病理科免疫組織化學技術員培訓及技術操作規(guī)范

1、題目：題目：病理科免疫組織化學技術員培訓及技術操作規(guī)范病理科免疫組織化學技術員培訓及技術操作規(guī)范市一市一—病理科病理科—3030生效日期：生效日期：20122012年1月1日版本號版本號1.01.0修改日期：修改日期：頁碼頁碼11313病理科免疫組織化學技術員培訓及技術操作規(guī)范一、病理科免疫組織化學技術員培訓規(guī)范：凡新入我科的病理技術員均需進行免疫組化理論知識的學習、培訓，經考核合格、具備病理技術員技士資質后方能從事免疫組織化學染色。二

2、、病理科免疫組織化學染色操作規(guī)范1.免疫組織化學染色前的準備事項(一)組織切片的制備常規(guī)切片脫蠟至水（組織固定需用10%中性甲醛）(二)抗體的選擇、稀釋和保存（1）選擇抗體應先了解其反應譜和適用條件〔包括適用切片(石蠟切片抑或冷凍切片)、稀釋度和溫育時間等〕。（2）對于未曾使用過的新抗體，應按照有關說明書的提示，以幾個不同的稀釋度對適宜檢材(已知陽性切片涂片)進行預試驗根據(jù)染色陽性表達的程度和檢材背景著色程度，確定用于染色的最適稀釋度（

3、3）抗體的原液應于分裝后置于一20℃冷室中保存，切勿反復凍存(以免效價降低)。（4）抗體的工作液可置于4℃冰箱中保存。（5）抗體的稀釋。(1)一般用0.01MPBS(生理鹽水磷酸鹽緩沖液)，pH值7.2。(2)或用0.05MTBS(生理鹽水三經基氨基甲烷緩沖液)，pH值7.6。(3)必要時可按需要加適量小牛血清清蛋白。(三)被檢測組織內抗原的修復（1）經4%中性甲醛之類含醛基固定劑固定的組織，其切片中的抗原決定簇因醛的交聯(lián)作用而被封閉，

4、從而影響抗原一抗體反應。進行免疫組織化學染色前，對于組織切片進行抗原修復處理，會使組織中的固有抗原盡量多地暴露出來，提升了大部分檢測抗體的陽性率和反應強度。有的抗體不需要進行抗原修復。應按抗體試劑說明書的提示決定是否進行被檢測組織內的抗原修復。（2）抗原修復緩沖液。(l)一般為0.01M檸檬酸緩沖液(2.1g檸檬酸溶于100ml蒸餾水中，用2MNaOH調節(jié)pH值至6.0)。(2)有些抗體需要特殊修復緩沖液，如高PH值的EDTA(50mM

5、Tris.，10mMEDTA，pH9.0)，或商品化的該題目：題目：病理科免疫組織化學技術員培訓及技術操作規(guī)范病理科免疫組織化學技術員培訓及技術操作規(guī)范市一市一—病理科病理科—3030生效日期：生效日期：20122012年1月1日版本號版本號1.01.0修改日期：修改日期：頁碼頁碼31313(4)熱水浴法:①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經防脫片膠處理的玻片)。②向裝組織切片的容器加人足量(例如200ml)抗原緩沖液，置于水浴鍋中，加熱

6、至9599℃(不沸騰)預熱。③將組織切片插人已預熱的容器內，溫育2040min。④將該容器由微波爐移出，置于室溫下冷卻20min。⑤室溫下，用TBS、PBS或水洗。⑥蒸餾水沖洗。⑦阻斷內源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。⑧用TBS或PBS液沖洗。⑨進行免疫組織化學染色。（5)壓力鍋法:①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經防脫片膠處理的玻片)。②向45.5L的不銹鋼壓力鍋中加人抗原修復緩沖液(約為鍋容積的23)，不加閥情況下加熱至沸騰

7、。③將組織切片插放于金屬切片架上，并置于壓力鍋內沸騰的緩沖液中。④加閥情況下，將組織切片加壓2min。⑤壓力鍋自行冷卻或以流水冷卻減壓后，持續(xù)20min。⑥將冷卻后的切片取出，蒸餾水沖洗后，置于TBS或PBS液中(以免組織切片干燥)。⑦蒸餾水沖洗。⑧阻斷內源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。⑨用TBS或PBS液沖洗。⑩進行免疫組織化學染色。（四）組織切片中內源性酶的阻斷1.內源性過氧化物酶主要存在于紅細胞、嗜中性粒細胞、單核細胞了嗜