人用單克隆抗體質量控制技術指導原則

1、人用單克隆抗體質量控制技術指導原則人用單克隆抗體質量控制技術指導原則本要點適用于供治療的體內診斷用的利用雜交瘤技術制備的單克隆抗體，適用于在人體內應用的利用重復DNA技術制備的基因工程抗體一、雜交瘤技術制備的單克隆抗體（一）雜交瘤細胞1親本細胞（1）骨髓瘤細胞SP20或其他適宜的骨髓瘤細胞系。應為不合成或不分泌免疫球蛋白鏈型，具有符合骨髓瘤細胞的染色體特征，并有明確的來源歷史及符合要求的保存條件。（2）免疫親代細胞經抗原免疫的鼠脾B淋巴

2、細胞或外周血B淋巴細胞。應有明確的免疫原來源、性質及動物種系，免疫原詳細的制備過程。適宜的免疫方案及免疫淋巴細胞制備的方法。2細胞融合與克隆化采用適宜的方法進行融合、篩選及克隆化。3雜交瘤細胞檢定（1）抗體分泌穩(wěn)定性連續(xù)克隆化后抗體陽性率達100%，經體外連續(xù)傳代3個月以上和反復凍存、復蘇，細胞系能保持穩(wěn)定分泌特異性抗體。（2）細胞核學特征檢查細胞分裂中期染色體，應符合雜交瘤細胞特征。4鼠源病毒檢查按附錄要求檢測鼠源病毒。5支原體檢查按

3、現行《中國藥典》生物制品無菌試驗規(guī)程進行。6無菌試驗按現行《中國藥典》生物制品無菌試驗規(guī)程進行。下主細胞庫來自原始細胞庫、工作細胞庫來自主細胞庫。各級細胞庫應有詳細的制備過程、檢定情況及管理規(guī)定等。四、單抗生產包括用小鼠腹水法和細胞培養(yǎng)法制備。（一）小鼠腹水法1小鼠制備腹水必需使用合格的SPF級BACBC小鼠或BACBC和瑞士小鼠雜交子一代。2動物實驗設施動物實驗設施應有相關部門頒發(fā)的二級以上合格證。3腹水制備取適量擴增培養(yǎng)的雜交瘤細胞

4、注射小鼠腹腔制備腹水，小鼠可以預先用液體石蠟或降植烷等處理。（二）細胞培養(yǎng)法可以采用發(fā)酵罐培養(yǎng)，亦可用細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)收集上清液制備單克隆抗體。培養(yǎng)基用無牛血清或低牛血清培養(yǎng)基，不能用內酰胺類抗生素。（三）抗體純化可采用鹽析法、分子篩層析、離子交換親和層析等適宜的方法。1盡可能選用一些不引起免疫球蛋白聚合、變性等的純化方法及條件。2應驗證所用的純化方法能去除可能存在的非目標產物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、用于生產腹水抗體的