分子生物學(xué)遺傳信息的的復(fù)制

1、第四章 遺傳信息的的復(fù)制,1,基因組復(fù)制的四種形式：,DNA復(fù)制DNA by RNA中間體復(fù)制（少數(shù)DNA病毒）RNA復(fù)制 （RNA病毒）RNA by DNA 中間體復(fù)制（逆轉(zhuǎn)錄病毒， 真核生物端粒DNA）,,2,第一節(jié) DNA復(fù)制（replication）,以親代DNA為模板合成子代DNA的過程,一、復(fù)制特點(diǎn),1、起始點(diǎn)和方向,（1）復(fù)制起始點(diǎn)（origin of replic

2、ation，ori）：,原核生物 只有一個(gè).真核生物有多個(gè).,,(2) 方向:,單向復(fù)制: 從兩個(gè)起點(diǎn),以反向單一方向復(fù)制 從一個(gè)起點(diǎn)以同一方向復(fù)制雙向復(fù)制: 從一個(gè)起點(diǎn),以兩個(gè)相反方向復(fù)制.,,,P52,3,2.復(fù)制的方式,（1）半保留復(fù)制(semi-conservative replication),（2）半不連續(xù)復(fù)制(semi-discontinuous replication ),DNA 聚合酶只能以5

3、＇?3＇方向催化合成,前導(dǎo)鏈(leading strand) 后隨鏈(lagging strand) :崗崎片段,4,5,(3)基本過程:,復(fù)制的起始 DNA鏈的延長(zhǎng) 復(fù)制的終止,,具體:,DNA解旋、解鏈 RNA引物合成 DNA鏈的延長(zhǎng)

4、 切除引物、填補(bǔ)缺口 切除和修復(fù)錯(cuò)配堿基,,小電影,6,岡奇片段中引物的切除,7,8,二、原核生物DNA的復(fù)制,（一）參與復(fù)制的酶與蛋白質(zhì),30多種酶與pr參與,1、DNA聚合酶（DNA polymerase，DNA pol）,作用：催化DNA合成，需Mg2+,大腸桿菌有三種：,A：聚合作用：5‘?3’，10nt/sec，20個(gè)nt后脫落

5、 B：3＇?5＇外切酶活性：校對(duì)功能 C：5‘?3’外切酶活性：參與RNA引物的切除、 修復(fù)作用,,DNA pol 1,(三種功能),,DNA pol 2,功能不清楚,DNA pol 3,真正的復(fù)制酶，10個(gè)亞基組成， 1000nt/sec，?5000 nt后脫落3＇?5＇外切酶活性：校對(duì)功能,,,9,2、引物酶：,DN

6、A pol只能延長(zhǎng)，不能從頭合成,需一小段RNA（RNA聚合酶（primase）催化完成）,3、解旋及解鏈的蛋白質(zhì),解鏈酶（DNA helicase）拓?fù)洚悩?gòu)酶（DNA topoisomerase，topo）單鏈結(jié)合蛋白（single strand DNA binding pr，SSB）,4、DNA連接酶(DNA ligase): 連接DNA分子中的缺口,需ATP.,10,11,(二)復(fù)制過程,1. 復(fù)制的起始:,起始復(fù)合物的形成

7、:,原核生物---大腸桿菌,oriC + DnaA pr（?局部解鏈）,引發(fā)前體形成 :,DnaA引導(dǎo)DnaB/ DnaC 進(jìn)入,解鏈酶解鏈:,DnaB是一種解鏈酶Topo2 打結(jié) SSB結(jié)合到單鏈,引物合成:,RNA引物合成酶,DNA pol 3 進(jìn)入復(fù)合體:,?亞基識(shí)別引物3＇－ＯＨ,,,,,,,,,,12,大腸桿菌oriC基因排列示意圖,,3個(gè)13bp 序列,,4個(gè)9bp序列，DnaA蛋白結(jié)合位點(diǎn),13,2、DNA鏈的延長(zhǎng)

