大腸桿菌烷基過氧化氫還原酶(ahpfahpc)的結(jié)構(gòu)與功能研究與大腸桿菌ycjy蛋白的結(jié)構(gòu)與功能研究

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：低超啄 簽字日期： ：2 6f f 年 j 月2 歹日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解安徽大

2、學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。( 保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：7 糸越啄簽字日期：2 。旺年j 月≥夕日導(dǎo)師簽名： 訓(xùn)令盹簽字日期： 砂l(fā) 歹年 ‘月f 日大腸桿菌烷基過氧化氫還原酶( A h p F - A h

3、 p C ) 的結(jié)構(gòu)與功能研究和大腸桿菌Y c i Y 蛋白的結(jié)構(gòu)與功能研究們在A I 】p F 晶體結(jié)構(gòu)中捕捉到開放的構(gòu)象可能是A h p F 進(jìn)行分子間電子傳遞的中間態(tài)。肽聚糖是細(xì)菌細(xì)胞壁中重要和獨(dú)特的組分，位于細(xì)胞質(zhì)膜外，它的主要功能是通過抵抗高滲透壓來保持的的完整性和保持細(xì)胞形態(tài)。在肽聚糖代謝過程中，P g r R 是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，它作為一個(gè)阻遏蛋白調(diào)控參與肽聚糖寡肽降解基因的表達(dá)，它可以直接結(jié)合到p g r R _ L 游和反

4、向y c j Y - y m j D - y m j C —m p a A 基因簇之間的操縱子上，調(diào)控y c j Y y 咖D - y m j C - m p a A 基因簇的表達(dá)。最近有報(bào)道說，過量表達(dá)y c j Y y m j D —y 刪C - m p a A 基因簇中的未知水解酶y 巧Y 能夠?qū)е麓竽c桿菌細(xì)胞變長呈絲狀表型，推測Y c j V 可能在大腸桿菌細(xì)胞生長和分裂過程中起作用。事實(shí)上，肽聚糖水解酶對細(xì)胞形狀和生長狀況有重

5、大影響。本論文我們解析了大腸桿菌V c j V 蛋白的晶體結(jié)構(gòu)( 分辨率2 ．0A ) 。Y c j Y 的單體結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出一個(gè)經(jīng)典的0 【伊水解酶折疊，它可以分為兩部分：一個(gè)核心催化結(jié)構(gòu)域和一個(gè)插入( i n s e r t i o n )結(jié)構(gòu)域。核心催化結(jié)構(gòu)域有一個(gè)中心8 D 折疊，大部分是平行的p 折疊，其中p 2是反向平行的。中心p 折疊兩側(cè)是a 螺旋，一側(cè)是a l ，a l l 和a 1 2 ，另一側(cè)是砣，Q 3 和a l O

6、。中心B 折疊呈現(xiàn)出一個(gè)左手超螺旋扭轉(zhuǎn)，p l 和p l O 呈9 0 0 C 。插入?yún)^(qū)域( i n s e r t i o n ) 位于中心1 3 折疊的D 6 和p 9 之間的l o o p 上。插入?yún)^(qū)域由一個(gè)小的反平行p ．發(fā)夾( 1 3 7 ／1 3 8 ) 和6 個(gè)a ．螺旋( a 4 ，a 5 ，a 6 ，a 7 ，a 8 和a 9 ) 組成，它們共同組成一個(gè)位于核心催化結(jié)構(gòu)之上的帽子結(jié)構(gòu)。我們通過凝膠過濾層析研究了V c

7、j Y 在溶液中的聚集狀態(tài)，它表現(xiàn)出一個(gè)單一的峰，層析峰對應(yīng)分子量大小為5 8 ．8 8 k D a ，表明它在溶液中以二聚體形式存在( 單體是3 3 ．7k D a ) 。與其他a ／1 3水解酶相比，我們確定了v e j Y 作為半胱氨酸水解酶的催化位點(diǎn)，通過細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)確定了這些位點(diǎn)的重要性。我們還發(fā)現(xiàn)，V c j Y 的功能可能受到在同一操縱子基因y m j D ，y m j C 和m p a A 的拮抗效應(yīng)影響。綜上所述，v