低載荷機(jī)械振動(dòng)對(duì)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞增殖及分化的影響.pdf

1、目的:運(yùn)用低載荷機(jī)械振動(dòng)細(xì)胞模型，評(píng)價(jià)力學(xué)載荷作用對(duì)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞生物活性的影響，探討低載荷機(jī)械振動(dòng)作用小鼠MC3T3-E1細(xì)胞成骨相關(guān)信號(hào)分子基因蛋白表達(dá)的變化。
　　方法:
　　1研究低載荷機(jī)械振動(dòng)模型對(duì)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞增殖的影響
　　采用35Hz，加速度0.25g的低載荷機(jī)械振動(dòng)裝置，作用于小鼠MC3T3-E1細(xì)胞，按每天振動(dòng)時(shí)間，分為A，B，C，D四組，時(shí)間分別為0 min，15 min，30

2、 min，60 min，連續(xù)7天。通過光鏡及MTT增殖實(shí)驗(yàn)檢測不同振動(dòng)條件下小鼠MC3T3-E1細(xì)胞增殖的變化情況
　　2研究低載荷機(jī)械振動(dòng)模型對(duì)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞分化能力的影響。
　　按上述分組，應(yīng)用低載荷機(jī)械振動(dòng)裝置連續(xù)干預(yù)14天，通過茜素紅染色及顯微鏡觀察鈣化結(jié)節(jié)數(shù)目及AIP活性測定，研究不同振動(dòng)條件對(duì)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞分化能力的影響。
　　3研究低載荷機(jī)械振動(dòng)對(duì)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞成骨相關(guān)信號(hào)分

3、子基因及蛋白表達(dá)的影響
　　按上述分組，連續(xù)干預(yù)7天，采用Real-timePCR檢測不同振動(dòng)條件下成骨相關(guān)信號(hào)分子基因TGF-β及BMP-2，Runx2的轉(zhuǎn)錄變化，WesternBlot檢測不同振動(dòng)條件下成骨相關(guān)蛋白TGF-β1、pERK及Runx2的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1 A、B、C、D組MTT實(shí)驗(yàn)分別為(0.292±0.0254)、(0.553±0.041)、(0.596±0.078)、(0.313±0.

4、037)，與A組對(duì)比，B組、C組的成骨細(xì)胞增殖變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），而D組與A組差異較?。≒＞0.05）;
　　2 A、B、C、D組ALP活性測分別為(5.014±0.094)、(7.259±0.314)、(8.529±0.186)、(5.299±0.136)。B組、C組的鈣化結(jié)節(jié)數(shù)目及ALP活性較A組、D組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，而D組與A組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;
　　3 Real-tim

5、ePCR檢測結(jié)果提示，B組、C組成骨細(xì)胞的TGF-β1、BMP-2、Runx2轉(zhuǎn)錄水平與A組、D組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05），而D組與A組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。Western Blot證實(shí)B組、C組成骨細(xì)胞的低載荷機(jī)械振動(dòng)刺激TGF-β1、pERK及Runx2蛋白表達(dá)水平與A組、D組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05），而D組與A組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1低載荷機(jī)械振動(dòng)（35Hz，加速度0