天然藥物化學(xué)電子教案第四章節(jié)色譜分離法課件

1、高等職業(yè)教育技能型人才培養(yǎng)培訓(xùn)工程系列教材,第四章 色譜分離法,知識目標(biāo)：,掌握各種色譜分離技術(shù)的特點(diǎn)及適 用范圍。 理解色譜分離方法的基本原理。 了解色譜分離方法的分類。,能力目標(biāo)：,能夠熟練使用氧化鋁色譜法、硅膠色譜法、聚酰胺色譜法、離子交換色譜法、薄層色譜法、紙色譜法的操作技術(shù)對天然藥物提取液進(jìn)行分離。 學(xué)會活性炭色譜法、凝膠色譜法、大孔吸附樹脂法、電泳技術(shù)、干柱色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法的操作技術(shù)。,本 章

2、內(nèi) 容,,概 述,基本知識,,同步測試,,本章小結(jié),,,,色譜技術(shù),如果天然藥物的提取物中含有一些結(jié)構(gòu)相似、性質(zhì)相近的化學(xué)成分，用一般分離方法無法獲得分離，那么，使用色譜分離法往往能獲得較好的分離效果。色譜分離法具有試樣用量少，分離效率高的特點(diǎn)，是目前被廣泛應(yīng)用的分離純化和鑒定化合物的一種有效方法。具體應(yīng)用時，可根據(jù)被分離化合物的性質(zhì)和各種色譜分離法的特點(diǎn)，選擇合適的色譜方法。,概 述,本章學(xué)習(xí)的色譜分離方法有氧化鋁色譜法、硅膠色譜法、

3、活性炭色譜法、聚酰胺色譜法、離子交換色譜法、大孔吸附樹脂法、凝膠色譜法、薄層色譜法、紙色譜法、電泳技術(shù)、干柱色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法。,概 述,,概 念,概 念,色譜分離法（Chromatography）是一種分離、純化和鑒定化合物的現(xiàn)代理化分離分析方法。,（1）按色譜分離原理的不同可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、電泳技術(shù)等。,色譜分離法的分類,色譜法分類,（2）按操作方式的不同分類可分為柱色譜、紙色譜、薄

4、層色譜和毛細(xì)管電泳色譜等。,（3）按固定相或支持劑種類的不同分類可分為氧化鋁色譜、硅膠色譜、聚酰胺色譜、凝膠色譜等。,（4）按移動相種類的不同分類可分為氣相色譜、液相色譜和超臨界流體色譜等。,色譜分離法的基本原理,色譜法原理,利用混合物中各成分在固定相和移動相中吸附、分配及其親和力的不同，當(dāng)兩相作相對運(yùn)動時，這些成分在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的吸附或分配，從而得到分離。,色譜分離法的基本原理,1．吸附色譜的原理,利用作為固定相的吸附劑對混合物

5、中各種成分吸附能力的大小不同，使各成分得到相互分離。,常用的吸附劑有：硅膠、氧化鋁、聚酰胺和活性炭。,色譜法原理,色譜分離法的基本原理,1．吸附色譜的原理,應(yīng)用吸附色譜時，需全面考慮吸附劑、溶劑及被分離成分三者間相互聯(lián)系又相互制約的關(guān)系，選擇合適的條件，使達(dá)到分離的目的。,如果被分離物質(zhì)的極性較大，可選用活度較低的吸附劑和極性較大的移動相；如果被分離物質(zhì)的極性較小，可選用活度較高的吸附劑和極性較小的移動相。,色譜法原理,色譜分離法的基本

6、原理,1．吸附色譜的原理,常見一些化合物官能團(tuán)的極性大小順序如下：,色譜法原理,色譜分離法的基本原理,2．分配色譜的原理,利用混合物中各成分在互不相溶的兩相溶劑中分配系數(shù)的不同而獲得分離。兩相溶劑中的一相需作為固定相，常以某種惰性固體吸住該相溶劑，使之固定，這種吸著了固定相溶劑的固體物質(zhì)稱為支持劑（也稱載體或擔(dān)體）；另一相溶劑則作為移動相。,色譜法原理,色譜分離法的基本原理,3．離子交換色譜的原理,利用離子交換樹脂上的功能基能在水溶液中

7、與溶液的其他離子進(jìn)行可逆性交換的性質(zhì)，以離子交換樹脂作為固定相，使混合成分中離子型與非離子型物質(zhì)、或具有不同解離度的離子化合物得到分離。,色譜法原理,色譜分離法的基本原理,4．凝膠色譜的原理,以凝膠作為固定相，選擇適當(dāng)?shù)娜軇┳鳛橐苿酉?，隨著移動相的流動，由于受凝膠顆粒中網(wǎng)孔半徑的限制，被分離試樣中比網(wǎng)孔小的化合物可自由進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，而比網(wǎng)孔大的化合物不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部被排阻，只能通過凝膠顆粒外部的間隙，使混合物中分子量大小不同的化

8、合物移動速率不同而得到分離。,色譜法原理,色譜分離方法的應(yīng)用,色譜法應(yīng)用,天然藥物化學(xué)成分種類繁多，各有其特定的性質(zhì)，可選擇不同的色譜方法進(jìn)行分離。一般而言，對于非極性成分常選用硅膠或氧化鋁吸附色譜；對于極性較大的成分則選用分配色譜或弱吸附劑吸附色譜；對于酸性、堿性、兩性成分可選用離子交換色譜，有時也可選用吸附色譜或分配色譜；對于分子量大小有差異的成分則可選用凝膠色譜。,色譜分離方法的應(yīng)用,例如一般生物堿的分離用硅膠或氧化鋁柱色譜，極性

