實(shí)驗(yàn)十二 菠菜葉中葉綠素的提取和分離

1、1實(shí)驗(yàn)十二實(shí)驗(yàn)十二菠菜葉中葉綠素的提取和分離（菠菜葉中葉綠素的提取和分離（070526）一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握從菠菜葉中提取葉綠素的方法；2了解薄層層析的原理，掌握薄層層析的一般操作和定性鑒定方法二實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理1葉綠素提取葉綠素提取高等植物體內(nèi)的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類，主要包括葉綠素a(C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H70O6N4Mg)、β—胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)等4種。葉綠

2、素a和葉綠素b為吡咯衍生物與金屬鎂的配合物，胡蘿卜素是一種橙色天然色素，屬于四萜類，為一長(zhǎng)鏈共軛多烯，有α、β、γ三種異構(gòu)體，其中，β異構(gòu)體含量最多。葉黃素為一種黃色色素，與葉綠素同存在于植物體中，是胡蘿卜素的羥基衍生物，較易溶于乙醇，在乙醚中溶解度較小。根據(jù)它們的化學(xué)特性，可將它們從植物葉片中提取出來，并通過萃取、沉淀和色譜方法將它們分離開來。RR=H￡R=OH2薄層色譜薄層色譜薄層層析是快速分離和定性分析微量物質(zhì)的一種極為重要的實(shí)驗(yàn)

3、技術(shù)，具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便而快速的特點(diǎn)。它是將固定相支持物均勻地鋪在玻片上制成薄層板，將樣品溶液點(diǎn)加在起點(diǎn)處，置于層析容器中用合適的溶劑展開而達(dá)到分離的目的。用此法分離時(shí)幾乎不受溫度的影響，可采用腐蝕性顯色劑，而且可在高溫下顯色，特別適用于揮發(fā)性小或在較高溫度下易發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)，同時(shí)也常用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)或監(jiān)測(cè)有機(jī)反應(yīng)完成的程度。薄層層析按分離機(jī)制不同可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析等，最常用的為吸附薄層層析，在此主要討論。吸附層

4、析中樣品在薄層板上經(jīng)過連續(xù)、反復(fù)的被吸附刑吸附及展開劑解吸附過程，由于不同的物質(zhì)被吸附劑吸附的能力及被展開劑解吸附的能力不同，放在薄層上以不同速度移動(dòng)而得以分離。通常用比移值(Rf)表示物質(zhì)移動(dòng)的相對(duì)距離：的距離展開劑前沿至原點(diǎn)中心點(diǎn)中心的距離色斑最高濃度中心至原?fR3吸附劑按其含水量的多少各分為五個(gè)等級(jí)：I級(jí)含水量最少，活性最高；V級(jí)含水量最多，活性最低；但并不是活性越高分離效果越好，選用哪種活性級(jí)別的吸附劑，要用實(shí)驗(yàn)的方法來確定。

5、酸堿性：市售氧化鋁有酸性（用以分離酸性化合物）、中性、堿性（用以分離生物堿等堿性化合物），其蒸餾水洗出液的pH值分別為4、7.5、9—10；其中以中性氧化鋁應(yīng)用最廣，可用來分離各種化合物，特別是那些對(duì)酸、堿敏感的化合物。硅膠沒有酸堿性之分。（3）展開劑）展開劑在樣品組分吸附劑展開劑三個(gè)因素中。對(duì)一確定組分，樣品的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)可看作是一不變因素，吸附劑和展開劑是可變因素。而吸附劑的種類有限，因此選擇合適的展開劑就成為解決問題的關(guān)鍵。展開劑的

6、選擇有以下要求:（a）對(duì)待測(cè)組分有很好的溶解度。（b）能使待測(cè)組分與雜質(zhì)分開，與基線分離。（c）使展開后的組分斑點(diǎn)圓而集中，不應(yīng)有拖尾現(xiàn)象。（d）使待測(cè)組分的Rf值最好在0.4~0.5，如樣品中待測(cè)組分較多，Rf值則可在0.25~0.75范圈內(nèi)，組分間的Rf值最好相差0.1左右。由于薄層色譜法用途非常廣泛，國(guó)內(nèi)外均有現(xiàn)成的鋪有吸附劑的薄層板出售。一般實(shí)驗(yàn)室中也可自己制備。(e)不與組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，或在某些吸附劑存在下發(fā)生聚合。(f)具

7、有適中的沸點(diǎn)和較低的粘滯度。展開劑的極性是指與樣品組分相互作用時(shí)。展開劑分子與吸附劑分子的色散作用、偶極作用、氫鍵作用及介電作用的總和。展開劑要根據(jù)樣品的極性及溶解度，吸附劑活性等因素進(jìn)行選擇，總的原則是展開劑的極性能使組分的Rf值在0.5左右。常用溶劑極性次序是：石油醚環(huán)己烷苯乙醚氯仿乙酸丁酯正丁醇丙酮乙醇甲醇。如一種溶劑不能充分展開，可選用二元或多元溶劑系統(tǒng)。4展開槽與展開：展開槽與展開：薄層的展開在密閉的容器即展開槽或稱為層析缸中

8、進(jìn)行。展開：展開：合適的展開劑用量為浸及下端硅膠，但不浸及樣點(diǎn)；點(diǎn)樣端向下，每次只展開一塊，放在正中，以免爬斜（進(jìn)而展開傾斜）。5顯色：顯色：如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點(diǎn)。如果本身無(wú)色，可先在紫外燈光下觀察有無(wú)熒光斑點(diǎn)（有苯環(huán)的物質(zhì)都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點(diǎn)的位置；對(duì)于在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點(diǎn)（因?yàn)樵S多化合物都能和碘成黃棕色斑點(diǎn)），顯色后，立即用鉛筆標(biāo)出斑點(diǎn)的位置。常用普適性顯色