法醫(yī)學(xué)尸體檢驗(yàn)切片制作理論與技術(shù)

1、法醫(yī)病理學(xué) 組織切片制作,HE染色切片,一、目的要求,掌握取材、固定、水洗、脫水、透明、浸蠟與包埋，切片制作。（一）取材1.取材快，新鮮，防止組織腐敗。2.取材刀鋒利，垂直地切取，嚴(yán)禁擠壓或用鉗鑷鉗夾，以免使組織或細(xì)胞變形造成人為的破壞。3.取材大小，lcm～3cm×1cm～2cm×0.3cm～0.5cm。材料過(guò)大在短時(shí)間內(nèi)不易固定透，影響效果。,（二）方法：1. 實(shí)質(zhì)器官心臟：心房

2、、瓣膜、心室。可分別取病變部位帶正常組織?？蓡为?dú)取心室肌，乳頭肌，3～5塊。肺臟：左右兩肺（五個(gè)肺葉）；可根據(jù)病變需要決定取材塊數(shù)，特殊情況下為區(qū)別在不同肺葉上取材，可用形狀做標(biāo)志在記錄時(shí)記清楚，5～7塊。腎臟：取材包括被膜、皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂，應(yīng)區(qū)別左右腎，2～4塊。胰腺：取胰體部，必要時(shí)加取胰頭、胰尾，2塊。肝臟：取長(zhǎng)方形或三角形，2～3塊。脾臟：取材帶被膜，2～3塊。,腦：全腦（橋腦、延腦、小腦）、脊髓頸段及脈絡(luò)叢，十一塊

3、，或根據(jù)具體情況決定： ①額極；②前后中央回；③海馬；④內(nèi)囊；⑤丘腦；⑥枕葉；⑦脈絡(luò)叢；⑧橋腦；⑨延髓；⑩中腦； ?小腦。取材時(shí)要帶上軟腦膜、腦室膜或軟脊膜因此刀要鋒利。需要時(shí)取脊髓。 垂體：前、中、后葉和垂體柄，從前向后橫切。,2．管腔臟器： 取材時(shí)注意方向，取管腔臟器的全層構(gòu)造。 大腸、小腸：應(yīng)考慮環(huán)行皺襞，沿腸管的長(zhǎng)軸?。v切）。 食管、氣管：橫切面為宜。 胃：常規(guī)取胃底。 取材后應(yīng)將被膜

4、面鋪在濾紙上，然后入固定液內(nèi)，防止或減少組織受壓變形與收縮。 有病變的部位，應(yīng)附帶周?chē)＝M織取材。,二、固定,（一）意義：是做好切片的重要步驟之一，如果首次組織固定不良，再重新固定效果不佳。 檢材固定的關(guān)鍵：取材后盡可能地及時(shí)地將所取的材料進(jìn)行固定，以防止其“死后”變化的進(jìn)展，盡力使組織接近于生前狀態(tài)。為了防止組織結(jié)構(gòu)及成份的破壞和溶解消失，需要使其轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，有利于組織結(jié)構(gòu)保存--固定的基本意義。,固定

5、的目的：1. 阻止死后變化，防止組織的自溶與腐敗。2．保存組織的結(jié)構(gòu)及成份。3．媒染作用，使不同的組織成份對(duì)染料有不同 親和力，使細(xì)胞各部易于受色。4．能使組織硬化，為制作薄切片奠定基礎(chǔ)。注意：材料塊不能過(guò)大，固定器皿不易過(guò)小，固定液量不易過(guò)少，應(yīng)是固定材料體積的20一30倍。,（二）固定液： 根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇不同種類(lèi)固定液，如糖原檢查：不含水的固定液；電鏡檢查：鋨酸固定液等；HE染色：甲醛。固定液：用以

6、固定組織的藥劑。固定液分類(lèi)：?jiǎn)渭児潭ㄒ?，由一種藥劑組成；混合固定液（或復(fù)合），由二種以上的藥劑組成。1．選擇固定液的標(biāo)準(zhǔn)：①具有強(qiáng)的穿透力，固定均勻，能迅速滲透到組織內(nèi)部使組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)保持生活狀態(tài)。②不使組織過(guò)度收縮與膨脹而變形。③能迅速使組織中的蛋白質(zhì)、糖、脂肪等物質(zhì)凝固成為不溶性物質(zhì)。④使組織達(dá)到一定的硬度便于切片制作。⑤價(jià)格便宜，易購(gòu)買(mǎi)，配制方便。,2．單純固定液 乙醇（酒精）、甲醛（福爾馬林）、重鉻酸鉀

