病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范

1、題目：題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范市一市一—病理科病理科—3030生效日期：生效日期：20122012年1月1日版本號(hào)版本號(hào)1.01.0修改日期：修改日期：頁碼頁碼11313病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范一、病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)規(guī)范：凡新入我科的病理技術(shù)員均需進(jìn)行免疫組化理論知識(shí)的學(xué)習(xí)、培訓(xùn)，經(jīng)考核合格、具備病理技術(shù)員技士資質(zhì)后方能從事免疫組織化學(xué)染色。二

2、、病理科免疫組織化學(xué)染色操作規(guī)范1.免疫組織化學(xué)染色前的準(zhǔn)備事項(xiàng)(一)組織切片的制備常規(guī)切片脫蠟至水（組織固定需用10%中性甲醛）(二)抗體的選擇、稀釋和保存（1）選擇抗體應(yīng)先了解其反應(yīng)譜和適用條件〔包括適用切片(石蠟切片抑或冷凍切片)、稀釋度和溫育時(shí)間等〕。（2）對(duì)于未曾使用過的新抗體，應(yīng)按照有關(guān)說明書的提示，以幾個(gè)不同的稀釋度對(duì)適宜檢材(已知陽性切片涂片)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)根據(jù)染色陽性表達(dá)的程度和檢材背景著色程度，確定用于染色的最適稀釋度（

3、3）抗體的原液應(yīng)于分裝后置于一20℃冷室中保存，切勿反復(fù)凍存(以免效價(jià)降低)。（4）抗體的工作液可置于4℃冰箱中保存。（5）抗體的稀釋。(1)一般用0.01MPBS(生理鹽水磷酸鹽緩沖液)，pH值7.2。(2)或用0.05MTBS(生理鹽水三經(jīng)基氨基甲烷緩沖液)，pH值7.6。(3)必要時(shí)可按需要加適量小牛血清清蛋白。(三)被檢測(cè)組織內(nèi)抗原的修復(fù)（1）經(jīng)4%中性甲醛之類含醛基固定劑固定的組織，其切片中的抗原決定簇因醛的交聯(lián)作用而被封閉，

4、從而影響抗原一抗體反應(yīng)。進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色前，對(duì)于組織切片進(jìn)行抗原修復(fù)處理，會(huì)使組織中的固有抗原盡量多地暴露出來，提升了大部分檢測(cè)抗體的陽性率和反應(yīng)強(qiáng)度。有的抗體不需要進(jìn)行抗原修復(fù)。應(yīng)按抗體試劑說明書的提示決定是否進(jìn)行被檢測(cè)組織內(nèi)的抗原修復(fù)。（2）抗原修復(fù)緩沖液。(l)一般為0.01M檸檬酸緩沖液(2.1g檸檬酸溶于100ml蒸餾水中，用2MNaOH調(diào)節(jié)pH值至6.0)。(2)有些抗體需要特殊修復(fù)緩沖液，如高PH值的EDTA(50mM

5、Tris.，10mMEDTA，pH9.0)，或商品化的該題目：題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范市一市一—病理科病理科—3030生效日期：生效日期：20122012年1月1日版本號(hào)版本號(hào)1.01.0修改日期：修改日期：頁碼頁碼31313(4)熱水浴法:①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。②向裝組織切片的容器加人足量(例如200ml)抗原緩沖液，置于水浴鍋中，加熱

6、至9599℃(不沸騰)預(yù)熱。③將組織切片插人已預(yù)熱的容器內(nèi)，溫育2040min。④將該容器由微波爐移出，置于室溫下冷卻20min。⑤室溫下，用TBS、PBS或水洗。⑥蒸餾水沖洗。⑦阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。⑧用TBS或PBS液沖洗。⑨進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。（5)壓力鍋法:①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。②向45.5L的不銹鋼壓力鍋中加人抗原修復(fù)緩沖液(約為鍋容積的23)，不加閥情況下加熱至沸騰

7、。③將組織切片插放于金屬切片架上，并置于壓力鍋內(nèi)沸騰的緩沖液中。④加閥情況下，將組織切片加壓2min。⑤壓力鍋?zhàn)孕欣鋮s或以流水冷卻減壓后，持續(xù)20min。⑥將冷卻后的切片取出，蒸餾水沖洗后，置于TBS或PBS液中(以免組織切片干燥)。⑦蒸餾水沖洗。⑧阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。⑨用TBS或PBS液沖洗。⑩進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。（四）組織切片中內(nèi)源性酶的阻斷1.內(nèi)源性過氧化物酶主要存在于紅細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞了嗜