9、較大的生物堿則用分配色譜，季銨型水溶性生物堿可用分配色譜或離子交換色譜；皂苷、強(qiáng)心苷的分離可用分配色譜或硅膠吸附色譜；揮發(fā)油、甾體、萜類常首先選用硅膠及氧化鋁色譜；黃酮類、鞣質(zhì)等成分可用聚酰胺吸附色譜；有機(jī)酸、氨基酸可用離子交換色譜，有時也用分配色譜，或某些氨基酸類采用活性炭吸附色譜；而蛋白質(zhì)、多肽、多糖等大分子化合物則常用凝膠色譜。,色譜法應(yīng)用,色譜分離方法的應(yīng)用,隨著色譜理論的逐步發(fā)展，結(jié)合電子學(xué)、光學(xué)、計算機(jī)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，色譜

10、分離技術(shù)日趨儀器化、自動化和高速化，可快速分離復(fù)雜樣品中的眾多成分，現(xiàn)已逐漸成為一種重要的分離、分析工具，被廣泛用于化工、醫(yī)藥、生化和環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域。,色譜法應(yīng)用,色譜分離方法的應(yīng)用,隨著色譜理論的逐步發(fā)展，結(jié)合電子學(xué)、光學(xué)、計算機(jī)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，色譜分離技術(shù)日趨儀器化、自動化和高速化，可快速分離復(fù)雜樣品中的眾多成分，現(xiàn)已逐漸成為一種重要的分離、分析工具，被廣泛用于化工、醫(yī)藥、生化和環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域。,色譜法應(yīng)用,色譜分離方法的應(yīng)用,【

11、相關(guān)鏈接】 “色譜”的由來,20世紀(jì)初，俄國的波蘭植物化學(xué)家茨維特（M.S.Tswett）在研究植物色素的過程中，首先將植物提取物放入裝有碳酸鈣的玻璃管中，植物提取液由于在碳酸鈣中的流速不同，分布不同，因此在玻璃管中呈現(xiàn)出不同的顏色，這樣就可以對各種不同的植物提取液進(jìn)行有效的成分分離。到1907年，茨維特的論文用俄文公開發(fā)表，他把這種方法命名為chromatography，即中文的"色譜"，這就是現(xiàn)代“色譜”這一名詞

12、的來源。,色譜法應(yīng)用,,色 譜 技 術(shù),,,,氧化鋁色譜法,硅膠色譜法,活性炭色譜法,,,,,聚酰胺色譜法,離子交換色譜法,大孔吸附樹脂法,,凝膠色譜法,薄層色譜法,紙色譜法,電泳技術(shù),干柱色譜法,氣相色譜法,高效液相色譜法,,,,,,,,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,氧化鋁是一種吸附力很強(qiáng)的親水性吸附劑，有酸性、堿性、中性三種規(guī)格。其吸附活性與含水量有關(guān)，隨著含水量的增加，吸附能力減弱。氧化鋁的吸附能力大小，可根據(jù)含水量用不同的活度級別

13、來表示（表4-1），通過活化或去活化的操作得到不同活度級別的氧化鋁，一般在400℃左右加熱6小時，即可得Ⅰ～Ⅱ級的氧化鋁。,是利用作為固定相的氧化鋁對混合物中各種成分吸附能力的大小不同，使各成分得到相互分離的方法。,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,表4-1 硅膠、氧化鋁活度與含水量關(guān)系,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,常采用柱色譜（column chromatography）的操作方法。柱色譜是一種將分離材料裝入柱狀容器中，以適當(dāng)?shù)南疵搫┻M(jìn)行

14、洗脫而使不同成分得到分離的色譜分離方法，也是色譜法最早出現(xiàn)的形式。具體操作如下：,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,（1）色譜柱的選擇：實(shí)驗室常用的色譜柱的內(nèi)徑與柱長之比，常在1︰10～1︰20之間。如圖4-1所示的色譜柱裝置。如果用于分離兩種或兩種以上性質(zhì)相近的混合物，可選用細(xì)長的色譜柱；而需要從溶液中吸去某種成分或濾除不溶物及使用活性炭脫色時濾除細(xì)微的活性炭顆粒等，則可選用較粗矮的色譜柱。,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,

15、圖4-1 柱色譜裝置,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,（2）裝柱：裝柱前先將空色譜柱清洗干凈，干燥后，在色譜柱管底部鋪一層脫脂棉，再加一層厚約0.5cm的石英砂，然后選擇具體干法或濕法裝柱。常選用濕法裝柱，先往柱內(nèi)加入少量的洗脫劑，然后將氧化鋁與適量的洗脫劑混合均勻，不斷攪拌排除氣泡后，連續(xù)緩慢地倒入色譜柱內(nèi)，打開色譜柱下端活塞，低速放出洗脫劑，使氧化鋁慢慢沉降，注意繼續(xù)補(bǔ)充洗脫液保持流速，確保液面高于氧化鋁的表面，,操作步驟,色譜技術(shù),

16、一、氧化鋁色譜法,同時輕輕敲打柱壁，至氧化鋁沉降完全后，再使洗脫劑流動一段時間，算出柱內(nèi)所含洗脫劑的體積，以便掌握收集流份的時間及在更換洗脫劑時，新?lián)Q洗脫劑大致在何流份開始。保持洗脫液液面高出氧化鋁表面一段距離，以防柱床干凅。裝柱后，一般氧化鋁的高度為色譜柱高度的3/4,要求柱中氧化鋁充填均勻，柱體內(nèi)不能出現(xiàn)空氣泡、疏密不均或裂縫。,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,（3）上樣：對于易溶于洗脫劑的試樣，可用洗脫劑溶解試樣制成高濃度試

17、樣溶液，放出色譜柱內(nèi)洗脫液至液面略高于氧化鋁表面，然后沿柱壁輕輕注入試樣液，注意不要使氧化鋁表面受攪動，打開活塞，使試樣液緩緩滲入氧化鋁柱內(nèi)。對于難溶于洗脫劑的試樣，則先將試樣溶于適量甲醇、丙酮等低沸點(diǎn)的極性有機(jī)溶劑中，再用少量氧化鋁拌勻，,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上小心蒸干溶劑或水浴揮干溶劑，置干燥器中吸除殘留的溶劑和水分，然后將此吸著試樣的氧化鋁均勻地加在色譜柱中氧化鋁的上面。加樣后，要求試樣層能夠盡量窄且

