異煙肼片及葡萄糖注射液的鑒別

1、藥物分析實驗,,目錄,第一部分：藥物分析實驗?zāi)康募耙蟮诙糠郑簩嶒炓?、異煙肼片及葡萄糖注射液的鑒別、雜質(zhì)檢查 和含量 測定實驗二、阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測定實驗三、復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量測定實驗四、三種中藥制劑中黃芩的鑒別實驗五、高效液相色譜法測定天麻藥材的天麻素含量,1,藥物分析實驗概述及要求,藥物分析是一門綜合性的應(yīng)用學(xué)科。藥物分析實驗是藥物分析課程的重要組成部分，是理論聯(lián)系實際的重要環(huán)節(jié)。,加深學(xué)生

2、對藥物分析基本理論與概念的理解培養(yǎng)學(xué)生具有研究藥品質(zhì)量的基本思路和方法獲得從事藥品質(zhì)量分析研究與檢驗的基本操作技能,學(xué)生應(yīng)達到以下要求：,1.全面了解藥物分析工作的程序及各環(huán)節(jié)的要求。2 .掌握藥物分析常用方法的原理及操作技術(shù)。3.能運用本課程基本理論及有關(guān)專業(yè)知識分析和解決 實驗中的問題。4.培養(yǎng)實事求是的科學(xué)態(tài)度和嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真的工作作風(fēng)。,實驗要求,學(xué)生實驗前必須預(yù)習(xí)，明確實驗?zāi)康?，了解實驗?nèi)容與方法

3、，考慮實驗中應(yīng)注意的事項及安排實驗的進程。實驗中應(yīng)認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察實驗現(xiàn)象并加以分析，作好原始記錄，認(rèn)真分析實驗結(jié)果，力求做出準(zhǔn)確可靠的結(jié)論。應(yīng)遵守課堂紀(jì)律和實驗室規(guī)則，注意安全、保持整潔。,實驗報告的寫作方法及要求,寫作方法結(jié)構(gòu)完整、條理分明、文字簡練、書寫工整、措辭注意科學(xué)性和邏輯性，盡量使用科學(xué)術(shù)語。,,實驗題目 突出實驗的主要內(nèi)容實驗?zāi)康?言簡意賅的說明實驗預(yù)期達到的結(jié)果實驗藥品及儀器實驗方法

4、 按照實驗教材上的步驟以及自己 實際操作的步驟書寫（原始記錄）實驗結(jié)果與討論 實驗報告最重要的部分，包括實驗原始記錄及實驗后進過歸納的結(jié)果思考題,原始記錄,實驗環(huán)境：日期、室溫、濕度實驗藥品：實驗方法：稱量記錄 滴定記錄實驗現(xiàn)象：顏色 氣泡 渾濁 沉淀實驗記錄本 尊重實驗事實及時做好完整確切的記錄 鋼筆或圓珠筆書寫 字體端正 （手上 紙條 其他本子上 不能再腦子里暫記）

5、記錄有誤 不能涂改 雙線劃去,,實驗討論：應(yīng)針對實驗所觀察的現(xiàn)象與結(jié)果，聯(lián)系課堂講授的理論知識進行分析和討論，切不可離開實驗結(jié)果去空談理論，抓住重點。判斷實驗結(jié)果是否為預(yù)期的，如果非預(yù)期應(yīng)分析其可能的原因，應(yīng)指出實驗中的不足和存在的問題。,,實驗結(jié)論（1）結(jié)論包括：檢驗依據(jù) 檢驗結(jié)果（2）全項檢驗或部分項目檢驗結(jié)論1.本品按《 》檢驗，結(jié)果符合規(guī)定（或不符合規(guī)定）2.本品按《 》檢驗上述項目，結(jié)果

6、符合規(guī)定（只檢驗少數(shù)項目）3.本品按《 》檢驗，除xxxx項未檢外，其他項目符合規(guī)定,如：阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測定,一、實驗?zāi)康?. 掌握水楊酸類藥物的鑒別反應(yīng)實驗原理。2. 掌握比色法檢查阿司匹林片劑中游離水楊酸的實驗原理。3. 掌握兩步滴定法測定阿司匹林片劑中藥物含量的實驗原理。 二、實驗原理（按以下三部分內(nèi)容書寫，不必拘泥于講義，簡煉、準(zhǔn)確說明原理）1. 阿司匹林腸溶片鑒別的原理： 2. 游離水

