研究生分子生物學(xué)知識(shí)點(diǎn)

1、分子生物學(xué)知識(shí)點(diǎn)總結(jié)1.蛋白質(zhì)組(proteome)：proteinsexpressedbyagenome即基因組表達(dá)的全套蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)（Protemics）則是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象，從整體角度，分析細(xì)胞或組織內(nèi)蛋白質(zhì)構(gòu)成的動(dòng)態(tài)變化和活動(dòng)規(guī)律的科學(xué)。（相互作用網(wǎng)絡(luò)PPI）2.表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)研究的基本流程：蛋白樣品的制備及定量總蛋白的雙向凝膠電泳（染色）凝膠分析軟件分析膠內(nèi)酶解（胰肽酶）質(zhì)譜分析（肽質(zhì)量指紋圖譜）數(shù)據(jù)庫(kù)搜索鑒定蛋白性

2、質(zhì)3.雙向凝膠電泳：相互垂直的兩個(gè)方向上，分別基于蛋白質(zhì)不同的等電點(diǎn)和分子量，先經(jīng)等電聚焦電泳(isoelectricfocusing，IEF)，再經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）把復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分分離。4.比較蛋白質(zhì)組學(xué)：通過(guò)比較同一個(gè)體腫瘤細(xì)胞（組織）與正常細(xì)胞（組織）之間蛋白質(zhì)在表達(dá)數(shù)量、表達(dá)位置和修飾狀態(tài)上的差異，發(fā)現(xiàn)與腫瘤發(fā)病或者發(fā)展有關(guān)的分子標(biāo)記，用來(lái)作為腫瘤診斷的腫瘤相關(guān)蛋白。5.軟電離：所謂“軟電離”是指樣品分

3、子電離時(shí)保留整個(gè)分子的完整性，不會(huì)形成碎片離子。6.腫瘤血清蛋白質(zhì)分析方法（tumserologicproteomeanalysis，SERPA）：是從腫瘤免疫學(xué)觀點(diǎn)出發(fā)建立的一種蛋白質(zhì)組學(xué)和腫瘤免疫學(xué)相結(jié)合的方法。SERPA其實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：①雙向電泳分離腫瘤組織（細(xì)胞）總蛋白質(zhì)；②轉(zhuǎn)膜；③建立westernblotting蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)圖譜（與患者或正常人血清反應(yīng)）；④軟件分析確定差異反應(yīng)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)；⑤質(zhì)譜鑒定和生物信息對(duì)腫瘤組織平

4、行膠(replicagel)中相應(yīng)的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定，篩選出腫瘤分子標(biāo)志物；⑥用ELISA、免疫組化等方法對(duì)該分子標(biāo)志物進(jìn)行原位驗(yàn)證，或者進(jìn)一步分析該蛋白功能，研究其在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮的作用。7.蛋白質(zhì)芯片：是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體表面，形成微陣列，根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，構(gòu)建微流體生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)生物分子的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測(cè)。8.功能蛋白質(zhì)組學(xué)：是指對(duì)蛋白質(zhì)間、蛋白質(zhì)與DNARNA

5、間的相互作用的研究。以細(xì)胞內(nèi)與某個(gè)功能有關(guān)或某種條件下的一群蛋白質(zhì)為主要研究?jī)?nèi)容，由此建立細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳遞的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。研究方法主要有：?蛋白質(zhì)芯片技術(shù)目前常用蛋白質(zhì)芯片有：1.SELDITOFMS蛋白質(zhì)芯片2.抗體芯片3.靶蛋白質(zhì)芯片4.液相蛋白質(zhì)芯片?噬菌體展示技術(shù)?酵母雙雜交系統(tǒng)15.Caspase：含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶，是一組對(duì)底物的天冬氨酸部位有特異水解作用的，活性中心富含半胱氨酸的蛋白水解酶。Caspase功能：1.

6、細(xì)胞骨架蛋白和核纖層蛋白，導(dǎo)致細(xì)胞解體成凋亡小體2激活DNA酶（CaspaseactivatedDNase，CAD）。CAD:Caspase激活的DNA酶正常情況下CAD與其抑制劑ICAD結(jié)合，在胞質(zhì)內(nèi)，無(wú)活性。凋亡時(shí)Caspase水解ICAD游離的CAD有活性，進(jìn)入胞核，切割DNA。3滅活凋亡抑制物:如Bcl2、ICAD4水解與DNA損傷修復(fù)相關(guān)的酶和蛋白質(zhì)如聚ADP核糖多聚酶（polyADPribosepolymerasePARP）

7、16.死亡受體途徑外源性途徑：死亡受體TNFR1、Fas、CAR1、NGFR、DR3、DR4、DR5等是一類通過(guò)與相應(yīng)配體結(jié)合，傳遞細(xì)胞凋亡信號(hào)的細(xì)胞膜蛋白。通路（pathway）死亡配體（細(xì)胞外）死亡受體（細(xì)胞膜）相關(guān)蛋白（中介蛋白，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)）激活Caspase8—激活Caspase3細(xì)胞凋亡17.線粒體損傷途徑內(nèi)源性途徑：線粒體是細(xì)胞生命活動(dòng)的控制中心，它不僅是細(xì)胞呼吸鏈和氧化磷酸化的中心，而且是細(xì)胞凋亡的調(diào)控中心。①釋放細(xì)胞色素C

8、（Cyt.c）②釋放凋亡誘導(dǎo)因子（apoptosisinducingfact，AIF）和限制性核酸內(nèi)切酶G（EndoG）③釋放SmacDiablo(thesecondmitochondriaderivedactivatofcaspaseSmac)(directIAPbingdingproteinDiablo)④釋放活性氧ROS18.細(xì)胞周期：1.G1期（firstgap）從有絲分裂到DNA復(fù)制前的一段時(shí)期，又稱合成前期，此期主要合成RN