18、平整。最后，在上樣后的氧化鋁柱上面蓋上一層約0.5cm厚的石英砂（或一層濾紙和玻璃珠層），使洗脫過程中柱體頂端保持平整。,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,（4）洗脫：洗脫劑的選用一般參照薄層色譜幫助確定的色譜條件，同時注意用梯度洗脫的方法，逐漸提高洗脫能力，使成分得到分離。洗脫的過程中應(yīng)注意保持液面的高度，勿使柱面洗脫劑流干；控制洗脫劑的流速，一般不宜太快，若色譜柱長40cm，可控制流速為3～4ml/分鐘，且保持勻速。洗脫液的收集

19、根據(jù)具體分離情況而定，如果試樣中各成分有色，分離過程中在柱上可觀察到，則分別收集各色帶；如果試樣中各成分無色，常采用等份收集。,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,根據(jù)所用氧化鋁的量及試樣分離的具體情況決定收集的每份洗脫液的體積。如所用氧化鋁的量為50g，則每份收集的洗脫液為50ml；若試樣各組分的結(jié)構(gòu)相似或洗脫劑極性很大，則每份洗脫液收集量小。 洗脫后所得的各份洗脫液分別進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s，經(jīng)薄層色譜檢測后，合并相同流分，回收溶

20、劑，獲得單體。若為混合物，可進(jìn)一步分離純化。,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,（5）氧化鋁的再生：柱色譜分離結(jié)束后，將柱內(nèi)氧化鋁傾出，用甲醇、稀醋酸、氫氧化鈉溶液及水洗滌，再經(jīng)高溫活化后可重復(fù)使用。 亦可采用薄層色譜的操作方法，具體操作參照薄層色譜法。,操作步驟,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,（1）氧化鋁適用于堿性或中性的親脂性成分的分離，如生物堿、甾體化合物、強(qiáng)心苷等，尤其是對生物堿的分離應(yīng)用最多。具有分離效果好，再生容

21、易，對雜質(zhì)的吸附能力及分離試樣的用量均優(yōu)于硅膠等優(yōu)點(diǎn)，但由于與某些酸性、酚性物質(zhì)及色素等可發(fā)生異構(gòu)化、氧化和消除反應(yīng)等次級反應(yīng)，故對醛、酮、酯、內(nèi)酯等類型化合物的分離不宜采用。,操作提示,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,（2）柱色譜中氧化鋁用前應(yīng)過篩處理，使粒度均勻，常以100目左右大小為宜。（3）柱色譜中氧化鋁的用量一般為樣品量的20~50倍，如果氧化鋁對樣品的吸附力較弱，則適當(dāng)增加用量至100~200倍。,操作提示,色譜技術(shù),一、氧化

22、鋁色譜法,【相關(guān)鏈接】,1．什么是活化？,在一定溫度下加熱除去吸附劑中的水分，使吸附劑吸附能力增強(qiáng)，活性增高的過程稱為活化。,2．什么是去活化？,在吸附劑中加入一定量的水分，使吸附劑吸附能力降低，活性減低的過程稱為去活化。,色譜技術(shù),一、氧化鋁色譜法,【課堂活動】,模擬實(shí)驗室氧化鋁柱色譜操作，取一色譜柱和適量氧化鋁，練習(xí)濕法裝柱，敘述操作步驟及操作過程中的注意事項。,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,是利用作為固定相的硅膠對混合物中各種成分吸附

23、能力的大小不同，使各成分得到相互分離的方法。,,硅膠是一種微呈酸性的多孔性物質(zhì)。常用SiO2·xH2O表示，為硅氧烷交鏈結(jié)構(gòu)：,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,其骨架表面具有很多硅醇基，使硅膠能與許多化合物形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用。游離硅醇基數(shù)目的多少決定了硅膠吸附作用的強(qiáng)弱。硅醇基也容易通過氫鍵與水結(jié)合，隨著含水量的增加，硅膠表面的游離硅醇基數(shù)目減少，硅膠吸附其他化合物的能力便隨之減弱。硅膠的吸附能力大小可根據(jù)含水量，用不同的活度級

24、別來表示（表4-1）。若含水量達(dá)17％以上，硅膠的吸附能力極弱，不能用作吸附劑，可作為支持劑用于分配色譜。若將含水硅膠在100～110℃溫度下加熱30分鐘，能除去大部分硅醇基吸附的水，使硅膠恢復(fù)吸附能力。,,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,硅膠色譜分離的操作基本上與氧化鋁相同。柱色譜中采用濕法裝柱，且最好一次傾入。一般情況下，樣品與硅膠的比例可為1︰30~60，若樣品較難分離，可選用1︰500~1000。硅膠的再生一般可用甲醇或乙醇洗滌，揮干

25、溶劑后活化即得；或用5～10倍體積的1％氫氧化鈉煮沸半小時，趁熱濾過，蒸餾水洗3次，再以3～6倍5％鹽酸煮沸半小時，蒸餾水洗至中性，活化處理即可使用。,操作步驟,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,硅膠亦可作為支持劑，吸著液體固定相后進(jìn)行分配色譜操作。分配柱色譜是將吸著固定相的支持劑裝入柱內(nèi)，用適量固定相溶解試樣后上樣，然后以固定相飽和后的移動相進(jìn)行洗脫，使試樣中各組分因分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。其裝置與吸附柱色譜相同，具體操作如下：,操作

26、步驟,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,（1）裝柱：將所選的固定相與支持劑以0.5︰1～1︰1的用量比置于一定容器內(nèi)，充分?jǐn)嚢杈鶆蚴怪С謩┪潭ㄏ?，多余的固定相則抽濾除去，然后倒入所用的移動相溶劑中，劇烈攪拌使移動相與固定相互相飽和平衡。裝柱時先將固定相飽和后的移動相溶劑加入色譜柱內(nèi)，再按濕法裝柱操作裝入吸著固定相的支持劑。,操作步驟,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,（2）加樣：在分配柱色譜中，一般支持劑的用量為試樣量的100～1000倍，其載樣量