7、楊酸雜質(zhì)限量檢查原理：3. 阿司匹林腸溶片中阿司匹林的含量測定原理：,,11,三、主要器材（寫所用藥品信息與最主要的儀器） 1 阿司匹林腸溶片的信息：生產(chǎn)廠家、規(guī)格、生產(chǎn)批號、生產(chǎn)日期、有效期2 試劑： 名稱 規(guī)格 2主要儀器：如分析天平、納氏比色管、容量瓶、酸式滴定管、堿式滴定管、滴定臺、水浴鍋等。,四、實驗方法（按以下三部分內(nèi)容書寫，不能照抄講義，按實際操作情況書寫）1. 阿司匹林腸溶片鑒別的操作：2. 游離水楊酸

8、雜質(zhì)限量檢查的操作：3. 阿司匹林腸溶片中阿司匹林含量測定的操作：,五、結(jié)果與分析（按以下四部分內(nèi)容書寫）,1. 阿司匹林腸溶片的鑒別結(jié)果：即說明樣品管的變色情況。2. 游離水楊酸雜質(zhì)限量檢查的結(jié)果：即說明樣品管與對照管的顏色深淺情況。,3. 腸溶片中阿司匹林含量測定的結(jié)果與分析： 測定數(shù)據(jù)：V0 =？；V = ？ 結(jié)果計算：要求將各實驗數(shù)據(jù)代入下列公式，計算出阿司匹林腸溶片的標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)。 （誤差較大的計算結(jié)

9、果，即標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)不在90%-110%范圍內(nèi)的結(jié)果，需要認(rèn)真分析說明結(jié)果誤差較大的原因4. 通過鑒別、檢查及含量測定實驗得出完整的結(jié)論：（如本品為阿司匹林腸溶片, 雜質(zhì)游離水楊酸的量低于限量，阿司匹林的含量與藥品標(biāo)示量基本一致。本品為合格產(chǎn)品。）,14,實驗類型與學(xué)時要求,1.實驗類型：驗證性實驗 設(shè)計性實驗2.實驗學(xué)時：30學(xué)時 五次實驗3.教學(xué)方式：集中授課，分小組實驗,藥物分析實驗,實驗一：異煙肼的雜質(zhì)檢

10、查和異煙肼片的含量測定,,,1 實驗?zāi)康?,,2 實驗原理,,,3 儀器與試劑,,,4 實驗步驟,,,5 實驗結(jié)果,,,6 注意事項,,,7 思考題,,,17,,,,1,2,掌握薄層色譜檢查雜質(zhì)的實驗原理和操作技能。,掌握溴酸鉀法測定異煙肼含量測定原理和操作方法。,,18,1.游離肼的

11、檢查異煙肼是一種不穩(wěn)定的藥物，可能會在制備時由原料引入游離肼，或在貯藏過程中降解產(chǎn)生游離肼.肼是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，因此應(yīng)對其進行限量檢查。本實驗采用薄層色譜法檢查，利用藥物與雜質(zhì)利用異丙醇-丙酮（3 : 2）下展開后，肼能與對二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成腙顯色，進行比較檢查。,2.實驗原理,2.片劑的含量測定異煙肼結(jié)構(gòu)中的酰肼基團具有還原性，在強酸性介質(zhì)中可與溴酸鉀定量反應(yīng)，反應(yīng)式如下：,,3.實驗材料、試劑及儀器,,,,,試

12、劑,異煙肼片、硫酸肼、異丙醇、丙酮、乙醇、對二甲基苯甲醛、甲基橙、鹽酸、溴酸鉀等,,,,,儀器,分析天平、容量瓶、酸式滴定管、滴定臺、硅膠G薄層板、點樣毛細(xì)管、層析缸等,4.實驗步驟,,1.異煙肼中游離肼雜質(zhì)檢查取本品，加水制成50 mg/ml的異煙肼水溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1 ml中約含有0.20 mg（相當(dāng)于游離肼50 µg）的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法，吸取供試品溶液10 µ

