三角帆蚌Nacrein蛋白對(duì)珍珠晶體成型的影響及Nacrein基因表達(dá)特征.pdf

1、生物礦化的研究表明，珍珠質(zhì)中基質(zhì)蛋白對(duì)殼和珍珠的生長形成起重要作用，其中Nacrein是目前發(fā)現(xiàn)的重要基質(zhì)蛋白之一。為了研究Nacrein蛋白對(duì)三角帆蚌珍珠生長的促進(jìn)作用，本論文通過細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)Nacrein蛋白對(duì)晶體成型的影響及組織表達(dá)差異進(jìn)行分析，這對(duì)于闡明珍珠形成機(jī)理，提高珍珠質(zhì)量有著重要意義，可推動(dòng)育珠業(yè)的快速發(fā)展。
　　 論文包括以下兩部分內(nèi)容：
　　 一：三角帆蚌Nacrein蛋白分離純化及其對(duì)

2、珍珠晶體成型的影響
　　 本試驗(yàn)采用三角帆蚌所產(chǎn)無核珍珠，通過水提法初步分離出的珍珠質(zhì)水溶性基質(zhì)蛋白，采用快速蛋白液相色譜(FPLC， Fast protein liquid chromatography)分離提純?nèi)欠鯪acrein蛋白，并采用配對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（其中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各為6個(gè)組織培養(yǎng)樣品），對(duì)實(shí)驗(yàn)組外套膜組織培養(yǎng)樣品加入Nacrein蛋白，研究Nacrein蛋白對(duì)晶體成型的影響。
　　 研究結(jié)果顯示，經(jīng)過FP

3、LC分離出Nacrein蛋白分子量約為60kDa，組織培養(yǎng)中加入Nacrein蛋白的試驗(yàn)組結(jié)晶成棱形狀，而未加Nacrein蛋白的對(duì)照組結(jié)晶成雪花狀，而且在晶體形成的時(shí)間上，實(shí)驗(yàn)組也較之對(duì)照紐要早。該研究表明，Nacrein蛋白能加速外套膜組織分泌的鈣質(zhì)形成棱狀結(jié)晶，從而對(duì)晶體成型產(chǎn)生影響。
　　 二：三角帆蚌Nacrein基因3'端克隆及其組織表達(dá)差異分析
　　 試驗(yàn)選取健康1齡三角帆蚌，采集外套膜組織樣提取總RNA，

4、通過3'-RACE PCR技術(shù)獲取Nacrein基因3'端序列，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析，利用熒光Real-time PCR,分析NacreinmRNA在外套膜外膜、腮、內(nèi)臟團(tuán)、斧足中表達(dá)水平的差異。
　　 結(jié)果表明：試驗(yàn)所得Nacrein基因3'端序列長度為850bp堿基，包含3個(gè)ORF。利用DNAMAN軟件分析其與合浦珠母貝同源基因序列相似度為56％，與馬氏珠母貝相似度為50％。Nacrein基因mRNA在未插核的三角帆蚌外套膜

5、外膜表達(dá)量最高，與其他組織比較，差異顯著(P＜0.05)。在插核的三角帆蚌各組織的表達(dá)中，外套膜外膜上靠近珍珠生長的部位Nacrein基因mRNA表達(dá)量最高(P＜0.05)，鰓組織中表達(dá)降低（P＜0.05），外套膜內(nèi)膜組織、斧足中表達(dá)增加，與對(duì)應(yīng)的為插核組織中Nacrein基因mRNA水平差異顯著（P＜0.05）。
　　 本論文研究表明，Nacrein參與并調(diào)控了晶體成型、珍珠生長的過程，而三角帆的珍珠培育顯著的影響了Nacre