27、較吸附柱色譜少。根據(jù)試樣溶解性能的不同，有三種加樣方法可供選擇。對于易溶于固定相者，將試樣溶于少量固定相后，加入少量支持劑拌勻，裝入柱頂；對于可溶于移動相者，則直接溶于移動相溶劑后加入柱頂；對于在兩相中均難溶者，則以使用的低沸點(diǎn)溶劑溶解后，加入干燥的支持劑拌勻，揮去溶劑，再用一定量的固定相拌勻，裝入柱頂。,操作步驟,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,（3）洗脫：洗脫所用的移動相均需先與固定相飽和。洗脫的方法與吸附柱色譜相同。,操作步驟,色譜技術(shù)

28、,二、硅膠色譜法,（1）硅膠的活化不宜在較高溫度下進(jìn)行，當(dāng)溫度升至500℃時，硅膠失去吸附能力，再用水處理亦不能恢復(fù)其吸附活性。,（2）有時硅膠色譜具有吸附色譜和分配色譜的雙重性質(zhì)，甚至還有極弱的離子交換作用。,操作提示,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,（3）硅膠作為一種酸性、親水性的吸附劑，適用于中性或酸性成分的分離（包括非極性化合物和極性較小的化合物），如揮發(fā)油、黃酮、蒽醌、強(qiáng)心苷、皂苷、有機(jī)酸及酚性化合物、氨基酸等。具有吸附容量高，機(jī)械

29、強(qiáng)度好，分離范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用最為廣泛，但對堿性成分的分離不宜采用。,（4）在分配色譜中，常用的支持劑有硅膠、硅藻土、纖維素粉和濾紙等。,操作提示,色譜技術(shù),二、硅膠色譜法,（5）以極性大的溶劑（如水或親水性溶劑）為固定相，極性小的溶劑為移動相的分配色譜稱為正相分配色譜，常用于分離極性較大的成分，如生物堿、糖類、苷類、有機(jī)酸等；而以極性小的溶劑（如氯仿、石油醚等親脂性有機(jī)溶劑）為固定相，移動相溶劑卻極性較大的分配色譜則稱為反相分配色譜，

30、常用于分離極性小的成分，如油脂、高級脂肪酸、游離甾體等。,操作提示,色譜技術(shù),（6）選擇適當(dāng)?shù)娜軇┫到y(tǒng)，可提高分離的效率。常用紙色譜摸索具體的分離條件，尋找合適的溶劑系統(tǒng)。,二、硅膠色譜法,操作提示,色譜技術(shù),三、活性炭色譜法,是利用作為固定相的活性炭對混合物中各種成分吸附能力的大小不同，使各成分得到相互分離的方法。,,活性炭是一種非極性吸附劑，具有較強(qiáng)的吸附能力， 其吸附能力受溶劑的影響，在水溶液中的吸附力最強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中吸附力較弱

31、。在一定條件下，對不同物質(zhì)的吸附力也有差別。,色譜技術(shù),一般對極性基團(tuán)多的化合物的吸附力大于極性基團(tuán)少的化合物；對芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物；對分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物。利用此性質(zhì)，可使單糖與多糖分離，氨基酸與多肽分離，水溶性芳香族化合物與脂肪族化合物分離等等。實(shí)際應(yīng)用時，應(yīng)根據(jù)所分離物質(zhì)的特性，選擇吸附力適宜的活性炭。,,三、活性炭色譜法,色譜技術(shù),色譜用活性炭常分為三類：粉末狀活性炭、顆粒狀活性炭和錦綸

32、活性炭。粉末狀活性炭吸附力最強(qiáng)，但在色譜過程中流速極慢，需加壓或減壓操作；顆粒狀活性炭在色譜過程中流速易于控制，故色譜分離最常選用；錦綸活性炭吸附力最弱，適于于分離用前兩種活性炭不易洗脫的化合物。,,三、活性炭色譜法,色譜技術(shù),（1）裝柱：先將少量蒸餾水加入色譜柱內(nèi)，用玻璃纖維塞住底部，并除去氣泡。然后用蒸餾水浸泡活性炭1小時，不斷攪拌去除氣泡，將處理后的活性炭倒入色譜柱中，使其自然沉降，裝至所需體積后備用。,,操作步驟,（2）上樣：將

33、試樣溶于水，配成25~50%的樣品溶液后上樣，一般每100毫升活性炭可上樣5~10克。試樣的上柱量和樣品濃度可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)增加或減少。,三、活性炭色譜法,色譜技術(shù),（3）洗脫：最常采用水，由稀至濃的乙醇水溶液梯度洗脫。最后可用適當(dāng)有機(jī)溶劑或3.5%氨水將未洗脫部分洗脫下來。收集洗脫液，合并相似成分，濃縮后結(jié)晶。,,操作步驟,三、活性炭色譜法,色譜技術(shù),（1）此法適用于分離水溶性成分如氨基酸、糖類及某些苷類等，具有試樣上柱量大，分離效

34、果好等特點(diǎn)，且活性炭價廉易得，適用于大量制備性分離。,,（2）目前尚無測定活性炭吸附力級別的理想方法，其吸附力不易控制，故活性炭的具體應(yīng)用受到一定的限制。,三、活性炭色譜法,操作提示,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,聚酰胺（商品名又稱為綿綸、尼龍）是由酰胺聚合而成的一類高分子化合物。色譜分離常用聚己內(nèi)酰胺（綿綸6）和聚己二酰己二胺（綿綸66），其中聚己內(nèi)酰胺可用結(jié)構(gòu)式表示為：,,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,聚酰