13、l和對照品溶液2 µl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇-丙酮（3 : 2）為展開劑，展開，晾干，噴以乙醇制的對-二甲氨基苯甲醛試液，放置15分鐘后檢視。在供試品溶液主斑點前方與對照品溶液主斑點相應(yīng)位置，不得顯黃色斑點。,4.實驗步驟,2.異煙肼片的含量測定 取異煙肼片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于異煙肼0.2 g），置于100 ml容量瓶中，加水適量，振搖使異煙肼溶解并稀釋至刻度，搖勻.用干燥濾紙濾

14、過，精密量取續(xù)濾液25 ml，加水50 ml，鹽酸20 ml與甲基橙指示劑1滴，溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）緩緩滴定（溫度保持在18~25℃）至粉紅色消失.每1 ml溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于3.429 mg的C6H7N3O。,5.結(jié)果與分析,1. 游離肼的檢查：薄層色譜示意圖如右圖所示，待展開結(jié)束顯色后，供試品溶液中異煙肼主斑點呈橙黃色，對照品溶液中游離肼主斑點呈鮮黃色，且游離肼的比移值大于異煙肼

15、的比移值。觀察在供試品溶液主斑點前方與對照品溶液主斑點相應(yīng)位置，是否顯示鮮黃色斑點?？芍悷熾缕杏坞x肼的含量是否低于藥典規(guī)定的限量。,5.結(jié)果與分析,2. 異煙肼片的含量測定：,,上式中，F(xiàn)為濃度校正因數(shù)，本實驗中指溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）的濃度校正因數(shù)；T為溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）對異煙肼的滴定度；V為供試品消耗滴定液的體積數(shù)；W平均為藥片的平均片重；W總為稱取的藥品細(xì)粉重量；稀釋倍數(shù)為配置的藥品

16、體積是量取的續(xù)濾液體積的倍數(shù)；標(biāo)示量為片劑“規(guī)格”項下的標(biāo)示值(mg)。,中國藥典（2010版）規(guī)定，本品含異煙（C6H7N3O）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0-105.0%。,6.注意事項,,,,,異煙肼片溶液過濾前需充分振搖，使其完全溶解。,過濾用的漏斗、燒杯必須干燥，并棄去初濾液。,滴定過程中指示劑褪色不可逆，滴定過程中必須充分振搖，避免滴定劑局部過濃造成指示劑以前褪色。,,雜質(zhì)檢查過程中供試品和對照品點樣后，須待斑點干燥后方可放入層析缸

17、進行展開。,7.思考題,甲基橙指示劑如何判斷滴定終點？,一. 實驗?zāi)康?葡萄糖注射液的分析,1.掌握注射液性狀，雜質(zhì)檢查以及含量測定的方法。 2.掌握剩余碘量法測定含量的方法。,二. 實驗原理,葡萄糖注射液的分析,1. 鑒別（Fehling反應(yīng)）葡萄糖分子中的醛基可以將 Fehling試劑（堿性酒石酸銅試液）還原，生成了氧化亞銅磚紅色沉淀，用于葡萄糖的定性鑒別。,葡萄糖注射液的分析,紅色沉淀,2. 含量測定（碘量法）

18、碘在堿性溶液中可將葡萄糖氧化成葡萄糖酸，剩余的碘液用硫代硫酸鈉滴定液滴定。 具體原理見下：,葡萄糖注射液的分析,碘與NaOH作用可生成次碘酸鈉(NaIO)，葡萄糖(C6H12O6)能定量地被次碘酸鈉(NaIO)氧化成葡萄糖酸(C6H12O7)。在酸性條件下，未與葡萄糖作用的次碘酸鈉可轉(zhuǎn)變成碘(I2)析出，因此只要用Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定析出的I2，便可計算出C6H12O6的含量。其反應(yīng)如下：,葡萄糖注射液的分析,⒈ I2與Na

19、OH作用：I2＋2NaOH = NaIO＋NaI＋H2O ⒉ C6H12O6和NaIO定量作用：C6H12O6＋NaIO = C6H12O7＋NaI ⒊ 總反應(yīng)式：I2＋C6H12O6＋2NaOH = C6H12O7＋2NaI＋H2O⒋ C6H12O6作用完后，剩下未作用的NaIO在堿性條件下發(fā)生歧化反應(yīng)：3NaIO = NaIO3＋2NaI⒌ 在酸性條件下：NaIO3＋5NaI＋3H2SO4 = 3I2＋3Na2SO4＋3H

