7酵母菌觀察

1、酵母菌的形態(tài)觀察和子囊孢子的觀察酵母菌的形態(tài)觀察和子囊孢子的觀察作者：李東方學(xué)號200900140049系年級：09級生科一班指導(dǎo)老師：錢衛(wèi)日期：2010.11.15實驗地址：山東大學(xué)生北308一、一、目的要求目的要求1.進一步學(xué)習(xí)并掌握光學(xué)顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用方法；2.觀察并掌握酵母菌的細胞形態(tài)及其子囊、子囊孢子和假菌絲的形態(tài)；3.學(xué)習(xí)并掌握鑒別酵母菌細胞死活的方法；4.了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌絲觀察的壓片培養(yǎng)法。二、

2、二、實驗材料實驗材料1.菌種：釀酒酵母（Sacomycescerevisiae）、2.染色液：0.1％美藍染色液、孔雀綠染色液、95％乙醇等3.其他：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、吸水紙等三、三、基本原理基本原理酵母菌是不運動的單細胞真核微生物，其大小通常比常見的細菌大幾倍甚至幾十倍，因此，不必染色即可用顯微鏡觀察其形態(tài)。大多數(shù)酵母以出芽方式進行無性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌綱中的酵母菌在一定條件下，可產(chǎn)生子囊孢子進行有性生殖。美藍是

3、一種弱氧化劑，氧化態(tài)呈藍色，還原態(tài)呈無色。用美藍對酵母細胞進行染色時，活細胞由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能將美藍由籃色的氧化態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色的還原態(tài)型，從而細胞呈無色；而死細胞或代謝作用微弱的衰老細胞則由于細胞內(nèi)還原力較弱而不具備這種能力，從而細胞呈藍色，據(jù)此可對酵母菌的細胞死活進行鑒別。四、四、操作步驟操作步驟1.鑒別酵母菌細胞死活美藍染色鑒別酵母菌細胞死活美藍染色1）染色：無菌環(huán)境下，在干凈的載玻片中央加一小滴適宜

4、濃度的釀酒酵母液體培養(yǎng)物，加一小滴0.1%美藍染色液，然后再從側(cè)面蓋上蓋玻片，（注意染色液和菌液不宜過多或過少，并應(yīng)基本等量）。2）鏡檢：將制好的染色片置于顯微鏡的載物臺上，放置約3min后進行鏡檢，先用低倍鏡，后用高倍鏡進行觀察，根據(jù)細胞顏色區(qū)分死細胞（藍色）和活細胞（無色），并進行記錄。3）比較：染色約30min后再次進行觀察，注意死細胞數(shù)量是否增加。2.子囊孢子的染色與觀察子囊孢子的染色與觀察1）制片：在潔凈載玻片的中央滴一小滴蒸

5、餾水，用接種環(huán)于無菌條件下挑取少許菌至水滴上，涂布均勻，在酒精燈火焰上熱固定（水和菌均不要太多，涂布時應(yīng)盡量涂開，否則將造成干燥時間長；熱固定溫度不宜太高，以免使菌體變形）。2）染色：滴加數(shù)滴孔雀綠染色液，11.5min后水洗；加95%乙醇脫色30s，水洗；最后用番紅染液復(fù)染30s1min，水洗，干燥。3）鏡檢：將染色片置于顯微鏡的載物臺上，先用低倍鏡，后用高倍鏡進行觀察，子囊孢子呈綠色，菌體和子囊呈粉紅色。注意觀察子囊孢子的數(shù)目、形狀

6、，并進行記錄。五、五、實驗結(jié)果實驗結(jié)果1.酵母菌的形態(tài)觀察和鑒別酵母菌細胞死活1）3min后2)30min后出芽生殖出芽生殖死亡菌種占20%死亡菌種占50%細胞類型活細胞死細胞顏色透明藍色時間細胞總數(shù)活細胞數(shù)死細胞數(shù)死細胞百分數(shù)3Min36341233.3%30min87325563.2%2.子囊孢子的染色與觀察酵母菌的子囊孢子菌體和子囊子囊孢子菌體和子囊顏色藍綠色紅色六小結(jié)這次實驗掌握了光學(xué)顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用方法，并觀察并掌握