7、、苦味酸、鋨酸、丙酮、冰醋酸（1）乙醇（酒精）（alcohol）優(yōu)點(diǎn)：①價(jià)格低，易購(gòu)買(mǎi)，易溶于水，使用方便，95％濃度，無(wú)水乙醇100％；②市售有兩種：100%；95%；③能硬化組織起固定作用；④也是一種最常用的脫水劑。 固定用濃度在70％～80％，酒精濃度愈大組織收縮愈嚴(yán)重，濃度過(guò)低起不到固定作用。缺點(diǎn)：①穿透力小，由于被固定的組織表面硬化，固定液不容易滲透到組織中去，所以用乙醇固定的組織材料要小。②使組織嚴(yán)重

8、收縮。③由于酒精能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，核蛋白的沉淀物易溶于水，使細(xì)胞核核色不佳。。④溶解脂肪、血紅蛋白和多種色素，脂肪染色必須制作冰凍切片。,2．甲醛：（福爾馬林）（formalin） 最常用的固定液，一種還原劑，無(wú)色透明極易揮發(fā)有強(qiáng)烈刺激性氣味的液體，不能與氧化劑混使用?？蓱?yīng)用于組織學(xué)、組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)等染色，最好用時(shí)現(xiàn)配。商品甲醛：37％～40％甲醛水溶液。固定液的濃度：4％～8％（習(xí)慣上稱(chēng)為10％或2

9、0％的福爾馬林）。固定時(shí)間：常溫下固定24h～48h?？焖俟潭?，可加溫到70℃～80℃或者加溫煮沸10min即可?？焖俟潭?，組織塊不宜過(guò)厚或過(guò)大，缺點(diǎn)是組織收縮較嚴(yán)重。固定液配制：甲醛1份與9份自來(lái)水混合即為10％（4%）濃度的甲醛固定液。,優(yōu)點(diǎn)：①滲透力較強(qiáng)；②組織收縮小；③細(xì)胞核染色較好。 缺點(diǎn)： ①質(zhì)量較差的formalin在低溫下久存容易產(chǎn)生一種白色的沉淀物稱(chēng)“三聚甲醛”（付醛），經(jīng)氧化成為甲酸而使溶液呈酸性，影響細(xì)

10、胞核染色?？稍趥溆眉兹┤芤褐蟹湃脒m量的碳酸鈣或碳酸鎂，簡(jiǎn)便的辦法可在溶液中投入適量的大理石或者白色粉筆作為中和劑。 ②酸性福爾馬林固定的組織多易產(chǎn)生一種褐色或黑色細(xì)顆粒狀物，稱(chēng)為福爾馬林色素，在切片上形成黑色小顆粒，不溶于水和酒精，影響染色效果和切片的觀察。,去掉福爾馬林色素顆粒方法：① Schridde法 25％氨水 l ml 75％酒精 200 ml 切片脫蠟經(jīng)7

11、0％酒精時(shí)，用上液浸泡半小時(shí)或稍長(zhǎng)一些時(shí)間，然后水洗再行染色。②Verocay法 l％氫氧化鉀水溶液 l ml 70％酒精 100 ml 切片脫蠟經(jīng)酒精80％時(shí)入上液處理10分鐘，經(jīng)70％酒精入水后即可染色。,（三）水洗 1.用水道流水洗滌，徹底清除組織塊中的固定液。 2.水洗時(shí)間數(shù)小時(shí)至24小時(shí)。 3.根據(jù)材料多少、大小可靈活

12、掌握水洗工具，可用水洗 筐或用紗布包裹，防止水流過(guò)大將組織塊沖掉或丟失。 (四)脫水 組織塊固定后雖然已經(jīng)硬化，但達(dá)不到切薄片的硬度，必須制成石蠟組織塊，脫水是繼固定后的重要步驟。  經(jīng)固定和水洗后的組織含大量水分，在這種情況下首先必須除去組織內(nèi)部的水分，這種除水的過(guò)程叫做脫水，脫水使用的藥劑稱(chēng)為脫水劑。 脫水必須逐漸依次從低濃度酒開(kāi)始到高濃度酒，否則引起組織強(qiáng)烈收縮，變脆不利制片。

