水稻OsAFC2基因的功能分析.pdf

1、水稻是重要的糧食作物，同時(shí)也是基因組研究的模式植物。真核生物的基因大多是由外顯子與內(nèi)含子相間組成的斷裂基因，且其正常表達(dá)伴隨著mRNA的精確剪接，繼而翻譯成功能不同的蛋白質(zhì)發(fā)揮作用。擬南芥中AtAFC2可以和幾種SR蛋白相互作用，SR蛋白會(huì)對(duì)下游可變剪切體產(chǎn)生影響，從而影響mRNA的可變剪切。然而在水稻基因研究中，關(guān)于調(diào)控mRNA可變剪切相關(guān)的報(bào)道較少，因此本研究克隆了水稻OsAFC2并對(duì)其功能進(jìn)行了初步的探究。
　　1)通過(guò)對(duì)水

2、稻RNAi突變體庫(kù)的篩選，獲得了OsAFC2基因沉默的突變體植株;克隆OsAFC2基因，通過(guò)生物信息學(xué)對(duì)其分析，發(fā)現(xiàn)水稻OsAFC2基因與擬南芥中AtAFC2基因相似度較高，OsAFC2與AtAFC2蛋白序列一致性為70.05％;
　　2)亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)表明，OsAFC2定位于細(xì)胞核內(nèi)，表明OsAFC2在細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮功能;
　　3)實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明OsAFC2在水稻的各個(gè)組織部位均有表達(dá)，其中在葉片中表達(dá)量最高，莖中表

3、達(dá)量最低;
　　4)構(gòu)建OsAFC2的沉默和過(guò)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化日本晴得到轉(zhuǎn)基因株系。通過(guò)鏈特異性轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在RNAi轉(zhuǎn)基因植株中檢測(cè)到的特有可變剪切比對(duì)照增加了50.01％，過(guò)表達(dá)植株中可變剪切的數(shù)量也有所增加，說(shuō)明水稻中OsAFC2基因正常水平的表達(dá)，能夠穩(wěn)定的調(diào)控下游SR蛋白以及可變剪切輔助因子，這與擬南芥中AtAFC2基因相似，沉默或過(guò)表達(dá)，都會(huì)擾亂SR蛋白磷酸化水平，影響下游可變剪切輔助因子間的相互作用，導(dǎo)致某些特