35、胺色譜法是利用作為固定相的聚酰胺分子內(nèi)存在的許多酰胺基，能與酚類的羥基、酸類的羧基及醌類的醌基形成氫鍵而產(chǎn)生吸附（見圖4-2），使混合物中各成分得到相互分離的方法。,,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,聚酰胺與各種化合物形成氫鍵的能力不同，決定了聚酰胺對其吸附力的強(qiáng)弱。形成氫鍵的能力首先與溶劑的種類有關(guān)，在水中最強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中較弱，在堿性溶劑中最弱。在聚酰胺柱色譜中常用作洗脫劑的各種溶劑洗脫能力順序如下：,,色

36、譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,聚酰胺與各種化合物形成氫鍵的能力不同，決定了聚酰胺對其吸附力的強(qiáng)弱。形成氫鍵的能力首先與溶劑的種類有關(guān)，在水中最強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中較弱，在堿性溶劑中最弱。在聚酰胺柱色譜中常用作洗脫劑的各種溶劑洗脫能力順序如下：,,水＜甲醇或乙醇＜丙酮＜稀氫氧化鈉液或稀氨溶液＜甲酰胺或二甲基甲酰胺＜尿素水溶液。,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,其次，與在含水溶劑中，化合物分子結(jié)構(gòu)對氫鍵締合的影響有關(guān)，大致如下：,,（1）化合物分子中

37、能形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，被聚酰胺吸附越強(qiáng)。如：,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,,（2）形成氫鍵的基團(tuán)所處位置不同，被吸附的強(qiáng)度也不同。如：,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,,（3）分子中芳香核、共軛雙鍵越多，被吸附強(qiáng)度越大。如：,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,,（4）化合物若能形成分子內(nèi)氫鍵，則被吸附強(qiáng)度減小。如：,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,（1）裝柱：選用含水溶劑系統(tǒng)進(jìn)行分離，通常以水裝柱（操作同活性炭色譜）；選用非極性溶劑系統(tǒng)進(jìn)行分離，

38、則常以溶劑系統(tǒng)中極性低的組份裝柱。,,操作步驟,（2）上樣：將試樣溶于洗脫劑，配成25~30%的樣品溶液后上樣，一般每100毫升聚酰胺可上樣1.5~2.5克。試樣的上柱量和樣品濃度可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)增加或減少。若樣品不溶于洗脫劑，可用甲醇、乙醇、丙酮、乙醚等易揮發(fā)溶劑溶解，拌入干粉中，拌勻后將溶劑揮去，以洗脫劑浸泡裝入柱中。,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,（3）洗脫：最常采用水，由稀至濃的乙醇水溶液梯度洗脫；亦可用氯仿，氯仿-甲醇（19︰

39、1，10︰1，5︰1，2︰1，1︰1），甲醇依次洗脫。最后, 未洗脫部分可用或3.5%氨水洗脫下來。收集洗脫液，合并相似成分，濃縮后結(jié)晶。,,操作步驟,（4）聚酰胺粉的回收：用5%氫氧化鈉洗滌用過的聚酰胺粉至氫氧化鈉顏色極淡即可。若因吸附了鞣質(zhì)而難以洗脫，可在色譜柱中加入5%氫氧化鈉浸泡，每天更換一次5%氫氧化鈉，一周后可將鞣質(zhì)基本清洗除去，接著用蒸餾水洗至pH 8~9，再用2倍量10%醋酸沖洗，最后蒸餾水洗至中性可重復(fù)使用。,色譜技術(shù)

40、,四、聚酰胺色譜法,（1）如果選用氯仿裝柱，為避免聚酰胺浮起，上樣時需放出柱底端的氯仿層并立即上樣，上樣后頂端以棉花塞緊。,,（2）聚酰胺色譜法常選用含水溶劑系統(tǒng)和非極性溶劑系統(tǒng)兩類溶劑系統(tǒng)進(jìn)行分離。含水溶劑系統(tǒng)適用于各種苷類、糖類、有機(jī)酸等水溶性成分的分離；非極性溶劑系統(tǒng)適用于萜類、甾體、黃酮體苷元、酚類、醌類等極性不太高的化合物的分離。,操作提示,色譜技術(shù),四、聚酰胺色譜法,（3）此法常用于分離黃酮類、酚類、醌類等化合物，分離效果好

41、。對鞣質(zhì)的吸附因幾不可逆，則常用于粗提物中鞣質(zhì)的除去。此外，對生物堿、萜類、甾體、糖類、氨基酸等成分的分離也有廣泛的應(yīng)用。因聚酰胺吸附容量大，故特別適合于化合物的制備性分離。,,操作提示,色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,是利用離子交換樹脂上的功能基能在水溶液中與溶液的其他離子進(jìn)行可逆性交換的性質(zhì)，以離子交換樹脂作為固定相，使混合成分中離子型與非離子型化合物、或具有不同解離度的離子化合物得到分離的一種色譜方法。,,色譜技術(shù),五、離子交換色譜

42、法,離子交換樹脂是一類含有解離性功能基團(tuán)的特殊高分子化合物，一般呈球狀或無定形粒狀。根據(jù)其解離性功能基團(tuán)的不同，可分為陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂兩類；在水溶液中，前者能通過-SO3H、-COOH或酚羥基中解離的H＋與溶液中的陽離子進(jìn)行可逆性交換，后者能通過伯、仲、叔、季銨基中解離的OHˉ與溶液中的陰離子進(jìn)行可逆性交換。而其本身卻不溶于水、酸、堿和有機(jī)溶劑。若以R代表離子交換樹脂的母體，則其色譜分離的基本原理可表示為：,,色譜技術(shù),五

43、、離子交換色譜法,,陽離子交換樹脂： RSO3ˉH＋+ Na＋Clˉ RSO3ˉNa＋+ H＋Clˉ 陰離子交換樹脂： RN＋OHˉ+ Na＋Clˉ RN＋Clˉ+ Na＋OHˉ 具體選擇離子交換樹脂時，應(yīng)綜合考慮被分離物質(zhì)所帶電荷種類及其解離能力強(qiáng)弱、分子的大小與數(shù)量。,色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,（1）樹脂的預(yù)處理：離子交換樹脂在使用前，均需經(jīng)過預(yù)處理，將所含的可溶性小分子有機(jī)物

