格列吡嗪對小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1增殖、凋亡及COL-1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察胰島素促泌劑（格列吡嗪）對體外培養(yǎng)的小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1株的增殖、凋亡及COL-1功能基因表達(dá)的影響。同時檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)，初步探討格列吡嗪對成骨細(xì)胞凋亡影響的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.實(shí)驗方法:以小鼠前體成骨細(xì)胞MC3T3-E1為研究對象，將試驗分為4組，分別給予10、20、50μmol/l濃度的格列吡嗪干預(yù)，對照組為含相同劑量的DMSO，干預(yù)48h后，用CCK-8法檢測

2、細(xì)胞增殖活性，Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)定量檢測細(xì)胞早期的凋亡率，Westen blotting方法檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)，實(shí)時熒光定量PCR法檢測細(xì)胞COL-1基因的表達(dá)。
　　2.統(tǒng)計學(xué)方法:數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件對實(shí)驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，多組總體比較采用單因素方差分析(One-wayANOVE)，兩兩組間比較采用LSD-t法，對Bcl-2/Bax與細(xì)

3、胞凋亡率之間采用Spearman等級相關(guān)秩檢驗。檢驗標(biāo)準(zhǔn)P＜0.05。
　　結(jié)果：
　　(1)與對照組相比，格列吡嗪干預(yù)組成骨細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng)（P＜0.05），細(xì)胞增殖活性隨著藥物濃度高而逐漸升高，組間兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。(2)與對照組相比，格列吡嗪干預(yù)組成骨細(xì)胞早期凋亡率明顯降低(P＜0.05)，且隨藥物濃度增高而逐漸降低，組間兩兩比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。(3)與對照組相比，格列吡嗪干預(yù)

4、組成骨細(xì)胞抗凋亡Bcl-2蛋白表達(dá)隨著藥物濃度增高逐漸增加(P＜0.05)，促凋亡Bax蛋白表達(dá)隨著藥物濃度增高呈遞減趨勢(P＜0.05)。Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)強(qiáng)度比與細(xì)胞凋亡率呈顯著負(fù)相關(guān)(n=12，r=-0.923，p＜0.05)(4)與對照組相比，格列吡嗪干預(yù)組成骨細(xì)胞COL-1功能基因表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05);隨著格列吡嗪濃度增高，COL-1基因表達(dá)呈上升趨勢，組間兩兩比較均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。