益腎達(dá)絡(luò)飲對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經(jīng)功能評(píng)分和病理特征的影響_朱文浩

1、濕”，可見附子之用廣矣。然附子有毒，應(yīng)用時(shí)不可不慎。陶弘景《本草經(jīng)集注》:“俗方每用附子須甘草、人參、生姜相互配合者，正制其毒也”，如仲景四逆湯姜、甘草同用可以師法。近代應(yīng)用要么配姜、甘草，要么先煎以減其毒性。筆者常將其與諸藥和等量生姜一起浸泡1h，并一起煎1h，更為安全。“附子之功，在于能溫五臟之陽”，“重視陽氣，肇始于《內(nèi)經(jīng)》‘陽氣者若天與日，失其所則折壽而不彰’”［7］，火神派的主要學(xué)術(shù)思想在于重視陽氣，崇尚扶陽，扶陽之關(guān)鍵在于善

2、用巧用附子、生姜、干姜、桂收稿日期:2013－01－04基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金資助課題(81072770，81202657)作者簡介:朱文浩(1981－)，男，山東臨沭人，2011級(jí)博士研究生，研究方向:神經(jīng)系統(tǒng)病的中醫(yī)藥防治研究。通訊作者:高穎，女，北京人，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，研究方向:神經(jīng)系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥防治研究。枝、肉桂等溫陽藥，尤其是附子?；鹕衽傻淖趲熰崥J安說:“認(rèn)證只分陰陽”，“功夫全在陰陽上打算”。李可先生說:“暴

3、病多亡陽，久病多傷陽”，“陽氣易傷難復(fù)，故陽常不足”［8］。臨床上沉疴痼疾多為陽損不復(fù)，所以重用附子可起到良好的療效。參考文獻(xiàn)［1］張成新附子應(yīng)用體會(huì)［J］中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(11):2586［2］陸再英，鐘南山內(nèi)科學(xué)［M］7版北京:人民衛(wèi)生出版社出版，2009:648－651［3］吳江神經(jīng)病學(xué)［M］北京:人民衛(wèi)生出版社出版，2005:158－170［4］天津科學(xué)技術(shù)出版社袖珍中醫(yī)四部經(jīng)典［M］天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社，19

4、92:643，661［5］侯熙德神經(jīng)病學(xué)［M］3版北京:人民衛(wèi)生出版社出版，1998:189［6］張成新附子應(yīng)用體會(huì)［J］中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(11):2586［7］仝小林重劑起沉疴［M］北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:231［8］張存悌火神派溫陽九法［M］北京:人民軍醫(yī)出版社，2010:6實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)研究益腎達(dá)絡(luò)飲對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經(jīng)功能評(píng)分和病理特征的影響朱文浩1，高穎1，關(guān)東升2，吳彥青3(1.北京中醫(yī)藥大

5、學(xué)東直門醫(yī)院，北京1007002.河南中醫(yī)學(xué)院，河南鄭州4500033.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193)摘要:目的:研究益腎達(dá)絡(luò)飲對(duì)復(fù)發(fā)－緩解型EAE小鼠發(fā)病率、發(fā)病時(shí)間、復(fù)發(fā)率、神經(jīng)功能評(píng)分及病理特征的影響。方法:用HE染色和Luxolfastblue染色觀察EAE小鼠的病理特征。結(jié)果:中藥組EAE小鼠的復(fù)發(fā)率(1427%)低于模型組(625%)免疫后第21天神經(jīng)功能評(píng)分，中藥組(186040)低于模型組(313069)免疫后第61

6、天神經(jīng)功能評(píng)分，中藥組(086055)低于模型組(275073)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論:益腎達(dá)絡(luò)飲能降低EAE小鼠的復(fù)發(fā)率、神經(jīng)功能評(píng)分，減輕炎性細(xì)胞浸潤和髓鞘脫失，但其作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞:益腎達(dá)絡(luò)飲實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎神經(jīng)功能評(píng)分病理特征中圖分類號(hào):R37331文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1000－1719(2013)07－1467－03EffectofYishenDaluoDecoctiononSceo

7、fNeuralFunctionPathologicalFeatureinMicewithExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitisZHUWenhao1，GAOYing1，GUANDongsheng2，WUYanqing3(1.DongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100700，China2.Hen

8、anCollegeofTCM，Zhengzhou450003，Henan，China3.TianjinUniversityofTCM，Tianjin300193，China)Abstract:Objective:ToinvestigatetheeffectofYishenDaluoDecoctionontheincidence，onset，relapserate，sceofneuralfunctionpathologicalfeatur