44、和鐵、鈣等雜質(zhì)除去。根據(jù)分離試樣中離子的性質(zhì)，按酸→堿→酸的步驟用適當(dāng)試劑處理陽離子交換樹脂，按堿→酸→堿的步驟用適當(dāng)試劑處理陰離子交換樹脂，使樹脂達(dá)到分離的要求。,,操作步驟,色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,（2）裝柱：裝柱前先將樹脂用蒸餾水充分溶脹，趕盡氣泡，清洗至上層液透明，然后將溶脹后的樹脂加少量水?dāng)嚢?，連續(xù)倒入色譜柱（色譜柱要求耐酸、堿的腐蝕，柱長約為直徑的10～20倍）中，打開活塞，緩緩放出水液，使樹脂均勻下沉。,,操作步驟,

45、色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,（3）上樣：試樣的用量由所選擇的樹脂的交換容量來決定。將試樣溶于適當(dāng)溶液中配成濃度較稀的試樣液（對離子交換劑的選擇性大，利于分離），按柱色譜的上樣方法將試樣液加入柱內(nèi)，打開活塞，當(dāng)試樣溶液流經(jīng)離子交換樹脂時，溶液中的離子與樹脂上的解離性基團(tuán)進(jìn)行交換，被吸附于樹脂上，至試樣溶液流出后，用蒸餾水沖洗樹脂柱，將殘液洗凈。,,操作步驟,色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,（4）洗脫：常用的洗脫劑有酸、堿、鹽的水溶液或各種

46、不同離子濃度的緩沖液等。對于不同類型的樹脂，宜適當(dāng)控制所選洗脫劑的pH值，并選擇一種能解離出比被吸著的成分更活潑的離子或基團(tuán)的洗脫劑，將吸著成分通過洗脫劑的洗脫而被替換下來。洗脫速度通常為1～2ml/min。洗脫液的收集與柱色譜相同。,,操作步驟,（5）再生：由于離子交換樹脂上的交換是可逆的，故對使用過的樹脂可用與預(yù)處理相同的方法使其再生而恢復(fù)原狀，再生后的樹脂能反復(fù)使用。,色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,（1）離子交換樹脂的選擇：綜合考

47、慮被分離物質(zhì)所帶電荷種類及其解離能力強(qiáng)弱、分子的大小與數(shù)量具體選擇。若被分離物質(zhì)帶正電荷（如生物堿鹽或無機(jī)陽離子），選擇陽離子交換樹脂；若帶負(fù)電荷（如有機(jī)酸或無機(jī)陰離子），則選擇陰離子交換樹脂。若被分離物質(zhì)的解離能力強(qiáng)，酸堿性強(qiáng)，易與離子交換樹脂進(jìn)行可逆性交換，易被吸附，則選用弱酸型或弱堿型離子交換樹脂，以免洗脫和再生困難；反之則選擇強(qiáng)酸型或強(qiáng)堿型離子交換樹脂。,操作提示,若被分離物質(zhì)的分子量大，選擇低交聯(lián)度的樹脂；若分子量小，則選擇交

48、聯(lián)度大的樹脂，以便使離子易于擴(kuò)散與交換。,五、離子交換色譜法,（2）樹脂的交換容量及顆粒的大?。和ǔ＞x用交換容量大的樹脂。若用于一般的色譜分離，樹脂粒度為200～400目之間；若用于提取離子性成分，則樹脂粒度應(yīng)在100目左右；若用于制備去離子水，則粒度在16～60目之間。,操作提示,色譜技術(shù),（3）此法常用于分離具有解離能力的酸性、堿性及兩性化合物，如生物堿、氨基酸、有機(jī)酸、酚類、肽類等天然藥物化學(xué)成分。,五、離子交換色譜法,操作提示

49、,色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,ISC2000型不需化學(xué)試劑的離子色譜儀（RFIC),色譜技術(shù),五、離子交換色譜法,790-1型離子色譜儀離子色譜儀、英藍(lán)技術(shù) — 通用系列(常規(guī)分析及教學(xué)),色譜技術(shù),是一種利用大孔吸附樹脂具有的吸附性能及分子篩作用，使分子量的大小及吸附力的強(qiáng)弱不同的混合物中各成分獲得分離的方法。,六、大孔吸附樹脂法,大孔吸附樹脂是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)與離子交換樹脂類似卻不含交換基團(tuán)，具有大孔結(jié)構(gòu)的有機(jī)高聚物吸附劑。形態(tài)多為白

50、色球形顆粒，粒度通常為20～60目，根據(jù)聚合材料的不同，可分為非極性、中極性和極性三大類型。,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,大孔吸附樹脂的理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑，對有機(jī)物有較好的選擇性，不受無機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響。一方面，大孔吸附樹脂通過范德華引力或形成氫鍵等分子間力吸附有機(jī)化合物；另一方面，其本身的多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)決定了具有篩選性分離的特點(diǎn)。,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,（1）大孔吸附樹脂的預(yù)處理：常用的

51、樹脂有以下幾種型號：D-101、DA-201、GDX-105、CAD-40、XAD-4、SIP系列及D-G型等。經(jīng)過預(yù)處理，可除去新購樹脂內(nèi)部殘余的致孔劑、引發(fā)劑、分散劑和一些未聚合的單體等。,操作步驟,（2）裝柱和上樣：選用合適的大孔吸附樹脂，濕法裝柱。裝柱后，選擇適宜的溶劑配制一定pH值的試樣溶液，按濕法上樣操作上樣。注意所配試樣溶液的濃度不宜過高，否則會使樹脂的吸附量減少。,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,（3）洗脫：常用的洗脫劑有