20、2O⒍ 析出過量的I2可用標(biāo)準(zhǔn)Na2S2O3溶液滴定：I2＋2Na2S2O3 = Na2S4O6＋2NaI,葡萄糖注射液的分析,三.實驗方法鑒別取本品，緩緩滴入溫?zé)岬膲A性酒石酸銅試液中，即生成氧化亞銅的紅色沉淀。,葡萄糖注射液的分析,2. 檢查（1）pH值 應(yīng)為3.2 ~5.5。（2）5-羥甲基糠醛 精密量取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖1.0 g），置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，在284 nm 的波長

21、處測定，吸收度不得大于0.32。,葡萄糖注射液的分析,3. 含量測定（剩余碘量法） 精密量取本品適量0.5 ml(約相當(dāng)于葡萄糖50 mg)，置碘瓶中，加蒸餾水10ml，精密加入碘滴定液（0.05 mol/L）10 ml，分四次加入0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液20 ml，每次5 ml，每次加入時密塞振搖約10 s，加完后密塞，暗處放置10 min，加稀硫酸2 ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定至近終

22、點（呈微黃色），加淀粉指示劑1 ml，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1 m1碘滴定液（0.05 mol/L）相當(dāng)于9.908 mg的葡萄糖(C6H12O6.H2O)。,葡萄糖注射液的分析,中國藥典（2010版）規(guī)定，本品為葡萄糖或無水葡萄糖的滅菌水溶液，含葡萄糖（C6H12O6·H2O）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0~105.0%。,葡萄糖注射液的分析,四. 實驗結(jié)果與討論 記錄各項實驗結(jié)果，并針對實驗結(jié)果

23、和實驗過程中的特殊現(xiàn)象進行討論。 0.5 ml的10%葡萄糖注射液相當(dāng)于50 mg的葡萄糖（C6H12O6·H2O），應(yīng)消耗碘滴定液（0.05 mol/L）體積為： 允許5％的誤差，碘消耗體積應(yīng)該為5.05 ml ± 5%，即為4.80~5.30 ml。,,葡萄糖注射液的分析,五.思考與分析寫出剩余碘量法的化學(xué)方程式。碘量法的誤差有哪些?如何避免？,葡萄糖注射液的分析,附注：

24、1. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L） 取硫代硫酸鈉約26 g與無水碳酸鈉（Na2CO3）0.20g，加新沸過的冷水適量使溶解成1000 ml，搖勻，放置１個月后濾過。,葡萄糖注射液的分析,2. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）標(biāo)定 取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0.15g，精密稱定，置碘量瓶中，加水50ml使溶解，加碘化鉀2g，輕輕振搖使溶解，加稀硫酸40ml，搖勻，密塞，暗處放置10分鐘，用水250ml稀釋，用本

25、液滴定至近終點時，加淀粉指示液3ml，繼續(xù)滴定至藍色消失而顯亮綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于4.903 mg的重鉻酸鉀，根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸鉀的取用量算出本液的濃度，即得。,葡萄糖注射液的分析,實驗二：阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測定,,一、實驗?zāi)康?. 掌握水楊酸類藥物的鑒別反應(yīng)實驗原理。2. 掌握比色法檢查阿司匹林片劑中游離水楊酸的實驗原理。3. 掌握兩步滴定法測定阿

26、司匹林片劑中藥物含量的實驗原理。,42,二、實驗操作及原理,1. 鑒別原理 ：阿司匹林加熱水解后導(dǎo)致游離水楊酸產(chǎn)生，水楊酸及其鹽在中性或弱酸性條件下（pH值4.0-6.0），可以用三氯化鐵溶液鑒別。操作：取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g），加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1 滴，即顯紫堇色。,43,,2. 雜質(zhì)檢查：游離水楊酸含有酚羥基，可與高鐵鹽反應(yīng)顯紫堇色，因此，將適量阿司匹林供試品溶液與一定量水楊酸對照品