9、einthemicewithrelapsing－remittingexperimentalautoimmuneencephalomyelitisMethods:Hematoxylin－eosinstainingLuxolfastbluestainingwereusedtoobservethepathologicalfeatureinthemicewithexperimentalautoimmuneencephalomyelitisRes

10、ults:Therelapserateofthetreatedgroup(1427%)waslessthanthemodelgroups(62.5%)thesceofneuralfunctionofthetreatedgroup(186040)waslessthanthemodelgroups(313069)attheday21afterimmunizationthesceofneuralfunctionofthetreatedgrou

11、p(086055)waslessthanthemodelgroups(2.75073)attheday61afterimmunization(P＜0.05)Conclusion:AftertreatmentwithYishenDaluoDecoction，therelapseratethesceofneuralfunctionofthemicewithexperimentalautoimmuneencephalomyelitisarer

12、educed，theinfiltrationofinflammatycellsthelossofmyelinarealleviated，buttheeffectivemechanismofYishenDaluoDecoctionneedstobefurtherexpledKeywds:YishenDaluoDecoctionexperimentalautoimmuneencephalomyelitissceofneuralfunctio

13、npathologicalfeature7641遼寧中醫(yī)雜志2013年第40卷第7期疫后第11～13天發(fā)病，平均發(fā)病時(shí)間為免疫后(11.830.31)天，發(fā)病率為60.00%(610)，其中2只復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為33.33%(26)。模型組、中藥組、激素組的發(fā)病率、平均發(fā)病天數(shù)、平均最高評(píng)分及復(fù)發(fā)率之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(見表2)。表2模型組、中藥組和激素組免疫小鼠發(fā)病情況組別發(fā)病率(%)平均發(fā)病時(shí)間(d)復(fù)發(fā)率(%)模型

14、組80.00(810)12.380.1862.50(58)中藥組77.78(79)12.710.2914.27(17)激素組60.00(610)11.830.3133.33(26)注:各組之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。3.2小鼠體重和神經(jīng)功能評(píng)分免疫前各組小鼠體重比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，免疫后各組小鼠每天體重變化見插頁圖1免疫后各組小鼠每天神經(jīng)功能評(píng)分變化情況見插頁圖2。模型組、中藥組和激素組平均最高神經(jīng)功

15、能評(píng)分均出現(xiàn)在免疫后第14天，各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)免疫后第21天，激素組和模型組神經(jīng)功能評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)免疫后第61天，中藥組和模型組神經(jīng)功能評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(見表3)。表3免疫后小鼠神經(jīng)功能評(píng)分比較免疫后天數(shù)第14天第21天第61天模型組6.380.683.130.692.750.73中藥組5.861.161.860.400.860.55激素組5.830.981.

16、330.211.670.92注:與模型組比較，P＜0.05。3.3病理學(xué)改變HE染色結(jié)果:正常組小鼠腦和脊髓組織著色均勻，結(jié)構(gòu)完整有序，神經(jīng)細(xì)胞呈橢圓形或圓形，胞質(zhì)胞核分明，核膜完整，核仁清晰，細(xì)胞核呈藍(lán)紫色，胞漿和間質(zhì)呈紅色。神經(jīng)纖維組織致密，灰、白質(zhì)界限清晰可辨，白質(zhì)細(xì)胞成分較少，灰質(zhì)細(xì)胞成分比較多，分布均勻，胞漿尼氏體清晰可辨(見插頁圖3)。模型組可見多部位局限性炎性浸潤病灶，炎性病灶多以小血管為中心，向周圍擴(kuò)展，形成典型的“血管

17、套”改變，炎細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞，也可見單核吞噬細(xì)胞(見插頁圖4)。中藥組和激素組EAE小鼠腦和脊髓炎性浸潤病灶明顯減少，病灶程度明顯減輕(見插頁圖5～圖6)。Luxolfastblue染色結(jié)果:正常組小鼠腦和脊髓組織中髓鞘致密，排列整齊有序，神經(jīng)細(xì)胞分布較多(見插頁圖7)。模型組出現(xiàn)多部位髓鞘脫失，以侵犯白質(zhì)為主，灰質(zhì)損害不如白質(zhì)明顯(見插頁圖8)。中藥組和激素組EAE小鼠多部位脫髓鞘程度明顯減輕，髓鞘脫失部位明顯減少(見插頁圖9～10

18、)。4討論MS是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)炎性脫髓鞘為主要病理特點(diǎn)，遺傳易感因素和環(huán)境因素共同作用引起的自身免疫性疾病［2］，也是常見的影響青壯年的慢性、非創(chuàng)傷性、致殘性神經(jīng)系統(tǒng)疾病［3］。根據(jù)其臨床病程，可分為復(fù)發(fā)緩解型(relapsing－remitting，RR)、原發(fā)進(jìn)展型(primary－progressive，PP)、繼發(fā)進(jìn)展型(secondary－progressive，SP)和進(jìn)展復(fù)發(fā)型(progressive－relaps

