三角帆蚌外套膜培養(yǎng)的改進(jìn)及大型有核珍珠的培育.pdf

1、三角帆蚌(Hypriosiscumingii)，是我國(guó)最主要的淡水育珠蚌之一，其所產(chǎn)珍珠層厚，光澤鮮艷，細(xì)膩光滑，產(chǎn)珠質(zhì)量上乘，是淡水珍珠生產(chǎn)用的首選材料。目前我國(guó)淡水珍珠產(chǎn)量處于世界領(lǐng)先水平，但銷售額卻只占18％，出現(xiàn)嚴(yán)重產(chǎn)銷不平衡的問題，其中，所產(chǎn)淡水珍珠顆粒小、質(zhì)量低是導(dǎo)致這一問題的關(guān)鍵原因。為培育出大顆粒優(yōu)質(zhì)的淡水珍珠，本文從三角帆蚌外套膜細(xì)胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化以及育珠的生產(chǎn)實(shí)踐兩方面進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下：
　　 1、C

2、a2+和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)對(duì)三角帆蚌外套膜細(xì)胞培養(yǎng)的影響
　　 a)本試驗(yàn)通過添加不同濃度梯度的Ca2+(0mmol/L，0.5mmol/L，1.25mmol/L，3mmol/L)，對(duì)體外培養(yǎng)的三角帆蚌外套膜細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性和細(xì)胞增殖活力進(jìn)行了測(cè)定。研究結(jié)果顯示，細(xì)胞增殖活力與ALP活性的變化趨勢(shì)大體相同：隨著Ca2+濃度的升高，細(xì)胞增殖活力與ALP活性也逐漸增高，在1.25mmol/L時(shí)達(dá)到最大，

3、3mmol/L時(shí)又有所降低。1.25mmol/LCa2+濃度組的ALP活性和細(xì)胞增殖活力與對(duì)照組相比均表現(xiàn)出顯著差異(P<0.05)，在顯微鏡下觀察到的細(xì)胞狀態(tài)及貼壁情況也明顯好于其它三組。從而得出1.25mmol/LCa2+濃度適合三角帆蚌外套膜細(xì)胞體外培養(yǎng)。
　　 b)本試驗(yàn)通過添加不同濃度梯度的bFGF(0μg/L，0.3μg/L，0.6μg/L，0.9μg/L)，對(duì)體外培養(yǎng)的外套膜細(xì)胞的ALP活性和細(xì)胞增殖活力進(jìn)行測(cè)定。

4、結(jié)果表明，細(xì)胞增殖活力與ALP的活性的變化趨勢(shì)有所不同：隨著bFGF濃度的升高，細(xì)胞增殖的活力也逐漸增高，在0.6μg/L時(shí)達(dá)到最大，0.9μg/L時(shí)又有明顯降低，表明了bFGF促進(jìn)三角帆蚌外套膜細(xì)胞增殖的最適濃度為0.6μg/L，濃度過高反而會(huì)抑制外套膜細(xì)胞生長(zhǎng)增殖；ALP的活性則隨著bFGF濃度的升高而逐步增高，0.9μg/L時(shí)ALP的活性為最高，表明ALP活性的bFGF最適濃度為最高0.9μg/L。同時(shí)顯微鏡觀察表明，各濃度的bF

5、GF對(duì)細(xì)胞形態(tài)及貼壁情況沒有顯著影響。
　　 2、改進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)后進(jìn)行內(nèi)臟團(tuán)大型有核珍珠培育的研究
　　 為得到大顆粒優(yōu)質(zhì)的淡水有核珍珠，本試驗(yàn)進(jìn)行了游離細(xì)胞植入法在三角帆蚌內(nèi)臟團(tuán)插核的生產(chǎn)育珠研究。實(shí)驗(yàn)采用兩種培養(yǎng)基(培養(yǎng)基1、2)進(jìn)行外套膜外膜細(xì)胞的培養(yǎng)，對(duì)不同培養(yǎng)時(shí)間(2、4、6、12h)的細(xì)胞增殖活力進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)將處理過的珠核分別置于兩組細(xì)胞懸液中共培養(yǎng)，6h后采用內(nèi)臟團(tuán)插核手術(shù)，對(duì)500只三角帆蚌進(jìn)行插核，并進(jìn)

6、行為期5個(gè)月的淡水有核珍珠生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：兩種培養(yǎng)基的細(xì)胞增殖活力都隨培養(yǎng)時(shí)間逐漸增大，培養(yǎng)到6、12h時(shí)，兩種培養(yǎng)基的細(xì)胞增殖活力較2、4h時(shí)均有顯著提高(P<0.05)，6h與12h相比差異不顯著(P>0.05)；兩種培養(yǎng)基之間相比，在培養(yǎng)2h時(shí)兩組間細(xì)胞增殖活力沒有顯著差異(P>0.05)，而在培養(yǎng)4、6、12h時(shí)培養(yǎng)基2組的細(xì)胞增殖活力顯著高于培養(yǎng)基1組(P<0.05)。
　　 再通過用兩種兩種培

7、養(yǎng)基進(jìn)行珍珠培育的結(jié)果來看，培養(yǎng)基2組培養(yǎng)的細(xì)胞孵育珠核6h后，貼附的細(xì)胞數(shù)量明顯增多且分布均勻，插核5個(gè)月后，形成了包裹完整、具有光澤、沉積0.8mm珍珠質(zhì)的大型珍珠；而采用培養(yǎng)基1組培養(yǎng)的外套膜細(xì)胞進(jìn)行珠核孵育而后插核，得到的素珠較多，且沒有形成完整珍珠質(zhì)包被的珍珠。本實(shí)驗(yàn)表明改進(jìn)后的培養(yǎng)基有利于三角帆蚌外套膜細(xì)胞培養(yǎng)，從而有利于內(nèi)臟團(tuán)有核珍珠的培育，這為進(jìn)一步開展淡水貝類細(xì)胞培養(yǎng)的研究提供了實(shí)踐基礎(chǔ)，為大型有核珍珠的培育提供了依據(jù)