吡咯列酮對(duì)正常MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖、凋亡以及功能蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究不同濃度吡格列酮(PIO)對(duì)正常糖濃度培養(yǎng)下MC3T3-E1小鼠早期成骨細(xì)胞增殖、凋亡及功能蛋白分泌表達(dá)變化的影響，并了解其可能發(fā)生機(jī)制，為臨床用藥提供一定實(shí)驗(yàn)參考及依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)MC3T3-E1細(xì)胞，將實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、5μmol/L PIO組、10μmol/L PIO組、20μmol/L PIO組、40μmol/L PIO組，藥物分別干預(yù)不同時(shí)間(24、48小時(shí))。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增

2、殖能力；Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況；放射免疫法和酶聯(lián)免疫分析法分別檢測(cè)骨鈣素(OCN)和堿性磷酸酶(ALP)的分泌變化；半定量RT-PCR法檢測(cè)過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、runt家族相關(guān)基因2(Runx2)和骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：PIO作用于MC3T3-E1細(xì)胞后
　　 1、與對(duì)照組比較， MC3T3-E1細(xì)胞增殖能力

3、在5μmol/L PIO干預(yù)組增加顯著(P＜0.05)，在PIO≥10μmol/L則降低(P＜0.05)。干預(yù)時(shí)問由24h延長(zhǎng)至48h，各組細(xì)胞增殖能力呈不同程度增加，但在20、40μmol/L PIO干預(yù)的兩組增加無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。
　　 2、對(duì)照組及各PIO濃度干預(yù)組中，細(xì)胞凋亡率呈現(xiàn)先下降后增加的趨勢(shì)，各組細(xì)胞凋亡率分別為：1.97％、0.43％、13.0％、48.30％、81.00％；
　　 3、隨著PIO濃度從0～

4、40μmol/L范圍內(nèi)的增加，MC3T3-E1細(xì)胞的PPARγmRNA表達(dá)水平呈增加趨勢(shì)；Runx2 mRNA表達(dá)量在5μmol/L PIO濃度組時(shí)較對(duì)照組增加，在劑量較高時(shí)(PIO≥10μmol/L)隨濃度升高表達(dá)下降。
　　 4、細(xì)胞功能蛋白ALP、OCN的分泌及BMP-2的表達(dá)在5μmol/L PIO濃度組時(shí)最高，PIO≥10μmol/L時(shí)，上述蛋白量逐漸下降(P＜0.05)；隨干預(yù)時(shí)間從24～48小時(shí)延長(zhǎng)，各PIO濃度干

5、預(yù)組ALP以及BMP-2量增加(P＜0.05)，而OCN無顯著改變(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、吡咯列酮對(duì)正常糖濃度培養(yǎng)的MC3T3-E1小鼠早期成骨細(xì)胞存在雙向作用：在一定濃度(5μmol/L)可抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖及相關(guān)功能蛋白表達(dá)和分泌；劑量較高時(shí)(≥10μmol/L)則明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖及功能；
　　 2、正常糖濃度下，吡咯列酮能激活PPARγ，下調(diào)相關(guān)成骨信號(hào)通路，導(dǎo)致成