19、ing，PR)［4］。國外資料顯示，RRMS占85%～90%［5－6］，10年后70%～80%的RRMS可發(fā)展為SPMS［8］，引起持續(xù)而嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺損癥狀。據(jù)報(bào)道，我國北方MS患者中RRMS占63.6%，SPMS占25%，PPMS占8.3%，PRMS占3%［7］。因此如何防治RRMS是防治MS的重點(diǎn)，但國內(nèi)尚無防止MS復(fù)發(fā)的有效藥物。益腎達(dá)絡(luò)飲是針對(duì)MS的病機(jī)和證候特點(diǎn)擬定的治療MS的有效方劑，臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)它能改善MS患者的臨床癥

20、狀，降低復(fù)發(fā)率，延長復(fù)發(fā)時(shí)間。用PLP139－151免疫SJL小鼠建立的EAE模型是研究RRMS的經(jīng)典動(dòng)物模型，它在臨床病程特點(diǎn)和病理改變上與MS非常相似。因此，應(yīng)用此模型進(jìn)行MS的實(shí)驗(yàn)研究能更好的反應(yīng)MS的情況。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組、中藥組、激素組小鼠的發(fā)病率、發(fā)病時(shí)間、平均最高評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，各組之間的比較具有可比性。雖然各組復(fù)發(fā)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但中藥組的復(fù)發(fā)率(14.27%)明

21、顯低于模型組(62.5%)，說明益腎達(dá)絡(luò)飲有降低EAE復(fù)發(fā)率的趨勢(shì)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義可能與樣本量小有關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)，免疫后第21天的神經(jīng)功能評(píng)分，激素組(1.330.21)低于模型組(3.130.69)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明潑尼松能改善急性期EAE小鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀，其機(jī)制可能與其抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)［2］中藥組(1.860.40)與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但有改善EAE小鼠神經(jīng)功能缺損癥狀

22、的趨勢(shì)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義可能與樣本量小有關(guān)。免疫后第61天的神經(jīng)功能評(píng)分，中藥組(0.860.55)低于模型組(2.750.73)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明中藥組能降低復(fù)發(fā)期EAE小鼠神經(jīng)功能評(píng)分，與其降低復(fù)發(fā)率相關(guān)。激素組(1.670.92)與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但也有改善EAE小鼠神經(jīng)功能缺損癥狀的趨勢(shì)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義可能與樣本量小有關(guān)。病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠腦組織中存在大量的炎性細(xì)胞浸

23、潤和大面積的髓鞘脫失，而經(jīng)益腎達(dá)絡(luò)飲和激素治療后，炎性細(xì)胞浸潤減少，髓鞘脫失減輕，說明益腎達(dá)絡(luò)飲能減輕EAE小鼠的炎性細(xì)胞浸潤和髓鞘脫失，從而達(dá)到治療EAE的作用?？傊?，益腎達(dá)絡(luò)飲能降低EAE小鼠的神經(jīng)功能評(píng)分，降低復(fù)發(fā)率，減輕炎性細(xì)胞浸潤和髓鞘脫失，但其作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)［1］WeaverA，GoncalvesdaSilvaA，NuttallRK，etalAnelevatedmatrixmetalloproteinase

24、(MMP)inananimalmodelofmultiplesclerosisisprotectivebyaffectingTh1Th2polarization［J］FASEBJ，2005，19(12):1668－1670［2］吳江，賈建平，崔麗英神經(jīng)病學(xué)［M］北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:236－246［3］ZwibelHL，SmrtkaJImprovingqualityoflifeinmultiplesclerosis:anunm

25、etneed［J］AmJManagCare，2011，17(Suppl5):139－145［4］LublinFD，ReingoldSCDefiningtheclinicalcourseofmultiplesclerosis:resultsofaninternationalsurvey［J］Neurology，1996，46(4):907－911［5］DisantoG，BerlangaAJ，HelAE，etalHeterogeneityi

26、nmultiplesclerosis:scratchingthesurfaceofacomplexdisease［J］AutoimmuneDis，2010，2011(10):1－12［6］JonesJL，ColesAJNewtreatmentstrategiesinmultiplesclerosis［J］ExpNeurol，2010，225(1):34－39［7］鄭紹時(shí)中國北方多發(fā)性硬化臨床分型及預(yù)后研究［D］長春:吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院