13、脫水不徹底也很難浸進(jìn)石蠟。,常用脫水劑：溶于水和透明劑的試劑，如酒精、丙酮、正丁醇等。（1）酒精步驟：70％ 80％ 90％ 95％ 100％Ⅰ 100％Ⅱ，一般數(shù)小時(shí)到12小時(shí)，更換一次酒精。 配低濃度酒精時(shí)，可用市售95％酒精配制。70％酒精：95％酒精70ml加蒸餾水25ml至95ml；80％酒精：95％酒精80ml加蒸餾水至95ml，依次類(lèi)推。（2）丙酮 脫水作用與酒

14、精相似，雖其脫水作用比酒精強(qiáng)，但可引起組織塊的收縮較，價(jià)錢(qián)較貴，故不宜用于一般組織脫水，它即有脫水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脫水1～8小時(shí)即可。,（五）透明目的：因?yàn)榫凭c蠟不能相交換需要借助石蠟誘導(dǎo)劑的媒介作用。石蠟誘導(dǎo)劑滲入之后組織塊往往呈現(xiàn)透明狀態(tài)，習(xí)慣上將石蠟誘導(dǎo)劑滲入組織內(nèi)的過(guò)程叫透明，用于透明的試劑稱(chēng)為透明劑。透明時(shí)間：根據(jù)組織塊的大小而定，一般20分鐘至1小時(shí)。組織塊過(guò)大可延長(zhǎng)透明時(shí)間，透明好的材料如同油

15、炸的感覺(jué)呈透明狀。透明劑：二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油等。最常用二甲苯。 二甲苯：無(wú)色透明有機(jī)溶媒，有很強(qiáng)的刺激氣味，易揮發(fā)，長(zhǎng)期接觸對(duì)粘膜有刺激作用，透明作用很強(qiáng)，可使組織收縮變形，透明時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。如遇到組織塊內(nèi)部或某一個(gè)部位呈白色混濁狀態(tài)時(shí)說(shuō)明脫水不徹底，如果造成透明不徹底應(yīng)退回到100％酒精中重新透明。,六、浸蠟與包理：浸蠟的目的：為了能制作薄切片做準(zhǔn)備，將透明好的組織塊浸到融化的石蠟中，使石蠟滲透到組織細(xì)胞內(nèi)，將組織

16、細(xì)胞內(nèi)的二甲苯完全徹底地取代出來(lái)，再用石蠟將組織包埋，冷卻后，切成小塊，修整好切面，這一過(guò)程為浸蠟與包埋。,具體操作：（一）浸蠟石蠟箱溫度58℃～60℃左右，內(nèi)有標(biāo)明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的蠟杯或蠟缸，從透明的二甲苯Ⅱ取出組織塊，放入Ⅰ號(hào)蠟杯中2h～3h，再將組織塊移入Ⅱ號(hào)蠟杯（純蠟）2h～4h，再移入Ⅲ號(hào)蠟杯中（純蠟）半天或者稍降蠟箱溫度過(guò)夜，最后用融化的純蠟作為包埋用的蠟。 注意：浸蠟時(shí)蠟杯不要顛倒順序使用，以免脫二甲苯不

17、徹底。如遇特殊情況需要延長(zhǎng)浸蠟時(shí)間時(shí)可降低蠟箱溫度或關(guān)閉蠟箱，需要時(shí)再開(kāi)。溫度越高，時(shí)間越長(zhǎng)組織塊收縮越嚴(yán)重，而且材料脆而不易制作切片。,（二）包埋：包埋方法：石蠟包埋法、火棉膠包埋法、炭蠟包埋法、明膠包埋法、環(huán)氧樹(shù)脂包埋法（電鏡用）等。步驟：純石蠟溶解后（60℃）倒入包埋框內(nèi)或紙盒內(nèi)，迅速將浸好的組織塊的切面向下、放平，依次擺入框內(nèi)，待蠟逐漸冷卻凝固后，將組織材料凝結(jié)在石蠟內(nèi)。然后按組織塊大小切成蠟塊，組織四周蠟邊留0.1厘米左右