27、溶液生成的色澤對比，即可控制阿司匹林中游離水楊酸的含量（比色法）。,44,二、實驗操作及原理,二、實驗操作及原理,檢查（游離水楊酸）取本品5 片，研細(xì)，用乙醇30 ml分次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾過，精密量取濾液6 ml，置50 ml納氏比色管中，用水稀釋至50 ml，立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液3ml（硫酸鐵銨溶液配置：取1 mol/L鹽酸溶液1ml，加硫酸鐵銨指示液2 ml后再加水適量使成

28、100 ml），搖勻。30秒鐘內(nèi)如顯色，與對照液（精密量取0.01％水楊酸溶液4.5 ml，加乙醇3 ml，0.05％酒石酸溶液1 ml ，用水稀釋至50 ml，再加上述新制的稀硫酸鐵銨溶液3ml，搖勻）比較，不得更深(1.5％)。,45,3. 含量測定：通過兩步滴定法完成，由于阿司匹林中存在酸性的穩(wěn)定劑，所以不能用氫氧化鈉直接滴定，必須使用兩步滴定法。首先用氫氧化鈉滴定液中和制劑中其它的酸性物質(zhì)和阿司匹林上游離的羧酸：,46,二、

29、實驗操作及原理,,3. 含量測定 取本品40片，研細(xì)，用中性乙醇70 ml，分?jǐn)?shù)次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振搖，再用水適量洗滌研缽數(shù)次，洗液合并于100 ml量瓶中，再用水稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取濾液10 ml（相當(dāng)于阿司匹林0.3 g），置錐形瓶中，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）20 ml，振搖，使阿司匹林溶解。加酚酞指示液3 滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）至溶液顯粉紅色。,47,二、實驗

30、操作及原理,二、實驗操作及原理,然后在加入過量的氫氧化鈉滴定液，加熱水解，氫氧化鈉中和水解所產(chǎn)生的醋酸，然后用硫酸回滴，測得中和醋酸所消耗的氫氧化鈉的量。該消耗量和阿司匹林的摩爾比為1:1。,48,,再精密加氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）40 ml，置水浴上加熱15分鐘并時時振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液（0.05 mol/L) 滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml 氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于18.02

31、mg C9H8O4。,49,二、實驗操作及原理,四、計算,片劑按標(biāo)示量計算的百分含量定義是：上式中，V0和V分別為空白試驗和樣品試驗時消耗硫酸滴定液的體積（ml）；F為硫酸滴定液濃度（0.05mol/L）校正因數(shù)；T為氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的滴定度；W為供試品片粉的稱取量（g）； W為平均片重（g）；標(biāo)示量為片劑“規(guī)格”項下的標(biāo)示值（mg）。,50,,,,五、實驗結(jié)果與討論記錄鑒別、檢查和含量測定的結(jié)果，

32、并對其討論。,51,六、思考題1）請寫出阿司匹林腸溶片含量測定中含量的計算公式。2）含量測定中為什么要在水浴上加熱。,實驗三復(fù)方磺胺甲噁唑片的質(zhì)量分析,實驗?zāi)康?1、熟悉復(fù)方制劑雙波長計算分光光度法測定含量的原理。2、掌握復(fù)方磺胺甲噁唑片實驗的操作條件及原理。,實驗儀器與試劑,儀器：全波長可見—紫外分光光度儀、可見—紫外分光光度儀、層析缸試劑：磺胺甲噁唑、甲氧芐啶、乙醇、氫氧化鈉、鹽酸、氯化鉀、氯仿、甲醇、二甲基甲酰胺,實驗內(nèi)

33、容,雙波長分光光度法：測定復(fù)方磺胺甲噁唑片（ChP）。不經(jīng)分離，直接測定含量主要成分：磺胺甲噁唑（SMZ）、甲氧芐啶（TMP）測定方法：定量依據(jù)：樣品在測定波長（λ2）和參比波長（λ1） 處的吸收度的差（ΔA）。如測磺胺甲噁唑時，甲氧芐啶在兩個波長下的吸光度的差為0.,復(fù)方磺胺甲噁唑的含量測定,波長的選擇：被測組分的最大吸收波長作為測定波長（λ2） ，另選一參比波長（λ1），使干擾組分在這兩個波長處的吸收相等。,1、原理,設(shè)

