三種不同因子對三角帆蚌外套膜細胞ca2+流動性的影響

1、1?三種不同因子對三角帆蚌外套膜細胞三種不同因子對三角帆蚌外套膜細胞Ca2流動性流動性的影響的影響施志儀郝瑩瑩李文娟韓健靳雨麗（上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)種質(zhì)資源與養(yǎng)殖生態(tài)重點開放實驗室，上海201306）關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞三角帆蚌；外套膜細胞；非損傷微測；Ca2流動性三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)是我國主要的育珠母蚌，其所培育出的珍珠色澤鮮艷、細膩光滑，因而成為目前淡水育珠生產(chǎn)中首選的育珠母蚌之一。蚌的外套膜是貝殼和珍珠形成的重

2、要組織器官，有內(nèi)外兩層表皮細胞及其間的結(jié)締組織構(gòu)成。它對鈣具有高度通透性[1~3]，其上皮細胞具有通過細胞膜主動吸收Ca2和貯存Ca2的功能[4]，并通過胞吐作用排出鈣至外套膜外腔中，這些鈣就是形成珍珠的基礎(chǔ)。維生素D3可促進Ca2的吸收和增加鈣的運轉(zhuǎn)，對鈣吸收起著重要作用[5]。對貝類的研究表明，適量維生素D3能夠促進礦物質(zhì)在貝殼中的沉積[6]。而促進貝殼和珍珠很好的生長的一個不容忽視的因素是環(huán)境中的鈣濃度[7~9]，水體環(huán)境Ca2升

3、高，可增加外套膜組織Ca2濃度[10]。研究表明，60~80mgL的Ca2濃度最有利于促進三角帆蚌珍珠質(zhì)沉積[11]。此外，溫度對外套膜細胞的珍珠質(zhì)的沉積也有影響[12]，溫度過高或過低都會影響珍珠質(zhì)分泌，甚至造成蚌體死亡。非損傷微電極測定技術(shù)(Noninvasivemicrotesttechnology，NMT)在細胞和組織水平進行功能鑒定、跨膜生物信息傳遞機制研究等方面發(fā)揮了重要的作用[13]。國內(nèi)外已經(jīng)有許多研究者運用NMT對生物

4、Ca2流動進行了研究。本研究運用NMT在不同濃度Ca2、維生素D3以及不同溫度的培養(yǎng)條件下，研究三角帆蚌外套膜細胞外的Ca2的流動特性，以期為三角帆蚌Ca2代謝的分子調(diào)控機制的研究提供資料，也為日后提高珍珠培育產(chǎn)量提供理論基礎(chǔ)。本試驗采用2齡的活力較強的三角帆蚌，蚌體大小(長寬高為1183cm)，由浙江諸暨養(yǎng)殖基地提供，育珠蚌在小型玻璃水族缸(403020cm)中暫養(yǎng)，所用的都是曝氣的自來水，調(diào)節(jié)其含鈣量約為1.25mmolL。本試驗所

5、用試劑和儀器有：維生素D3(上海生工)，二甲基亞砜(DMSO)(天根生化科技)，RPML1640培養(yǎng)基、抗生素(青霉素、鏈霉素各10000Uml)、優(yōu)級胎牛血清(上海博升生物)，胰蛋白酶、EDTA（Gibco公司)，全培養(yǎng)基(RPML164020%胎牛血清200Uml雙抗[14])，0.25%的胰酶(含有0.02%EDTA)，VD3孵育液用二甲基亞砜溶解為40000UL的儲液，Ca2孵育液用無水CaCl2配成為0.5molL的儲液，測試

6、液使用無Ca2Hanks(C0218，碧云天)配成。恒溫細胞培養(yǎng)箱(REVCO，美國)，倒置顯微鏡(Olympus，日本)，非損傷微電極測定(BI0001系列，美國揚格公司)，超凈工作臺中(蘇州凈化設(shè)備廠)。外套膜組織細胞的培養(yǎng)：取3只蚌用手術(shù)刀切開蚌的閉殼肌，用無菌蒸餾水反復(fù)沖洗外套膜，采用撕裂法分離出外套膜外表皮[15]，再浸入雙蒸水配制的0.01%高錳酸鉀溶液中30?收稿日收稿日期：期：20100725接受日期：接受日期：2010

7、0902本研究由上海市博士后科研資助計劃面上項目(No.09R21413200)，上海市科委基礎(chǔ)重大項目(No.06aj14003)和上海市重點學(xué)科水生生物學(xué)建設(shè)(No.S30701)資助項目?通訊作者。通訊作者。Tel:02161900051Email:zyshi@shou.3P0.05)differentlettersexpressverysignificantlydifference(P0.01).水體Ca2的濃度對外套膜細胞胞外

8、Ca2流動有顯著的影響(P0.05)。如圖3所示，隨著孵育液中Ca2濃度增大，外套膜外的Ca2外排速度減小，Ca2運動方向也由外排變?yōu)閮?nèi)流。當Ca2濃度增大時，去極化電位增大，電壓依賴性鈣通道打開，膜電壓也發(fā)生了改變，引起Ca2的大量內(nèi)流[17]。本研究數(shù)據(jù)顯示，在添加Ca2濃度為0.5mmolL時，細胞處于Ca2外排狀態(tài)，平均流速為190.86.9pmolcm2s1；當Ca2濃度增大為1.25mmolL時，細胞仍處于Ca2外排狀態(tài)，平