18、即可。注意：如果操作不熟練或在冬天包埋時(shí)最好用酒精燈。在材料包入石蠟之前，稍在酒精燈上過(guò)一下加溫，以免材料與包埋蠟溫度不符造成材料與包埋蠟間遺留縫隙，切片時(shí)產(chǎn)生分離現(xiàn)象。 蠟塊背面要標(biāo)記例號(hào)等字樣的紙片，以長(zhǎng)期保存。切完的蠟塊表面要用燙片板，燙一下封閉材料面，隔離空氣接觸可長(zhǎng)期保存材料不干。,（三）蠟的種類(lèi)：1．蜂蠟：是動(dòng)物體內(nèi)提取的蠟，顏色微黃故也稱(chēng)為黃蠟，溶點(diǎn)在54℃左右。特點(diǎn)是潤(rùn)滑帶有粘性，冬天用量比夏天多。

19、2．石蠟：是由礦物質(zhì)中提取，質(zhì)地較疏松，色白。根據(jù)蠟的溶點(diǎn)不同又可分為軟蠟及硬蠟。 軟蠟：50℃以下的石蠟。硬蠟：溶點(diǎn)在50℃以上的石蠟。兩種蠟可以混合在一起使用。石蠟熔點(diǎn)有52℃～54℃，56℃～58℃，58℃～60℃，60℃～62℃。,七、切片工具：切片刀、磨刀機(jī)、切片機(jī)、水浴鍋，干燥箱等；載薄片、手術(shù)刀、毛筆、彎鑷子、托盤(pán)、大平皿（展片使用）、烤片盒、蛋白甘油等。（一）切片機(jī)種類(lèi)：輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)、滑行式切片機(jī)（滑動(dòng)式

20、）、冰凍切片機(jī)、超薄切片機(jī)等（電鏡用）。（二）構(gòu)造：由四個(gè)基本部分組成：刀臺(tái)、標(biāo)本臺(tái)、旋轉(zhuǎn)輪、控制切片厚度的微動(dòng)裝置（標(biāo)有 l～25或1～50的數(shù)字，每一數(shù)字代表一個(gè)微米）。根據(jù)需要調(diào)節(jié)厚度，一般采用5μm～7μm。蛋白甘油：用雞蛋清（不要雞蛋黃）用玻璃棒充分?jǐn)嚢韬笥脭?shù)層紗布過(guò)濾后加等量的甘油攪均勻加數(shù)顆麝香草酚。,（三）切片制作1．將潔凈的載薄片涂薄層蛋白甘油放人烤片盒內(nèi)待用。2．將切割修整好的蠟塊用普通刀片先將蠟塊的組織切面

21、暴露出來(lái)修平，固定在切片機(jī)上的標(biāo)本臺(tái)上并擰緊螺旋。3．蠟塊先固定在標(biāo)本臺(tái)上切片刀固定于刀臺(tái)上，擰緊固定刀的螺絲同時(shí)調(diào)整刀與蠟塊的切片距離使刀與蠟塊貼緊后再固定刀臺(tái)螺絲，刀的角度為25度角。4．調(diào)節(jié)微動(dòng)裝置，調(diào)至切片所需厚度（一般為 5μm～7μm）。5．修材。右手握旋轉(zhuǎn)輪搖把按順時(shí)針?lè)较蚓鶆虻負(fù)u動(dòng)直到組織塊切面完整暴露為止。,（四）展片 水浴鍋上平皿內(nèi)水溫升至45℃左右，將已切好的連續(xù)薄片切分成數(shù)片，放在水面，輕

22、漂，水中展平，未展平時(shí)可用小彎鑷子輕輕展開(kāi)，然后用涂有蛋白甘油的載片在水中選擇完整的切片進(jìn)行撈片。（五）注意事項(xiàng) 1．切片刀要鋒利，否則切片有切痕或組織破碎，甚至不能制成切片。2．展切片時(shí)水溫要適當(dāng)，水溫低，展不平切片，切片有皺折，影響效果；如果水溫過(guò)高，切片入水后可發(fā)生溶化。,實(shí)習(xí)四　法醫(yī)病理學(xué) 組織切片染色,目的要求：掌握切片染色、封片等技術(shù)及操作過(guò)程。一、染色前準(zhǔn)備工作1．染色：準(zhǔn)