34、樣品在λ２和λ１處的吸光度分別為Ａ２和Ａ１，測定組分（為1）在λ２和λ１處的吸光度分別為 和 ，干擾組分（為2）在此二波長處的吸收度分別為 和 。,,,從以上的推導(dǎo)可以看出，用△A作為定量的依據(jù)，可以消除干擾組分的干擾；又由于在一定條件下，△E為一常數(shù)，所以△A和濃度（C）有線性關(guān)系，因此可以用對照品比較法測定藥物的含量。,測定原理： 設(shè)A與B的混合物，A為干擾物，B為被測物

35、在λ1處，A1 = A1A + A1B 在λ2處， A2= A2A + A2B A1A = A2A ΔA = A2 - A1 =（A2A + A2B）- （ A1A + A1B ） = A2B - A1B,從以上的推導(dǎo)可以看出，用△A作為定量的依據(jù)，可以消除干擾組分的干擾；,1、TMP（找到具有等

36、吸收的波長λ１ ）2、SMZ（在波長λ１和 λ2 處測量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的A，并求差值△Ar）3、SMZ+TMP（在波長λ１和 λ2 處測量供試品的A，并求差值△Ax）,SMZ λ2=257nm， λ1=304nm,SMZ的紫外吸收光譜,甲氧芐啶（TMP）的紫外吸收光譜,,61,TMP λ2=239nm， λ1=295nm,1、SMZ（找到具有等吸收的波長λ１ ）2、TMP（在波長λ１和 λ2 處測量標(biāo)

37、準(zhǔn)物質(zhì)的A，并求差值△Ar）3、SMZ+TMP（在波長λ１和 λ2 處測量供試品的A，并求差值△Ax）,又由于在一定條件下，△E為一常數(shù)，所以△A和濃度（C）有線性關(guān)系，因此可以用對照品比較法測定藥物的含量。因為對照品和供試品配置的體積相等，所以：,,,計算公式,計算公式,,式中，△AX為供試品溶液稀釋液的吸光度差值； △AR為對照品溶液稀釋液的吸光度差值； mR為SMZ對照品的稱量（mg）

38、 m為樣品的稱量（g）； 為平均片重（g/片）。,測定磺胺甲噁唑片中的磺胺甲噁唑時，因為在257nm處，磺胺甲噁唑有最大吸收,甲氧芐啶吸收較小，并在304nm波長附近有一等吸收點，故選擇257nm為測定波長（λ2），在304nm波長附近選擇等吸收波長為參比波長（λ1）。測定甲氧芐啶時，在239nm處甲氧芐啶有較大吸收、磺胺甲噁唑吸收較小，且在295nm波長附近有一等吸收點，故選擇239nm作為甲氧芐啶的測定波長，在2

39、95nm波長附近作為參比波長。,,精密稱取在105℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑?qū)φ掌?0mg與甲氧芐啶對照品10mg，分別置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別作為對照品溶液(1) 與對照品溶液(2),2、對照品溶液的配制,3、供試品母液的制備,取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于磺胺甲噁唑50mg與甲氧芐啶10mg），置100ml 量瓶中，加乙醇適量，振搖15分鐘使磺胺甲噁唑與甲氧芐啶溶解，加乙醇稀釋至刻

40、度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品母液。,稀釋液的配制：精密量取供試品母液與對照品溶液(1)、(2)各1ml ，分別置50ml量瓶中，各加0.4％氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。參比波長和測定波長的確定：照分光光度法，取對照品溶液(2)的稀釋液，以257nm 為測定波長（λ2 ），在304nm 波長附近（每間隔0.5nm ）選擇等吸收點波長為參比波長（λ1 ），要求△Ａ＝Ａλ2 －Ａλ1 ＝0 。樣液的測定：再在λ2 與λ1 波

41、長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照品溶液(1) 的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（△Ａ）計算，即得。,4、磺胺甲噁唑稀釋液的配制和測定,稀釋液的配制： 精密量取上述供試品母液與對照品溶液(1)、(2)各2.5ml,分別置50ml 量瓶中，各加鹽酸－氯化鉀溶液〔取0.1mol/L鹽酸溶液75ml與氯化鉀6.9g，加水至1000ml，搖勻〕稀釋至刻度，搖勻，即得。參比波長和測定波長的確定：照分光光度法取對照品溶液(1) 的稀釋液，