52、水、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯等。流速一般以控制在0.5～5ml/min為宜。根據(jù)實(shí)際情況，也可采用不同極性的洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫。洗脫液經(jīng)檢測后，合并相同組分。,操作步驟,（4）樹脂柱的清洗：樹脂使用后，其表面或內(nèi)部會有許多非吸附性成分或吸附性雜質(zhì)殘留，必須經(jīng)清洗以去除。,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,（5）樹脂的再生：使用過的樹脂可經(jīng)處理后再生。若選用了非水溶性的有機(jī)溶劑作為洗脫劑，用甲醇反復(fù)沖洗樹脂柱即可；若選用了水溶性的洗脫劑，則

53、用蒸餾水反復(fù)沖洗干凈即可；若樹脂經(jīng)多次使用后，顏色加深，吸附能力下降，則可用3％鹽酸液或3％氫氧化鈉液依次浸泡12小時，再用蒸餾水洗至中性即可。樹脂不用時，應(yīng)浸泡于甲醇（或乙醇）中以濕態(tài)貯存，臨用前用蒸餾水洗盡醇即可。,操作步驟,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,（1）一般極性樹脂用于吸附極性化合物，非極性樹脂用于吸附非極性化合物。極性較大的成分適宜在中極性的樹脂上進(jìn)行分離，而極性小的成分則適宜在非極性樹脂上進(jìn)行分離；化合物分子體積較大者，

54、宜選用較大孔徑的樹脂。,（2）濕法裝柱，樹脂裝填高度小于3米。,（3）通?？稍谏蠘尤芤褐屑尤脒m量無機(jī)鹽（如氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨等），以增大樹脂的吸附量。,操作提示,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,（4）對于非極性的樹脂，洗脫劑的極性越小，其洗脫能力越強(qiáng)；對于中極性和極性樹脂，則宜選用極性較大的洗脫劑。,（5）改變洗脫劑的pH值，可使某些被樹脂吸附的成分形成較強(qiáng)的離子化合物，易被洗脫，提高洗脫效率。,操作提示,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法

55、,（6）大孔吸附樹脂由于具有選擇性好、能快速吸附且吸附容量大、機(jī)械強(qiáng)度高、再生容易等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中（如廢水的處理），也用于維生素、抗生素的分離提純，并使水溶性天然藥物化學(xué)成分的提純得以大大簡化，近年來多用于皂苷及其他苷類化合物的分離，獲得較好的分離效果。,操作提示,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,大孔吸附樹脂色譜法在天然藥物化學(xué)成分分離的實(shí)際應(yīng)用。,【相關(guān)鏈接】,據(jù)報道，向大雄等進(jìn)行大孔吸附樹脂分離純化葛根總黃酮的研究，比較

56、了三種大孔吸附樹脂，發(fā)現(xiàn)AB型樹脂的綜合性能最好[1]。何琦等進(jìn)行D140大孔吸附樹脂銀杏黃酮提取純化性能研究，經(jīng)12個周期反復(fù)使用，銀杏黃酮產(chǎn)物收率3.54%，產(chǎn)物黃酮含量24.54%，確定D140大孔吸附樹脂是一種綜合性能較佳的銀杏黃酮專用吸附樹脂[2]。皮文霞等進(jìn)行了大孔吸附樹脂與活性炭富集山茱萸總苷的實(shí)驗研究，發(fā)現(xiàn)大孔吸附樹脂優(yōu)于活性炭[3]。大孔吸附樹脂分離技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景。,色譜技術(shù),六、大孔吸附樹脂法,樹脂柱吸附分離

57、示意圖,色譜技術(shù),七、凝膠色譜法,凝膠色譜法是以凝膠作為固定相，選擇適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行洗脫，使混合物中分子量大小不同的化合物得到分離的方法。,凝膠是具有多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。選擇合適的凝膠，是凝膠色譜法分離的關(guān)鍵。商品凝膠的種類很多，常用的有：,色譜技術(shù),1.葡聚糖凝膠,又稱為交聯(lián)葡聚糖，是由葡聚糖和甘油通過醚橋（-OCH2CHOHCH2O-）相交鏈而成的多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，其部分結(jié)構(gòu)如圖4-3所示。具有親水性，但不溶于水、稀酸、堿

58、和鹽溶液，能在水中溶脹成膠粒，在pH 3～10內(nèi)穩(wěn)定，適用于分離水溶性成分如蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、糖及苷類等，應(yīng)用最為廣泛。,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),圖4-3 交聯(lián)葡聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu),七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),葡聚糖凝膠顆粒的網(wǎng)孔大小取決于制備時所添加交聯(lián)劑的比例。若交聯(lián)劑量多，則交聯(lián)度大，網(wǎng)孔緊密，孔徑小，吸水少；反之交聯(lián)劑量少，則交聯(lián)度小，網(wǎng)孔稀疏，孔徑大，吸水多。商品型號按交聯(lián)度大小分類，并以每克干凝膠吸水量10倍的數(shù)值來表示，如

59、凝膠G-25型表示吸水量為2.5ml/g的葡聚糖凝膠。不同規(guī)格的葡聚糖凝膠適合用于分離不同分子量的化合物。,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),2.葡聚糖凝膠LH-20,葡聚糖凝膠LH-20分子中引入了親脂性基團(tuán)，除了能在水中溶脹外，也能在許多有機(jī)溶劑如醇、甲酰胺、丙酮、氯仿等溶劑中溶脹（在醋酸乙酯、甲苯中溶脹不多），并在pH＞2的無氧化劑溶液中呈穩(wěn)定狀態(tài)。增大了應(yīng)用范圍，不僅可用于分離水溶性化合物，還可用于分離一些難溶于水或具一定程度親脂性的化

