通