23、備的工具：染色缸或者12個(gè)盛各種不同濃度的酒精染色筐廣口瓶，染色缸及脫蠟、透明用的各二個(gè)二甲苯染色缸，蓋片，帶磨口蓋樹(shù)膠瓶一個(gè)，鑷子1把。2．染色需要的試劑及染色液的配制：① 0.5％～1％鹽酸—酒精：用于細(xì)胞核染色分色。 配制：100ml的70％～80％酒精中加人0.5ml或者1ml的濃鹽酸。② 蘇木素（hematoxylin）及伊紅（eosin） 蘇木素：細(xì)胞核的染料，氧化后的蘇木素具有染色能力的。

24、蘇木素的配方：二種，一是自然氧化的蘇木素；二是加入氧化劑加速氧化的。,3．蘇木素的配方①自然氧化（Ehrlieh）蘇木素： 蘇木精 2g 銨明礬 3g 無(wú)水酒精 100ml 甘油 100ml

25、 蒸餾水 100ml 將上述藥品配在一起后裝入玻璃瓶中，瓶口罩上數(shù)層紗布以防灰塵落入染液，暴露于陽(yáng)光中或空氣中自然氧化（成熟過(guò)程），約6周—8周以上，染液配制越久其染色能力越強(qiáng)，可以一次大量配制以備用。,② 自然氧化（Delafield）蘇木素： 蘇木素 4g 無(wú)水酒精

26、 25ml 銨明礬飽和水溶液 400ml銨明礬飽和水溶液配法：10％銨明礬水溶液，或1份銨明礬加蒸餾水11份。配制過(guò)程：蘇木素溶入酒精后，加入銨明礬液，倒入玻璃瓶中敞開(kāi)瓶口，罩以數(shù)層紗布，置光線充足處3 ～ 5天后過(guò)濾，再加入甘油100ml、甲醇100ml。置光線充足處經(jīng)l.5～2個(gè)月后成熟。染液可保存多年，染色時(shí)多采用蒸餾水稀釋的染色液。,③ 加氧化劑的蘇木素配制 H

27、arris蘇木素： ① 液 蘇木精 l g 無(wú)水酒精 10 ml ② 液 鉀（銨）明礬 20 g 蒸餾水 200 ml

28、 ③ 氧化汞 0.5 g ④ 冰醋酸 8 ml配制方法：先將①液用玻璃棒攪拌使蘇木素溶解，再將②液煮沸溶化去火，速加入①液，再加火，煮沸后去火，立即加入氧化汞0.5g，再煮沸，迅速冷卻后加入冰醋酸8ml過(guò)濾使用，組織學(xué)常用染色液。,4．伊紅（eosin） 最常用的細(xì)胞質(zhì)

29、染料之一，外觀為紅色粉末。分兩種：酒溶性伊紅；水溶性伊紅。 配法：①0.5％水溶性伊紅 伊紅0.5g+蒸餾水100ml，溶解后使用。 ②0.5％酒精溶性伊紅 伊紅0.5g+70％酒精100ml，溶解后使用。 一般病理組織學(xué)切片染色，染細(xì)胞核用蘇木素，染細(xì)胞質(zhì)用伊紅，故一般稱(chēng)這種染色法為HE染色（蘇木素—

30、伊紅染色法）。,二、染色方法及步驟1. 脫蠟：二甲苯Ⅰ10min～20min；二甲苯Ⅱ10min～ 20min。2．脫苯：100％Ⅰ無(wú)水乙醇脫苯2min～5min；100％Ⅱ無(wú)水乙醇2min～5min。3．水化：95％酒精→90％酒精→80％酒精→70％酒精各數(shù)秒至 1min，水浸洗數(shù)分鐘。4．染細(xì)胞核：切片移入蘇木素染液中染10min～20min。5．水洗（水洗一下將浮在表面的染液去掉）。6．分化：l％鹽酸酒精分化時(shí)

31、間數(shù)秒鐘，觀察切片組織材料呈粉紅色。7．水洗：水道流水洗0.5～數(shù)小時(shí)，切片從粉紅色轉(zhuǎn)變?yōu)轷r艷的藍(lán)色（藍(lán)化過(guò)程）。8．染細(xì)胞質(zhì)：0.5％或l％伊紅溶液復(fù)染1min～5min。9．脫水：切片脫水由低濃度酒到高濃度酒精。將切片入70％酒精→80％→90％→95％。切片在酒精內(nèi)幾秒鐘，時(shí)間長(zhǎng)，伊紅易脫色。應(yīng)注意伊紅與蘇木素的對(duì)比染色的色調(diào)適合。10. 脫水：100％酒精Ⅰ5min～10min；100％Ⅱ酒精 5min～10min11

