1.mc3t3—e1細(xì)胞分化過程中dna甲基化的研究;2.taurine抑制破骨細(xì)胞分化的機(jī)制研究

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文1.MC3T3—E1細(xì)胞分化過程中DNA甲基化的研究;2.Taurine抑制破骨細(xì)胞分化的機(jī)制研究姓名：劉瑋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：廖二元20100501博+ 學(xué)位論文 中文摘要化基因5 0 個(gè)，低甲基化基因9 3 個(gè)，基質(zhì)分泌期高甲基化基因9 6 個(gè)，低甲基化基因4 3 個(gè)，礦化期高甲基化基因5 2 個(gè)，低甲基化基因1 4 7 個(gè)。這些差異甲基化基因主要涉及程序性細(xì)胞死亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)以及信

2、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等廣泛的生物學(xué)過程。M a s s A R R A Y D N A 甲基化定量分析結(jié)果與甲基化芯片結(jié)果吻合?；騿?dòng)子區(qū)域D N A 甲基化抑制C a m k l d ，B m p r l b ，F(xiàn) b l n 7 ，I t g a 3 ，P i a s 2 ，P c d h a l 2 ，M d m 4 ，T m e m 5 4 m R N A 的表達(dá)，去甲基化藥物R G l 0 8 可促進(jìn)細(xì)胞增殖，干預(yù)細(xì)胞后，D N A 高甲

3、基化基因m R N A 表達(dá)明顯增高。結(jié)論：培養(yǎng)0 天、1 0 天、2 4 天的M C 3 T 3 ．E 1 細(xì)胞可以代表其增殖期、基質(zhì)分泌期、礦化期三個(gè)階段。對(duì)此三個(gè)階段細(xì)胞進(jìn)行g(shù) D N A 甲基化芯片雜交，獲得了三個(gè)不同分化階段的D N A 甲基化譜。差異甲基化基因涉及廣泛的生物學(xué)過程?；騿?dòng)子區(qū)域D N A 甲基化負(fù)性調(diào)控成骨相關(guān)基因表達(dá)，去甲基化藥物R G l 0 8 可促進(jìn)細(xì)胞增殖，促進(jìn)D N A 高甲基化基因的表達(dá)。關(guān)鍵

4、詞：M C 3 T 3 - - E 1 細(xì)胞；成骨細(xì)胞分化；D N A 甲基化；甲基化芯片·一 第二部分T a u r i n e 抑制破煢鈕脾分化的機(jī)制研究膏赫第一章T a u r i n e 抑制破骨細(xì)胞分化的同時(shí)不影響成骨細(xì)胞O P G 與R A N K L 的表達(dá)目的：T a u r i n e 廣泛分布于哺乳動(dòng)物血漿以及組織中，是哺乳動(dòng)物體內(nèi)中最重要的游離b e t a ．氨基酸。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)T a u r i

5、 n e 可抑制破骨細(xì)胞的分化，但具體機(jī)制尚不十分清楚。本研究以成骨細(xì)胞與前破骨細(xì)胞共培養(yǎng)模型為研究對(duì)象，旨在探討T a u r i n e 是否通過影響成骨細(xì)胞O P G 與R A N K L 的表達(dá)來抑制破骨細(xì)胞的分化。方法：利用2 4 t J x 時(shí)內(nèi)新生小鼠顱骨和6 —8 周齡小鼠四肢長(zhǎng)骨分別分離，獲得成骨細(xì)胞和骨髓細(xì)胞，將成骨細(xì)胞與骨髓細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，同時(shí)給予不同濃度T a u r i n e 干預(yù)。共培養(yǎng)6 天后進(jìn)行破骨細(xì)胞

6、抗酒石酸酸性磷酸酶( T R A C P ) 染色鑒定。同時(shí)采用r e a l ．t i m eP C R 檢i 貝l J T a u r i n e 對(duì)成骨細(xì)胞O P G 和R A N K L 表達(dá)的影響。結(jié)果：T a u r i n e 可抑制成骨細(xì)胞／骨髓細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化，且與濃度相關(guān)。然而T a u r i n e 不影響成骨細(xì)胞O P G 和R A N K L 的表達(dá)。結(jié)論：T a u r i n e 可濃度依賴性