60、合物（如黃酮、蒽醌、香豆素等）。,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),此外，還有聚丙烯酰胺凝膠（在pH 2～10內(nèi)穩(wěn)定，使用情況與葡聚糖凝膠相似），瓊脂糖凝膠（適合于分離分子量在百萬以上的特大分子化合物），以及結(jié)合了不同離子交換基團(tuán)的葡聚糖凝膠衍生物等。,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),受凝膠顆粒中網(wǎng)孔半徑的限制，被分離試樣中比網(wǎng)孔小的化合物可自由進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部；而比網(wǎng)孔大的化合物不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部被排阻，只能通過凝膠顆粒外部的間隙。隨著移動相的流

61、動，被分離試樣中各成分的移動速率不同，大分子化合物阻力較小，流速較快，先被洗脫；而小分子化合物阻力較大，滯留在凝膠顆粒內(nèi)部時間長，流速較慢，則后被洗脫，從而使試樣中大小分子化合物獲得分離。其機(jī)制見圖4-4所示。,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),（1）裝柱：裝柱前，先要選擇合適的凝膠種類、規(guī)格及粒度。一般情況下，若試樣中各成分分子量懸殊較大，可使用100～150目粒度較粗的顆粒；若試樣為肽類和低分子量的物質(zhì)進(jìn)行脫鹽處理

62、，可采用G-10、G-15、G-25等凝膠，以G-25為好；若試樣中各成分分子量較接近，可選用200目左右的粒度，且需適當(dāng)處理以除去凝膠中的單體、粉末及碎片。采用濕法裝柱。,操作步驟,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),（2）上樣：配制濃度適宜的試樣溶液（體積要?。玫喂苎刂诰従徸⑷胫?，加完后將活塞打開，使試樣完全滲入柱內(nèi)，再關(guān)閉活塞。,操作步驟,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),（3）洗脫：常選用水、酸、堿、鹽和緩沖溶液等作為洗脫劑。對于固定相為

63、葡聚糖凝膠LH-20的凝膠色譜，洗脫劑也可選用各種有機(jī)溶劑。適當(dāng)控制洗脫的速度，若固定相顆粒細(xì)或交聯(lián)度大，則流速可稍快。洗脫液分部收集，每一流份經(jīng)檢測后，合并相同組分。,操作步驟,（4）再生：當(dāng)凝膠經(jīng)多次使用后，通常在50℃左右用含2％氫氧化鈉和4％氯化鈉的混合液浸泡，再用水洗凈，使其再生。,七、凝膠色譜法,色譜技術(shù),（1）上樣前，裝好的色譜床至少要用3倍于色譜床體積的洗脫液平衡。,（2）試樣上柱前要濾過或離心。,（3）用凝膠色譜收集得

64、到的水溶液組份，若為對熱不穩(wěn)定物質(zhì)，需進(jìn)行冷凍干燥。,七、凝膠色譜法,操作提示,色譜技術(shù),（4）此法具有設(shè)備簡單、易于操作和所得結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)，現(xiàn)已發(fā)展成為天然藥物化學(xué)和生物化學(xué)研究中一種常規(guī)的分離方法。主要用于天然藥物化學(xué)成分中大小分子化合物（如蛋白質(zhì)、酶、多肽、氨基酸、多糖、甾體、苷類及某些黃酮、生物堿等）的分離。,七、凝膠色譜法,操作提示,色譜技術(shù),七、凝膠色譜法,羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20色譜技術(shù)在天然藥物化學(xué)

65、成分分離的實(shí)際應(yīng)用。,【相關(guān)鏈接】,實(shí)驗研究發(fā)現(xiàn)，許多天然藥物化學(xué)成分如黃酮類、生物堿、有機(jī)酸和香豆素等可用Sephadex LH-20提取分離。據(jù)報道，Hans Henke博士用Sephadex LH-20成功分離獲得槲皮素、山奈酚和橙皮素[4]。Kamel H Shakker等采用Sephadex LH-20，以甲醇－水（17∶3）為流動相從Fagonia indica中分離得到三萜皂苷[5]。J.Labrana等采用Sephade

66、x LH-20從Narcissus bujei 中成功分離石蒜堿和高石蒜堿[6]。,色譜技術(shù),八、薄層色譜法,薄層色譜法（thin layer chromatography，TLC）是一種將適宜的固定相均勻涂布于平面載板上成一薄層，欲分離的試樣于薄層板上點(diǎn)樣，隨著展開劑的移行，混合物中各成分根據(jù)吸附性能或分配系數(shù)的不同而獲得分離的方法。,色譜技術(shù),常用于薄層色譜的固定相有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等吸附劑和硅藻土、纖維素等支持劑。因硅膠、氧化

67、鋁的吸附性能好，適用于多種化合物的分離，故又最為常用。,八、薄層色譜法,色譜技術(shù),常見的商品規(guī)格有：硅膠H（不含粘合劑），硅膠G（含有15％～35％石膏作為粘合劑），硅膠HF254（含在254nm波長紫外光下顯熒光的無機(jī)熒光劑），硅膠HF254＋365（除含無機(jī)熒光劑外，還含有一種在365nm波長紫外光下顯熒光的有機(jī)熒光劑，但此類熒光物質(zhì)能被一些溶劑部分溶解），硅膠60HR（純產(chǎn)品，供定量測定或光譜研究用），氧化鋁G，堿性氧化鋁H，堿性

68、氧化鋁HF254等。,八、薄層色譜法,色譜技術(shù),根據(jù)具體情況的需要，可在吸附劑中加入稀酸或稀堿，或加入緩沖液，以改變吸附性能而達(dá)到分離的目的；還可制成特殊薄層，以提高分離效率，如分離糖類、醇類化合物或分離不飽和程度不同的化合物時，用硅膠︰氧化鋁（1︰1）為吸附劑或加入10％硝酸銀溶液制板。若硅膠、氧化鋁均不適合時，可選用其他的吸附劑或改用分配色譜、離子交換色譜等。如聚酰胺薄膜，可用于分離極性和非極性物質(zhì)，已廣泛應(yīng)用于天然藥物化學(xué)成分的分