8、,DNA pol 三個(gè)作用特點(diǎn)決定了DNA鏈延長(zhǎng)的特點(diǎn),必須以DNA為模板?DNA的復(fù)制為半保留復(fù)制 DNA pol 只能延長(zhǎng),不能從頭合成?需要RNA引物 合成方向只能5＇?3＇, ?半不連續(xù)復(fù)制,,3.復(fù)制的終止,一般無(wú)特殊的終止信號(hào) 到DNA分子末端or兩個(gè)復(fù)制叉相遇即終止,14,三、其他環(huán)狀DNA的復(fù)制,1、?復(fù)制:,環(huán)狀DNA在 ori處解鏈，兩條鏈分別作為模板進(jìn)行 復(fù)制。,15,2、滾環(huán)復(fù)

9、制,環(huán)狀DNA 一條鏈解開，以未解開的鏈為模板，在開鏈的3＇端不斷加上核苷酸。,16,http://news.39.net/txsdxbk/170427/5339014.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339010.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339008.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/53

10、39002.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338999.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338996.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338994.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338989.htmlhttp://news.39.net/tx

11、sdxbk/170427/5338971.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338969.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338966.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338917.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338916.htmlhttp:/

12、/news.39.net/txsdxbk/170427/5338913.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338909.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338906.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338901.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338

13、897.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338893.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338889.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338885.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338880.htmlhttp://news.39.net/txsd

14、xbk/170427/5338876.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338874.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338873.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338871.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5338869.html,3、D環(huán)復(fù)制:,

15、線粒體DNA的復(fù)制。,17,四、真核生物染色體DNA的復(fù)制,（一）復(fù)制起始點(diǎn)及方向： 多起點(diǎn)、雙向復(fù)制,18,（二）DNA pol ：,?：DNA鏈合成的引發(fā)?：鏈的延長(zhǎng) RNA引物空隙的填補(bǔ)?：外切酶活性?修復(fù)和校正 作用?：線粒體DNA復(fù)制,?、?、?、? 四種,,（三）末端復(fù)制與端粒酶,由端粒酶（telomerase）參與完成 逆轉(zhuǎn)錄酶（由RNA和蛋白質(zhì)組成）,19,合成過程（圖4-11）：,端粒

16、酶中RNA模板與DNA中的TG引物結(jié)合,端粒酶以RNA為模板在DNA末端聚合（加nt）,移位：DNA與RNA重新配對(duì),聚合,至于CA鏈的合成，目前不清楚,,,,20,21,http://news.39.net/txsdxbk/170427/5339166.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339155.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/533915

17、2.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339142.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339136.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339117.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339111.htmlhttp://news.39.net/txsdxb

18、k/170427/5339104.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339100.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339094.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339090.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339079.htmlhttp://new

19、s.39.net/txsdxbk/170427/5339076.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339070.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339066.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339065.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339059.

20、htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339056.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339053.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339048.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339042.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/

21、170427/5339035.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339032.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339031.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339029.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339025.htmlhttp://news.

22、39.net/txsdxbk/170427/5339021.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339018.html,真核復(fù)制與原核復(fù)制不同點(diǎn)：,1.真核中，引物及崗崎片段較小,2.真核中，同步合成組蛋白，形成核小體,3.真核中，在全部染色體復(fù)制完成以前，各ori不能開始下 一輪復(fù)制.,22,第二節(jié) DNA的損傷與修復(fù),一、DNA的損傷,復(fù)制過程中發(fā)生的DNA 突變,常見方式有四種：,1、嘌

23、呤?嘌呤（AT） 嘧啶?嘧啶（CG）,2、嘧啶?嘌呤,轉(zhuǎn)換（transition）,,,顛換（transversion）,,點(diǎn)突變point mutation,3.移碼突變（frame shift mutation） ：丟失or插入一個(gè)or 一段nts,4、鏈內(nèi)或鏈間發(fā)生共價(jià)連接 .如 T-T, C-T,C-C,23,二、DNA損傷的修復(fù),（一）光修復(fù)： 圖4-12 光復(fù)活酶（photolase）,24,（二）切除修復(fù)：

24、圖4-13,內(nèi)切酶切除損傷DNA ? DNA pol 1 填補(bǔ)空隙 ? DNA連接酶封口,主要修復(fù)方式,25,（三）重組修復(fù)（recombination repairing）,復(fù)制（損傷部位調(diào)過）?重組修補(bǔ)缺口（從另一DNA分子上移過來）?修復(fù)（正常DNA上的缺口補(bǔ)齊）,損傷面積較大DNA，先復(fù)制后修復(fù),26,http://news.39.net/txsdxbk/170426/5333152.