32、. 透明：入二甲苯Ⅰ2min～5min；二甲苯Ⅱ2min～5min。,三、封片與染色結(jié)果 用中性樹(shù)膠進(jìn)行封固切片，細(xì)胞核經(jīng)蘇木素染成鮮艷的藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)核仁、肌纖維、膠原纖維、紅細(xì)胞等呈紅色。 HE染色簡(jiǎn)化程序：（脫蠟、水化）二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ→無(wú)水酒精Ⅰ→無(wú)水酒精Ⅱ→95％→90％→80％→70％→水洗→蘇木素染色（染細(xì)胞核）（10min～20min）→自來(lái)水洗一下→1％鹽酸酒精分化→自來(lái)水洗（核分化

33、）→伊紅染色（染細(xì)胞質(zhì)）→直接脫水70％→80％→90％→95％（各稍停片刻）→100％Ⅰ→100％Ⅱ（徹底脫水） →透明，二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ，中性樹(shù)膠封片。,常規(guī)涂片染色的操作方法： 基本與石蠟切片染色程序一樣。 不同點(diǎn)：固定液不同，操作時(shí)間短。步驟：涂片自然干燥或加溫干燥后甲醇固定，待固定液干燥后，蘇木素染色2min～5min→水洗一下去浮色→1％鹽酸酒精分化（浸1～2次）→流水洗切片（5min以上

34、）。伊紅染色2min～5min→脫水：70％酒精→80％→90％→95％各數(shù)秒，100％Ⅰ～100％Ⅱ各稍停片刻（徹底脫水）→透明：二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ，中性樹(shù)膠封片。,四、兩種常用的特殊染色方法 （一）Mallory染色 配方： 酸性復(fù)紅 3克 苯胺蘭 1克 桔黃G

35、 3克 磷鉬酸 1克 蒸餾水 200ml,染色方法：1．石蠟切片常規(guī)脫蠟至水。2．入3％重鉻酸鉀媒染12h～24h，如果固定的材料含升汞可省此步驟，但需脫汞。3．蒸餾水洗二次。4．入Mallory染色液中染5min。5. 蒸餾水洗。6．95％酒精分化約3min～5min

36、，顯微鏡下控制染色程度。7．100％Ⅰ、100％Ⅱ酒精脫水。8．二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明。9．樹(shù)膠封片。 結(jié)果：膠原纖維及粘液呈深藍(lán)色，紅細(xì)胞呈紅黃色，肌組織呈紅色，彈力纖維呈玫瑰紅色。,Contused myocardial fibers stained by Mallory’s trichrome method,（二）Weigert染色（彈力纖維染色法） 配方：

37、 鹽基品紅 2g 間苯二酚 4g 蒸 餾 水 200ml 配制方法：將上述藥品一起放入燒杯內(nèi)，加熱煮沸，再加29％FeCl3水溶液25ml，用玻璃棒攪勻，繼續(xù)煮沸2min～5min，冷卻后過(guò)濾。傾去濾液不用，將濾紙及沉淀物一同放入

38、燒杯內(nèi)，放在干燥箱內(nèi)烘干，取出加 95％酒精200ml，加水煮至沉淀物溶盡，拿出濾紙冷卻后過(guò)濾并補(bǔ)足蒸發(fā)失去的酒精，最后加入濃鹽酸4ml即可，此液可保留數(shù)月。,染色方法：1．切片脫蠟至酒精。2．Weigert氏液染色20min～60min。3．用95％酒精洗去剩余染液，在顯微鏡下觀察結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)，不清晰時(shí)可用1％鹽酸酒精分化。4．自來(lái)水洗。5．以l％中性紅做對(duì)比染色或用明礬蘇木素染后，再用稀釋伊紅或用Van Gieson液染色。

39、6．用95％酒精分化，無(wú)水酒精脫水。7．二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明。8．樹(shù)膠封片。結(jié)果：彈力纖維顯示蘭黑色。用中性紅做對(duì)比染色，肌組織 呈紅色。,Elastic fibers,Collagen and elastic system in the remodelling process ofmajor types of idiopathic interstitial pneumonias (IIP),Histopat