42、以239.0nm 為測定波長（λ2 ），在295nm 波長附近（每間隔0.2nm ）選擇等吸收點波長為參比波長（λ1 ），要求△Ａ＝Ａλ2-Ａλ1 ＝0 ，樣液的測定：再在λ2 與λ1 波長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照品溶液(2) 的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（△Ａ），計算，即得。,5、甲氧芐啶稀釋液的配制和測定,實驗注意事項,注意取樣量的換算注意配制稀釋液的溶劑測定時，參比溶液不得混淆，比色皿一定要清洗干凈注意

43、確定參比波長的方法,討論與思考題,1、分別說明本品中磺胺甲噁唑和甲氧芐啶雙波長法測定含量時波長選擇的依據(jù)。2、為何甲氧芐啶含量測定時供試液的稀釋倍數(shù)與磺胺甲噁唑測定時的要不同？,實驗四 三種中藥制劑中黃芩的鑒別,三種中藥制劑中黃芩的鑒別,一、實驗?zāi)康模毫私夂驼莆罩兴幹苿┑奶崛》椒私夂驼莆毡由V法在中藥成分鑒別的應(yīng)用,72,,薄層色譜法是中藥鑒別的主要方法，是快速分離和定性分析的一種重要實驗技術(shù)，它是依據(jù)吸附力與分配系數(shù)的不同

44、，使混合物得以分離。薄層色譜層析操作方便，設(shè)備簡單，顯色容易，展開速度快，混合物易分離，分辨力高。,黃芩苷,黃芩苷的分子式為C21H18O11， 分子量為446.35。理化性質(zhì)：本品為淡黃色結(jié)晶粉末。熔點：223℃，淡黃色細(xì)針晶（甲醇），熔點：223~225℃。藥理作用主要有抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)作用；保肝利膽作用；降壓、利尿、鎮(zhèn)靜、解熱作用；醛糖還原酶抑制作用。臨床主要用于傳染性肝炎，急性膽道感染，鉛中毒，清熱解毒，胸悶嘔惡，肺熱咳嗽，腫瘤

45、瘡毒，胎動不安。常見的不良反應(yīng)有注射級藥除個別人會出現(xiàn)胃部不適與腹瀉外，無明顯不良反應(yīng)。,73,牛黃解毒片、三黃片、雙黃連口服液、黃芩藥材中均含有黃芩苷。,三、實驗操作,74,（1）牛黃解毒片取本品4片，研細(xì)，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，棄去乙醚，濾渣置水浴上揮盡乙醚，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，濾過。濾液蒸干，殘渣加水20ml，加熱使溶解，滴加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，加醋酸乙酯30ml提取，分取醋酸乙醋液。

46、蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。,,（2）三黃片取本品5片,除去糖衣，研細(xì)，加甲醇30ml，加熱回流提取30分鐘，放冷，濾過,濾液作為供試品溶液，蒸干。殘渣加水15ml攪拌使溶解,濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，用醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合并提取液，蒸干。殘渣加甲醇1ml使溶解,作為供試品溶液。,75,,（3）雙黃連口服液：取本品1ml,加75%乙醇溶液5ml，搖勻，作為供試品溶液（4）對照黃

47、芩藥材： 取本品粉末50g，加甲醇1000ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇50ml使溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作為供試品溶液。（5）黃芩苷對照品 黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。,76,薄層色譜法,首先，將小的硅膠G板，取三塊，活化30分鐘，然后在每一塊板子上點入黃芩對照藥材提取液，黃芩苷對照品溶液，以及上述三種制劑中的一種。每一種溶液吸取各5μl（約

48、6cm），分別點于同一以含4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)為展開劑，預(yù)平衡30分鐘，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液。,77,,供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗綠色斑點。然后使用購置的薄層板，在其上點入五種溶液，照上面操作察看結(jié)果。,78,,四、實驗結(jié)果與討論繪制薄層檢查結(jié)果示意圖，并