25、htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333144.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333139.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333136.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333132.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/

26、170426/5333103.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333052.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333047.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333044.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333030.htmlhttp://news.

27、39.net/txsdxbk/170426/5333027.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333014.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333007.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333002.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332985.ht

28、mlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332980.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332976.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332951.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332934.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/17

29、0426/5332894.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332879.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332864.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332830.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332761.htmlhttp://news.39

30、.net/txsdxbk/170426/5332756.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5332718.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339179.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339174.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170427/5339170.html

31、,（四）SOS修復(fù)（SOS repairing）,應(yīng)急修復(fù)機(jī)制,DNA損傷嚴(yán)重，細(xì)胞處于危急狀態(tài)?recA 蛋白酶被激活?水解lexA（抑制蛋白）?SOS修復(fù)酶系大量表達(dá),27,第三節(jié) 逆轉(zhuǎn)錄,指以RNA為模板，RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶以5＇?3＇方向合成與RNA互補(bǔ)的DNA鏈的過程。,一、 逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase),1970年在雞肉瘤病毒Rous中首次發(fā)現(xiàn),多功能酶:,A：具有RNA指導(dǎo)的DN

32、A Pol活性,沿5＇?3＇方向合成,需引物B：具有RNA 酶H(RNase H)活性,可特異水解RNA-DNA上的RNA.C：具有DNA 指導(dǎo)的DNApol活性,可以cDNA為模板合成互補(bǔ)NDAD：對(duì)DNA無(wú)3＇-5＇外切酶活性,所以無(wú)核對(duì)功能.,28,二、逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因組復(fù)制過程,逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因組為RNA,在宿主cell中必須轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA，才能進(jìn)行基因表達(dá)和基因組復(fù)制.,過程: 逆轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu),29,(1)以+RNA

33、為引物合成一小段(-)cDNA(5＇?3＇) 　?(2)RNase H活性切去DNA-RNA中的RNA 　?（3）DNA R與RNA3＇端R結(jié)合（第一次跳躍） ?(4) (-)cDNA合成(5＇?3＇) ?(5)RNase H除去DNA-RNA中的大部分RNA ?(6)合成一部分(+)DNA(5＇?3＇)包括PB- ?

34、(7)除去RNA(tRNA,RNA中的PB+區(qū)) ?(8)(+)、(-)股DNA中的PB-結(jié)合(第二次跳躍) ?,30,(9)合成剩余的(+)DNA(5＇?3＇)? 形成雙鏈DNA?可隨機(jī)插入宿主細(xì)胞染色體.,31,http://news.39.net/txsdxbk/170424/5327773.htmlhttp://news.39.net/txsdxb

35、k/170424/5327761.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327744.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327737.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327707.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327663.htmlhttp://new

36、s.39.net/txsdxbk/170424/5327644.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327635.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327621.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327610.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327604.

37、htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327603.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327594.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327592.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327586.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/

38、170424/5327581.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327580.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333306.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333297.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333282.htmlhttp://news.

39、39.net/txsdxbk/170426/5333268.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333239.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333235.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333212.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333206.ht

40、mlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333196.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333190.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333186.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170426/5333163.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/17

41、0426/5333154.html,32,http://news.39.net/txsdxbk/170425/5330359.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170425/5330331.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170425/5330326.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170425/5330300.htmlhttp://news

42、.39.net/txsdxbk/170425/5330294.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170425/5330233.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170425/5330159.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170425/5330157.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170425/5330156.h

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46、lhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327927.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327919.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327916.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327887.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170

47、424/5327875.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327869.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327822.htmlhttp://news.39.net/txsdxbk/170424/5327776.html,第四節(jié) RNA的復(fù)制,RNA復(fù)制酶(RNA replicase)：A：由四個(gè)亞基組成,只有一個(gè)為病毒產(chǎn)物B：缺乏校對(duì)